藏药九味麝香丸抗炎及免疫干预作用研究*

米玛卓嘎 赛悟杰 次仁德吉 扎西琼达

（西藏自治区藏医院科研处，西藏 拉萨 850000）

藏药九味麝香丸系以19世纪藏医名家贡追·云登加措所著《临床札记·札记精粹》[1]中的藏药九味黑药丸为基础，根据疫病发病机制和临床表象，在名老藏医专家贡觉旺堆指导下，按照藏医辩证施治、临证加减配方的用药指导原则，通过西藏自治区藏医院专家论证后确定。该配方由麝香、诃子、牛黄等九味药材组成，具有消炎、镇痛、祛风之功效，用于各类疫病包括其他炎症性疾病引起的头痛、发热、咳嗽，正气不足，亦可用于中风、炭疽等病症。可内服也可外用，既可单独使用，也可与其他药物搭配使用。本文采用经典药效学方法，研究藏药九味麝香丸的抗炎和免疫干预作用，以期为临床用药提供药效学依据。

1 材料和方法

1.1 试验药物

1.1.1 供试药物藏药九味麝香丸为诃子、牛黄、麝香等九种药材粉碎后制成的水泛丸，由本院制剂室自制，批号20200310，制剂规格为0.9g～1.1g/10 丸。临用称取适量药丸，粉碎，加水研磨配至所需浓度即为试验样品。

1.1.2 阳性对照品。醋酸地塞米松片，浙江仙琚制药股份有限公司，批号：170826；盐酸左旋咪唑，山东仁和堂药业有限公司，批号：170407；环磷酰胺，百特国际有限公司，批号：7J194A；玉屏风颗粒，国药集团广东环球制药有限公司，批号：191123。

1.2 动物

SPF 级昆明种小鼠220 只，雄性160 只，雌性60只，试验体重18g～22g，四川省中医药科学院实验动物中心生产，生产许可证号：SCXK(川)2018-19；豚鼠，6只，雌雄各半，体重250g～350g，成都达硕实验动物有限公司；公鸡，市售。

1.3 主要试剂

二甲苯，成都市科龙化工试剂厂，批号：2017 022701；乌来糖，成都科龙化工试剂厂，批号：20 130323；戊巴比妥钠，sigma，批号：93ET2904K；DNFB，SIGMA，批号：BCBH8982V；文齐氏液，天津市现代高科技研究院中山研究所，批号：20 190415；一水葡萄糖，成都市科龙化工试剂厂，批号：2014 082701；氯化钠，成都市科龙化工试剂厂，批号：20 120504；二水合柠檬酸三钠，成都金山化学试剂有限公司，批号：20 130328；一水合柠檬酸，成都金山化学试剂有限公司，批号：20 140112；氯化钠注射液，安徽丰原药业股份有限公司淮海药厂，批号：181022107。

1.4 主要仪器

电子天平LD6100-1，d=0.1g，沈阳龙腾电子有限公司；电子天平，BSA223S，d=1mg，赛多利斯；移液枪，5uL～50uL，Finnpipette；离心机，Centrfuge5430，eppendorf；全波长扫描式多功能读数仪，Varioskan Flash，Thermo。

1.5 方法

1.5.1 对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响[2-3]KM小鼠50只，雄性，动物按体重分层随机均分为5 组，每组10只，分别为模型对照组、醋酸地塞米松片组（2.466mg/kg）、九味麝香丸高剂量组（0.20g/kg）、中剂量组（0.10g/kg）和低剂量组（0.05g/kg）。按0.1mL/10g 灌胃给予供试品、对照品或纯水，每日1 次，连续7 日。末次药后40min，于小鼠右耳两面涂抹二甲苯25uL，20min 后20%乌来糖生理盐水溶液按25mL/kg腹腔注射处死动物。沿小鼠耳廓基沿剪取左右两耳，称重，计算肿胀度（右耳重量-左耳重量）和肿胀抑制率（（模型对照组平均肿胀度-受试组或其他对照组平均肿胀度）/模型对照组平均肿胀度）。[2-3]

