美国国家禽流感监测计划——第二部分：监测计划、数据管理和分析（一）

译校│翟新验 刘林青（中国动物疫病预防控制中心）

王慧强（北京市动物疫病预防控制中心）

NAISS、AI监测是通过多种渠道进行的，主要目标是监测不同种类的易感禽类。本部分主要讲述不同的监测对象和相应的监测类型。NAISS的组成主要分为以下四类：国家家禽改良计划（NPIP）；活禽交易市场体系（LBMS）LPAIH5和H7的预防控制；庭院养殖家禽；迁徙候鸟和滨鸟。

动植物卫生检疫局（APHIS）主要依靠各州和一些商业项目对国内家禽进行监测，努力去获得更多的信息，这些信息是各个州对AI的监测信息，主要是通过联盟、合伙企业和政府机构、私人企业合作获得。所有这些活动都会产生有效的监测数据，这些数据可能来自结构化的群体调查或是非随机的数据来源。

一、美国家禽改良计划（NPIP）

1.蛋鸡、肉鸡和火鸡。AI主动实验室监测是在NPIP要求下进行的［根据联邦行政法规（CFR），第9卷，第145部分条款规定］。这个计划提出了一个“美国禽流感净化方案”，分别用于蛋鸡和肉鸡AI净化，对于火鸡，该计划对养殖户有奖励措施。这些主动监测目的是为雏鸡、幼禽和种蛋用于州际和出口贸易提供合格证明。这个计划明确了各州、禽场、孵化场和经销商要达到计划中所规定的疫病控制标准。因此，消费者可以买到无特定病原体的家禽或者在适当疫病控制条件下饲养的家禽。NPIP工作人员每年都会公布参与此计划的成员，并将成员名单提交给美国动物卫生协会（UAHA）。

对于原种家禽，在4月龄对每个禽群抽取30羽进行检测，然后间隔90天再检测一次。对于扩繁家禽，4月龄对每个禽群抽取30羽进行检测，并且间隔180天再检测。达到计划规定标准，实现禽群AI净化或AIH5/H7净化状态时，政府予以奖励。每个禽群抽取30羽家禽，是在95%置信度下，流行率未达到10%或更高情况（Cannon和Roe，1982）。假定试验十分敏感，则随机选取家禽采样，病原体在家禽中分布也是随机的，检测方法和监测手段将在下面数据来源部分介绍。

2.水禽、展览禽和猎鸟群。CFR第9卷第145.53部分提及对用于放生或者展览用途的饲养家禽及猎鸟LPAI监测，同样也属于“H5/H7禽流感净化方案”中的对象。对于水禽、展览禽和猎鸟群，在4月龄时对每个禽群抽取30羽进行检测，间隔90天再检测。达到计划规定标准，实现禽群AIH5/H7净化状态时，政府予以奖励。每个禽群抽取30羽家禽，是在95%置信度下，流行率未达到10%或更高情况（Cannon和Roe，1982）。假定试验十分敏感，则在家禽中随机采样。

NPIP根据收到的公众意见合理添加关于水禽、展览禽和猎鸟群AI检测条款，于2006年9月第38届NPIP会议上通过补充此条款，给出对象定义如下。

饲养目的是放生的高地猎鸟：例如雉鸡、鹌鹑、鹧鸪，饲养在一定区域，饲养不是为了繁殖。

饲养目的是放生的水禽：饲养在保护区内的水禽，饲养不是为了繁殖。

商业水禽或高地猎鸟：例如驯化的鸭、鹅、雉鸡、鹌鹑、鹧鸪等，饲养在一定区域，饲养目的是生产肉产品供人类消费。

NPIP增加对用于放生的高地猎鸟和水禽、商业水禽和高地猎鸟实行“H5/H7禽流感监测”策略。该策略一旦确定，将相关规定和监测程序列入CFR第9卷第146.53部分。对于饲养目的是放生的养殖场，每90天必须对禽群抽取30羽进行H5/H7AI检测。对于商业水禽和高地猎鸟，屠宰场必须对该批次抽取11羽家禽进行H5/H7AI检测，也可在屠宰前21日内抽取11份样品进行H5/H7禽流感检测，抑或者执行经过州政府机构和APHIS批准的持续性主动和被动监测计划。

