小熊猫槽盘吸虫感染病理观察

王运盛，吴秀山，赵素芬，普天春，卢 岩,2，张成林,2*

（1.北京动物园，北京 100044；2.圈养野生动物技术北京市重点实验室，北京 100044）

小熊猫（Ailurus fulgens）为亚洲特有物种，过去几十年受栖息地大规模减少以及人类狩猎活动的影响，该物种的种群数量减少了40%，全球种群约为10 000只，已被列入IUCN红色名录的易危级别，严格禁止交易[1,2]。中国圈养小熊猫已有60多年历史，临床上小熊猫常发生外伤、甲沟炎、蛇伤等外科疾病，细菌性胃肠炎、消化不良、排黏、热射病等内科疾病，以及恶心丝虫、球虫、肺线虫、蛔虫、疥螨、蜱虫、吸虫等寄生虫病[3]。

槽盘吸虫隶属于背孔科（Notocotylidae）、槽盘属（Ogmocotyle），多见于绵羊、山羊、羚羊、鹿、林麝、麅、大熊猫、小熊猫等，主要寄生在小肠内，虫体腹面从头到尾中间凹陷，两边翘起，形似槽状，从而得名槽盘吸虫。槽盘吸虫病（Ogmocotylosis）是危害小熊猫健康及生存的一个重要因素。邬捷（1959年）[4]、危碎凡（1965年）[5]等先后报告在小熊猫体内发现了印度槽盘吸虫（Ogmocotyle indica）。随后，绵阳市动物园、南宁动物园工作人员进行野生动物寄生虫普查时发现小熊猫槽盘吸虫感染率分别达67%和50%[6]。对于严重感染致死病例，小肠漂洗获得的印度槽盘吸虫虫体数目达18 600条以上[7]。临床上，对圈养小熊猫饲养和管理带来了极大挑战。北京动物园兽医院收检死亡小熊猫1例，经粪检发现大量槽盘吸虫，根据检出吸虫形态，兽医诊断槽盘吸虫可能是致死该小熊猫的重要病因。本研究采用组织病理学方法观察小熊猫感染槽盘吸虫后各器官组织的病理学变化，以期为小熊猫寄生虫病诊断和治疗提供基础数据。

1 材料与方法

1.1 病料

病死小熊猫1只。

1.2 方法

1.2.1 剖检及病理组织学检查 剖检发病死亡的小熊猫，观察其病理变化，采集心、肝、脾、肺、肾、肠、胰腺等组织，迅速投入10%的福尔马林进行病理组织切片前处理。

1.2.2 槽盘吸虫镜检 采集病料小肠内容物，置入粗制尼龙网内，生理盐水冲洗，待冲洗液清亮后，将滤渣内虫体制作压片，体视镜下观察。同时，挑取肺脏结节内虫体，制作压片，体视镜下观察虫体结构。

1.2.3 HE染色 石蜡切片分别经二甲苯脱蜡，无水乙醇、9 5%乙醇、8 5%乙醇、7 5%乙醇、50%乙醇梯度复水，下行至双蒸水中，苏木精染色10 min，1%盐酸酒精分色数秒，水洗返蓝15 min，依次通过50%乙醇、75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇梯度脱水后，伊红染色1 min，95%乙醇洗涤，再经无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。切片放置于37℃温箱内过夜烘干后镜检。光学显微镜下观察组织病理学变化情况。

2 结果

2.1 病理变化

剖检病死小熊猫，肺组织充血，肺边缘出血明显，肺表面可见米粒大小灰白色结节（见图1A、1B）；心肌质软、塌陷，心外膜可见散在出血点；肾髓质、大盏充血，脾颜色不均、质地硬实、边缘淤血；肠道鼓胀，肠系膜淋巴结红肿；对小肠内容物及肺内虫体压片，体视镜观察，槽盘吸虫虫卵呈卵圆形，具有两层卵壳，卵的两极各具有1根卵丝，其中一极卵丝较为粗大，另一极卵丝相对细小，卵内充满已经发育的卵细胞（见图1C）；槽盘吸虫虫体呈长叶形，两端钝圆，两侧向体腹面卷折，虫体两边翘起，前部狭弯如钩状，后部膨大而钝圆；雄茎囊呈弧形横卧于虫体前半部，生殖孔开口于虫体亚中部，阴茎伸出孔外；睾丸具有大量分瓣，形如香肠状、豆状或不规则的长卵圆形，卵黄腺分布于虫体后1/3处，根据虫卵及虫体形态，判定感染小熊猫槽盘吸虫（见图1D）。