1.5.2 对小鼠棉球肉芽肿生成的影响[4]KM 小鼠50只，雄性，动物按体重分层随机均分为5 组，每组10 只，分别为模型对照组、醋酸地塞米松片组（2.466mg/kg）、九味麝香丸高剂量组（0.20g/kg）、中剂量组（0.10g/kg）和低剂量组（0.05g/kg）。给药首日，小鼠用80mg/kg戊巴比妥钠麻醉后于左右腋下植入消毒棉球（5mg）各一粒。按0.1mL/10g 灌胃给予供试品、对照品或纯水，每日1次，连续7日。末次给药后1h，20%乌来糖生理盐水溶液按25mL/kg 腹腔注射处死动物，取出左右腋下棉球在60℃烤箱放置12h 后称重，以给药后棉球的干重减原棉球重量作为肉芽肿的干重。[4]

1.5.3 对DNFB 所致小鼠迟发超敏反应的影响[5]KM小鼠60 只，雌雄各半，动物分性别按体重分层随机均分为6 组，每组10 只，分别为空白对照组、模型对照组、玉屏风颗粒组（3.08g/kg）、九味麝香丸高剂量组（0.20g/kg）、中剂量组（0.10g/kg）和低剂量组（0.05g/kg），按0.1ml/10g 灌胃给予供试品、对照品或纯水，每日1次，连续13 日（D1-D13）。于给药第8 天（D8）小鼠腹部皮肤去毛，面积约2cm×2cm；第9 天（D9）给药后1小时，除空白对照组外，以2%DNFB 溶液25ul 涂抹于腹部，隔天增强再同法涂抹一次，空白对照组代以1：1丙酮-花生油溶液。给药第13日（D13）药后1小时，取10uL 2%DNFB 溶液涂抹小鼠右耳；24 小时后腹腔注射乌来糖处死小鼠，沿耳廓线剪下鼠耳，称重，计算耳肿胀度；取胸腺和脾称重，计算脏器系数。[5]

1.5.4 对鸡红细胞所致小鼠溶血素生成的影响[6]KM小鼠60 只，雌雄各半，动物按体重分层随机均分为6组，每组10只，分别为模型对照组、免疫低下模型对照组、盐酸左旋咪唑组（20.55g/kg）、九味麝香丸高剂量组（0.20g/kg）、九味麝香丸中剂量组（0.10g/kg）、九味麝香丸低剂量组（0.05g/kg）。按0.1mL/10g 灌胃给予供试品、对照品或纯水：除阳性对照组外，均为每日1次，连续13 日（D1-D13）；阳性对照组D7-D9 每日1次、连续3日给予盐酸左旋咪唑悬液，其余时间给予纯水，每日1次。给药第7日（D7）以5%鸡红细胞混悬液腹腔注射0.2mL/只进行免疫；免疫结束前2 天（D10，D11），除模型对照组外，其余各组小鼠以环磷酰胺造模两次，剂量为每次30mg/kg。免疫第7 天（D13），小鼠眼眶采血20uL/只，加入已盛有1mL 生理盐水的试管中，再分别加入4%鸡红细胞生理盐水混悬液和10%豚鼠血清0.5mL，充分混匀，置37℃恒温水浴箱中反应。0.5h 后取出并置冰水浴中以终止反应。待试管冷却，离心，取上清液1mL，加入3mL 都氏液，放置10min后在540nm 处比色，以上述都氏液为空白调零，测定各管光密度。[6]

1.5.5 统计方法。采用SPSS23.0 对结果进行统计：结果以均数和标准差（）描述；如符合正态分布，进行单因素方差分析，否则进行K-W 非参数检验；单因素方差分析时，如方差齐性，采用LSD 检验，如方差不齐，采用Tamhane's T2检验。显著性水平α=0.05。

2 结果

2.1 对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响结果

九味麝香丸0.20g/kg、0.10g/kg组耳肿胀度降低，与模型对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01，P＜0.05），肿胀抑制率分别为32%和20%，提示该剂量九味麝香丸具有抑制急性炎症药效。