在发布这些规定之前，2006年财年（FY），APHIS和部分州政府达成协议，开始对用于放生的高地猎鸟（NPIPCA）和用于放生的水禽（LBMSCA）进行监测。为了能接触到这类禽群，州农业部门与有狩猎野鸟资格的野生动物保护机构、猎鸟农场及美国北部猎鸟协会将进行广泛而紧密合作，根据合作协议，每个季度向州官方机构报告一次监测结果。

3.商业肉鸡和蛋鸡。根据2006年9月26日公布的临时规则，NPIP已经修改相关规定，建立了商业家禽防控LPAIH5/H7自愿性程序，在CFR第9卷增加146条款。参加新的NPIP提倡的防控LPAIH5/H7行动的家禽行业仍然是自愿的，防控程序包含3个方面：LPAIH5/H7主动监测、被动监测、应急响应与控制方案。

计划中提及的主动监测（CFR第9卷第146部分，LPAIH5/H7自愿防控方案）包括对商业蛋鸡、肉鸡和产肉火鸡的监测。商业蛋鸡，每12个月一次对每个禽群检测11羽家禽或11枚鸡蛋，或者对于存栏超过75000羽家禽的养殖场，在禽群处理前30天对每个禽群检测11羽家禽或11枚鸡蛋。商业肉鸡，在屠宰时每批次检测11羽肉鸡，对于每个星期屠宰超过200000羽肉鸡的屠宰场，在肉鸡屠宰前21天内检测11份样品。商业肉火鸡，对年屠宰量超过200万羽的联邦检疫的屠宰场，每月从超过10周龄的火鸡群中抽取有呼吸道症状的60羽火鸡进行检测。达到计划H5/H7监测标准，给予奖励。每个禽群抽取11羽家禽，是在95%置信度下，流行率未达到25%甚至更高情况（Cannon和Roe，1982）。假定试验十分敏感，随机选取家禽采样，病原体在家禽中分布也是随机的。检测策略和监管将在以下数据来源讨论部分介绍。

上面提到的NPIP 法规公布之前，全国肉鸡理事会自愿发起了一个行动。目前，37家企业在屠宰前两周内采样并检测所有肉鸡。这大约可以代表美国98%肉鸡生产量。随着NPIPH5/H7防控计划的发布，公司在NPIP的指导下积极参与，将大大提高NPIP计划在国际的影响力。希望至少有90%符合计划规定标准的商业养殖企业会参与到计划中。种禽场参与率与此接近，其中肉鸡和火鸡的公司100%参与到计划中。按照计划的监测要求，只要有90%的参与率就可以完成计划目标。

4.数据来源。48个州都建立了NPIP计划，因为阿拉斯加和夏威夷没有大型商业养殖场，所以没有NPIP计划。各个州对试验数据的管理是独立的，是自愿参与到NPIP计划的。

所有NPIP 的检测工作都要在NPIP官方授权的实验室进行，可以是州实验室或私人/企业实验室，所有NPIP官方授权实验室都要向州官方授权机构报告监测数据。USDANVSL人员需立即向州和联邦的监管兽医官员报告发现的NAI阳性结果。

各州收到NPIP合作资金可用于向APHIS兽医局地方办公室提交季度LPAI报告。这份报告汇总某一NPIP项目的监测数据（例如：参与监测的蛋鸡数量；肉鸡和火鸡屠宰场；蛋用和肉用种禽群；火鸡繁育群；水禽、展览禽和高地猎鸟；采样和检测样品的数量；检疫数量）。各州官方机构每年会向国家NPIP办公室报告检测数据，这些数据由APHIS数据收集系统保存。现在，参与这一方案的州官方机构也可通过NPIP方案保留数据。APHIS流行病学和动物卫生中心（CEAH）人员为NPIP开发了一个模块促进AI监测数据的整合。

