Hns对牡蛎机体超显微结构的影响研究

邵跃

（锦州市科学技术研究院，辽宁 锦州 121000）

海洋污损生物主要类群包括藻类、水螅、龙介虫、藤壶和海鞘等，具有代表意义的有牡蛎、紫贻贝等，它们会吸附在船舶、网箱、海底各种管道上，给生产和生活带来一定的经济损失[1]。

Hns（一种从植物中提取的毒性物质，其毒性和机理暂不清楚，暂称Hns）对生物的不同组织细胞都有一定的毒害作用。一定浓度的Hns对生物胁迫一定时间后，会造成细胞核肿胀、核膜消失或脱落、线粒体肿胀、线粒体含量增多等亚显微结构的病理变化[2]，严重时核膜消失，核降解，线粒体内脊崩解，细胞膜系统空泡化，溶酶体增多，而后减少。这样的变化会随着试验时间的延长而加剧，直到细胞枯萎死亡，说明Hns对牡蛎等海洋污损生物具有一定的防污作用。现通过研究Hns对牡蛎机体的超显微结构的影响，以了解Hns的毒性，进而确定Hns是否可成为新型低毒高效的防污试剂。

1 研究方法

1.1 试验材料

（1）生物。牡蛎，购自大连黄海海区黑石礁水产养殖场，壳长（8.0±0.5）cm，壳宽（6.0±0.5）cm，壳高（3.0±0.5）cm，洗去壳外污物。选取10枚大小均等的牡蛎在10 L水缸中驯化72 h，曝气，每天更换1/2新鲜海水。

（2）仪器。电子显微镜。

（3）药品。Hns（粗提物，由大连大学生物工程学院提供，母液10.000 g/L）。

1.2 试验方法

将牡蛎在ρ（Hns）为32 mg/L的海水中暂养7 d，以备实验用。取材时将贝壳打开，取外列鳃的中段，用生理盐水反复清洗后，放入2.5%的戊二醛（0.1 mol/L的磷酸缓冲液配制，pH值7.2）中，4℃冰箱固定12 h；后于0.1 mol/L磷酸缓冲液（pH值7.2）中用超声波清洗器震荡0.5 min，用0.1 mol/L磷酸缓冲液（pH值7.2）反复冲洗3次，每次15 min；再放入1%锇酸中固定12 h，而后用0.1 mol/L磷酸缓冲液（pH值7.2）反复冲洗3次，每次15 min。乙醇脱水，醋酸异戊酯置换，DX-1临界点干燥器干燥，IB-3离子溅射仪喷铂，扫描电镜观察并拍照。

2 结果与分析

2.1 生物表面超显微结构对比分析

在ρ（Hns）32 mg/L胁迫一周后，牡蛎的鳃丝发生脱落，牡蛎鳃表面的变化见图1（a）（b）（c）（d）（e）（f）。由图1可见，鳃丝脱落最终导致牡蛎的鳃微结构发生变化，使呼吸功能大大降低，进而说明Hns对牡蛎等海洋污损生物具有一定的防治作用。

图1 Hns对鳃的影响

2.2 生物内部超显微结构对比分析

在 ρ（Hns）32 mg/L胁迫一周后，牡蛎鳃组织细胞的亚显微结构发生了病理变化，如核膜肿胀、线粒体肿胀、内脊消失、溶酶体含量增多，细胞器边缘模糊变化，牡蛎鳃内部的变化见图2（a）（b）。

图2 Hns对鳃内部的影响

由图2可见，细胞核核膜出现了消失趋势，细胞核开始崩解，这样的病理变化会导致机体趋于死亡，手动刺激牡蛎的外壳，如发现外壳无闭壳现象，可判断为死亡。在 ρ（Hns）32 mg/L胁迫一周后，牡蛎肝胰腺内部的变化如图3（a）（b）。

图3 Hns对肝胰腺内部的影响

肝胰腺是贝类消化、代谢、解毒的主要组织器官。由图3可见，在一定的ρ（Hns）、一定时间的胁迫下，牡蛎肝胰腺组织结构发生了一定的病理变化。细胞核边际模糊，核膜破碎，细胞核开始分解，染色质颜色加深且分布不均匀，核降解，线粒体肿胀破碎。由此可知，Hns对牡蛎肝胰腺内部具有一定的影响。