表1 九味麝香丸对二甲苯所致小鼠耳肿胀试验的影响（n=10,）

表1 九味麝香丸对二甲苯所致小鼠耳肿胀试验的影响（n=10,）

注：与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

2.2 对小鼠棉球肉芽肿生成的影响

九味麝香丸0.20g/kg 组肉芽干重降低，与模型对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05），提示该剂量九味麝香丸具有抑制亚急性炎症药效（结果见表2）。

表2 九味麝香丸对小鼠棉球肉芽肿试验的影响（n=10,）

表2 九味麝香丸对小鼠棉球肉芽肿试验的影响（n=10,）

注：与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

2.3 对DNFB所致小鼠迟发超敏反应的影响

九味麝香丸0.20g/kg 组耳肿胀度和肿胀率均增高，与模型对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）；0.10g/kg 组肿胀率增高，与模型对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01）；对胸腺和脾则未见明显影响。该结果提示九味麝香丸在上述剂量具有增强细胞免疫反应的作用（结果见表3）。

表3 九味麝香丸对DNFB所致小鼠迟发型超敏反应的影响（n=10,）

表3 九味麝香丸对DNFB所致小鼠迟发型超敏反应的影响（n=10,）

注：与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

2.4 对鸡红细胞所致小鼠溶血素生成的影响

免疫低下模型对照组OD 值显著降低，与模型对照组比较差异有统计学意义，提示免疫低下模型复制成功；九味麝香丸各剂量灌胃给予13 天，组间差异无统计学意义（结果见表4）。

表4 九味麝香丸对鸡红细胞所致小鼠溶血素生成试验的影响（n=10,）

表4 九味麝香丸对鸡红细胞所致小鼠溶血素生成试验的影响（n=10,）

注：与免疫低下模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

3 讨论

藏医典籍《四部医典》中将传染性、流行性疾病称为“年仍奈”，即疫病。“年仍奈”具有发病急骤、病情危笃，传播速度快，易于流行扩散等特点。藏医学认为，“年仍奈”属于热病范畴，具有总体症状和具体症状两大类。总体症状分未成型、扩散和空虚三种，发病初期呈现早期热症（未成熟型热症），可出现寒颤、肌肉和关节酸痛、全身乏力、头痛等症状，类似于SARS、甲型H1N1、禽流感、新型冠状病毒感染肺炎等传染性疾病特有的发热合并症状。藏医在疫病治疗方面，首先主张要毁其疫毒之峰，再降热毒之凶，后行调气补身。早期治疗，首选具有解毒、消炎、清肝火、治腑热之功效的药物[1]。藏药九味黑药丸是藏医防治疫病的经典古方，藏医通常将其制作为香囊，通过药物的挥发气味对鼻腔和呼吸道黏膜进行刺激，激发人体的防御力和调节机制，达到预防呼吸道传染病和治疗疾病的效果。［1］藏药九味麝香丸是在藏药九味黑药丸基础方药上，通过名老藏医专家贡觉旺堆指导，按照藏医辩证施治、临证加减配方的用药指导原则，经西藏自治区藏医院专家论证确定后形成的配方，具有消炎、镇痛、祛风之功效，口服用于各类疫病包括其他炎症性疾病引起的头痛、发热、咳嗽，正气不足，亦可用于中风、炭疽等病症。外用可用于局部抗炎。

本研究以二甲苯所致小鼠急性炎症模型和棉球皮下植入所致小鼠亚急性炎症模型，分别考察九味麝香丸对不同类型炎症的抗炎效果。结果显示，藏药九味麝香丸既可抑制炎症急性期的水肿、渗出，也能抑制慢性炎症所致组织增生，具有明确的抗炎作用，这与其临床应用于一些传染性疾病早中期相吻合。

此外，尚通过DNFB 所致小鼠迟发超敏反应和鸡红细胞所致血清溶血素生成试验以分别考察藏药九味麝香丸对细胞免疫和体液免疫的影响。结果表明，藏药九味麝香丸对细胞免疫有显著的促进作用，对体液免疫影响相对较弱，该作用也有助于临床易感患者的免疫保护。

总体而言，藏药九味麝香丸兼具抗炎和免疫增强作用，对于各类“年仍奈”可能具有广泛的临床应用价值。