目前，NPIP并没有提供整个家禽养殖业养殖数量的准确数字。因此，很难评估参与这个计划的家禽数目的比例，同样亦很难确认这些数据在整个国内家禽行业的代表性。另外，我们只是向国家NPIP每年报告一次数据，NPIP员工每年在当地NPIP数据库中输入新数据。由于可利用资源的局限性和各州上报国家项目办公室的数据延迟，通过这个数据收集系统及时评估监测数据是比较困难的。上面提到新开发的NPIP数据收集系统模块，通过改进数据收集过程的时效性和可靠性，可实现NPIP报告系统的信息化，为授权的项目参与者、州机构和APHIS提供在线工具。由于一些数据的敏感性将保留在NPIP项目中，选择一些概要性数据上传至家禽卫生监测数据库（AVHS）。来自NPIP报告系统的其他数据经过授权的官方机构评估和批准后才会转发AVHS。

由NPIP 授权实验室检测获得的数据会提供给AVHS作为概要数据，由NAHLN授权实验室检测获得的数据是动物个体层面的，这些提供给授权参与者的特定数据是不同的，这主要取决于他们在国家禽流感监测计划（NAISS）中扮演的角色。

所有H5/H7亚型假定阳性的后续调查数据都会输入到APHIS应急管理响应系统（EMRS）。任何疑似HPAI病例数据都将录入到EMRS，而不是AVHS中。

5.数据分析和解释。NPIP监测策略在有限的检测和设定样本量的基础上是有效的。然而，检测抗原的试验程序也只是提供禽类的排毒时间（一般是暴露后的7～14日）。检测抗体血清学试验可提供被检测禽类感染后数周到数月的抗体水平，而不仅是免疫响应发生最近的7～14天。检测程序的局限性，可以通过以下方式解决，病毒感染家禽可循环传播一段时间，所以血清抗体阳性和抗原阳性禽都可检出。

实验室监测采样方法对于监测HPAI实用性不强，因为检测间隔时间要几个月，但通过观察监视家禽中的高死亡率和发病率一般就能发现HPAI的存在。低致病性NAI病毒一般不引起明显的临床症状，所以只能选择实验室监测手段。通常认为，LPAI对家禽行业和公共卫生造成的直接影响较小，监测策略需集中检测家禽中有可能会突变成为HPAI的流感毒株。

表1 活禽交易市场采样方法

对于一些只引起轻微临床症状的HPAI或低致病性H5/H7病毒，实验室检测是惟一有效的手段。如果检测疫病流行率高（一般禽群达到25%），实验室主动监测对发现疫病有很高的可信度。但是检测窗口期和采样间隔是一样的，每180天采集一次样品，3个月内的时间段就不能持续检测，因此采样时间间隔应少于3个月。

由于大部分小规模高价值的养殖场不在NPIP采样计划内，很少有关于这部分养殖场的实验室监测信息。主要是通过被动监测手段（向诊断实验室或兽医人员送检死禽）和主动的观察监视手段，相信这些养殖场中大部分（不是全部）都会每天观察禽群发病情况。因为禽群的高价值，养殖者很可能会主动寻求帮助，所以对HPAI发现窗口期和大型养殖企业是一样的。但是这类养殖场的生物安全管理措施以及对AI预防控制就没有大型养殖企业那么规范。很多时候，这些养殖场可能会进行户外饲养，在某些场的家禽甚至可以接触到水禽或迁徙野鸟。尽管国家AI监测计划是以产业经济价值为导向，样品采集和病例报告都是自愿的，但检测出阳性NAIH5/H7阳性的实验室需将样品递交至NVSL做进一步确诊。

部分小规模高价值养殖场饲养水禽（例如鸭和鹅），这类家禽感染AI或亚洲HPAI后，一般不会表现出明显的临床症状，而且其死亡率也比其他家禽低（Hulse-Post等，2005；Sturm-Ramirez等，2005）。这将会增加鸭和鹅感染AI的风险，降低了被动监测和主动观察监测的有效性。所以必须要采用主动的实验室监测手段对这些水禽进行监测，以期早发现亚洲HPAI病毒的存在（Tumpey等，2002）。