图1 小熊猫剖检观察

2.2 病理学观察结果

脾：低倍镜下观察可见脾脏组织被膜增厚，动脉充血，红髓中大量红细胞浸润；高倍镜下观察脾脏部分区域网状细胞大量增生，含铁血黄素沉着。心肌：低倍镜下观察心肌纤维排列松散；高倍镜下可见心肌细胞颗粒变性，细胞间充斥多量红细胞，心肌出血；部分心肌束出现断裂。肠道：未见明显病理变化。胰腺：低倍镜下观察胰腺各组织结构基本正常；高倍镜下观察发现胰腺细胞肿胀，细胞颗粒变性明显，部分区域细胞由颗粒变性转变为水泡变性，胰腺组织向水肿方向发展。肾：低倍镜下肾小管上皮细胞萎缩，脱落，体积缩小，肾小管管壁变薄，管腔变大，肾小球呈分叶状；高倍镜下，远曲小管和近曲小管部分上皮细胞颗粒变性、肿胀且脱离基底膜；脱落的上皮细胞发生坏死崩解，仅残存细胞轮廓；肾小球毛细血管充血，肾小囊明显扩张，在肾小管之间可见大量红细胞。肝：低倍镜下观察肝索排列紊乱，肝淤血、出血，大量红细胞崩解，含铁血黄素沉积，呈棕黄色点状分布于组织内。高倍镜下观察肝细胞颗粒变性。肺：病理学观察取材样本呈两种表现，一种为低倍镜下观察肺泡间隔显著增宽，肺泡正常结构消失；高倍镜下观察增宽的间质中淋巴细胞、巨噬细胞浸润，肺泡间隔、小叶间隔内血管充血、出血；另一种为间质性肺炎，未发生间质性肺炎区域可见肺组织结构较为完整，但在肺泡中发现寄生虫体（见图2A）；油镜下观察可见寄生虫体嗜碱性深染（见图2B）。

图2 小熊猫病理学观察

3 讨论

我国境内发现的槽盘吸虫以印度槽盘吸虫、鹿槽盘吸虫、福建槽盘吸虫和小熊猫槽盘吸虫最为常见[8]。其中，印度槽盘吸虫广泛分布于我国甘孜、阿坝、凉山、雅安等地，尤以汉源县绵羊的感染率及感染度最高，在四川羚羊、陕西大熊猫、广西黑山羊小肠内可以检测到鹿列叶吸虫，且主要寄生在宿主小肠内[3,9,10]。南京某动物园死亡小熊猫小肠内因寄居大量印度槽盘吸虫，致使肠道多处出现肉芽肿，造成机体消瘦、抵抗力下降，引起死亡[11]。据报道，寄生于小熊猫体内的吸虫至少有两个虫种，即印度槽盘吸虫和小熊猫槽盘吸虫。印度槽盘吸虫的雄茎囊纵置于虫体中部的1/3处，睾丸肾形或椭圆形，表面光滑；小熊猫槽盘吸虫的雄茎囊呈弧形横卧于虫体前半部，睾丸分叶[8]。本研究采集病死小熊猫肠道内虫体，显微镜下观察，镜检其雄茎囊呈弧形横卧于虫体前半部，生殖孔开口于虫体亚中部，阴茎伸出孔外，睾丸具有大量分瓣，形如香肠状、豆状或不规则的长卵圆形，因此判定该病例感染的是小熊猫槽盘吸虫。

目前对小熊猫槽盘吸虫的确诊多通过收集肠内容物、经水洗淘虫等方法，缺少病理组织学的系统观察及描述。本研究中，在病死小熊猫小肠内容物中检出大量虫体，可见消化道是列叶吸虫的一个重要寄生部位，但镜检肠道组织结构相对完整，没有出现吸虫寄生引起的肠道病理学变化。同时，本研究在小熊猫肺泡腔内检测到大量槽盘吸虫虫体，这一现象国内外鲜有资料报道，槽盘吸虫这一寄生特性及生活史是否与小熊猫物种特殊性有关尚不清楚，槽盘吸虫的肺内寄生原因很难确定，还需要进行更深入的研究。本研究中小熊猫槽盘吸虫感染的病理组织学系统观察是对小熊猫列叶吸虫病资料的一个补充，特别是小熊猫肺部寄生槽盘吸虫的病理学观察，为该寄生虫的生活史研究提出了新的思路。