应用当前的检测手段可以发现小规模高价值养殖场中发生的HPAIH5N1，但最糟的情况是，在检测发现之前，AI疫情有可能会持续几个星期或者传播给多种家禽。因此，加强监测有利于及早发现疫情，减少损失。APHIS兽医局现在采用的监测，类似于饲养高密度小规模高价值生产群。当地饲养密度高的地区，一旦选定了饲养密度高的小型高价值养殖场，就将会对这些养殖场采取主动观察监测和实验室主动监测手段。

二、LBMSLPAIH5和H7预防控制

对LBMS的监测主要涉及三个方面：生产环节、配送系统和活禽交易市场。多采用AGID和RRT-PCR方法检测生产环节禽群。RRT-PCR或病原分离方法用于评估从配送系统和市场环节收集的样品，病毒分离用于环境样品，见表1。

环境样品包括来自地板、排水沟、屠宰区和安置家禽地方的棉拭子。各州依据APHIS兽医局项目标准建立采样方案。目前，共有31个州签订了参与LPAI-LBMS监测项目的合作协议。

1.数据来源。目前已有31个州建立了自愿参加的H5/H7LPAI-LBMS监测项目，已延长至2007年财年，类似于自愿参加NPIPH5/H7监测项目，各个州收集数据并保存检测结果，每季度向USDAAPHIS地区办公室提供总结性报告。随后这些报告就会录入到保存地方数据的主系统中，然后再传入到AVHS中，USDA地区办公室为LBMS项目保存这些数据。报告的效率有差异，有的是纸质版报告，有的是电子版报告。最近，开发了电子监测报告工具，并要求每个州向地区办公室报告时使用。

2.数据分析和解释。1987年以后，对LBMS进行了广泛的监测以发现流行的病原，2003年对监测行动进行了总结（Senne等，2003）。1994年之后，每年从美国东北部活禽交易市场采集1457～8120份气管和泄殖腔拭子进行检测并分离病毒。1994——2003年，美国东北部活禽市场每年可以分离到30～808株H7N2AI病毒（Senne等，2003）。另一份是关于纽约市场和新泽西市场的检测报告，AI检出率分别达60%（49/81）和43%（12/28）（Henzler等，2009）。

2004年美国国家动物卫生监测系统（NAHMS）关于LBMS生物安全管理措施的报告发现，美国北部活禽市场的监测活动更加频繁；2004年3月至2005年3月，98.4%的市场至少已经检测过一次，86.4%的市场至少检测过4次。在美国南部，约有83.1%的市场至少已经检测过一次，18%的市场至少检测过4次。那些每年只检测一次的市场未检出H5/H7AI病毒，美国北部市场检测出LPAIH5/H7场点阳性率为14.6%，南部市场全年没有检测出H5/H7阳性。

活禽交易市场的监测结果表明，通过监测可检测出H5/H7AI病毒，但并不是每次AI暴发都能检测到。数据同样表明，每年对市场进行一次监测很难发现有感染的，但每年若能进行多次检测则能检测到病毒。这说明市场每年要进行至少两次以上的监测，统一的采样频次标准有利于及时发现活禽市场LPAIH5/H7。参与州至少每3个月（甚至更频繁）对销售商、零售市场检测一次，向市场供应禽只的饲养场每个月都要检测。

3.对LBMS其他方面的监测。根据新实施的合作协议，要求每个州向USDA作一次关于整个活禽交易市场各个环节的季度报告，包括接受检查和检测的生产单位数量、销售单位数量和市场单元数量，按检测类别及群体，估算要检测的场点。这样的采样策略能够检测到大部分存在的AI病毒，但由于当前监测平台不够完善，还未能及时评估数据。所有经实验室检测为阳性的NAI，NVSL都需要立即向州和联邦监管官员汇报，然后由USDA上报OIE。