狍子铜绿假单胞菌感染病理学诊断

2021-05-29王运盛国欣欣赵素芬朱云芸李祥翔范晰琳普天春张成林

现代畜牧兽医 2021年5期

王运盛，国欣欣，赵素芬，朱云芸，李祥翔，范晰琳，普天春*，张成林，*

（1.北京动物园，北京100044；2.圈养野生动物技术北京市重点实验室，北京100044）

狍子（roe deer）又名狍，为偶蹄兽、鹿科的小型鹿类。狍子具有食量少、耐寒、抵抗力强等特点。近年来，狍子作为特种养殖动物，数量不断增加。狍子深受游客喜欢，我国动物园圈养狍子数量也逐年增多。虽然狍子抗病力较强，但随着饲养量的增加，常见多发病也随之增多[1]。北京动物园兽医院收检死亡狍子1例。该动物生前因外伤致下颌部大面积感染，经治疗无效死亡；死后进行致病微生物培养及鉴定，该狍子感染铜绿假单胞菌。本研究采用组织病理学方法观察其主要器官组织病理学变化，以期为狍子疾病诊断和治疗提供参考。

1 材料与方法

1.1 病料来源

病死狍子1只。

1.2 试验方法

1.2.1 剖检及病理组织学检查

剖检发病死亡的狍子，观察其病理变化。采集心、肝、脾、肺、肾、肠、胰腺等组织，迅速投入10%的福尔马林溶液，进行病理切片前处理。

1.2.2 H.E.染色

石蜡切片分别经二甲苯脱蜡，无水乙醇、95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇、50%乙醇梯度复水，下行至双蒸水中，苏木精染色10 min，1%盐酸酒精分色数秒，水洗返蓝15 min；再依次通过50%乙醇、75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇梯度脱水，伊红染色1 min，95%乙醇洗涤，再经无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。切片放置于37℃温箱内过夜烘干后镜检。光学显微镜下观察组织病理学变化情况。

1.2.3 细菌的分离、培养及鉴定

无菌取狍子肺脏，分别接种于沙门氏菌显色培养基（LA4470）、血液琼脂培养基（LA7150）、沙氏葡萄糖琼脂培养基（LA9640）、麦康凯培养基（M8560）、Baird-parker培养基（LA3690）、营养琼脂培养基（N8290）、结晶紫中性红胆盐琼脂培养基（LA0320），37℃培养24 h，观察培养结果。试验所用培养基购自北京索莱宝科技有限公司。

2 结果与分析

2.1 狍子血液生化指标检测结果（见表1）

狍子死亡前1周进行外周血生化常规检测。

由表1可知，白细胞计数、淋巴细胞比率降低，中性粒细胞比率升高，提示狍子生前发生细菌感染。

2.2 狍子临床剖检病理变化（见图1）

由图1可知，死亡狍子消瘦、口腔内大面积溃烂（图1a）。心肌呈暗红色、心外膜有明显坏死、呈雪花状、心内膜淤血、有散在出血斑（图1b）。肺组织触感硬实、右肺间叶呈肝变表现、右肺隔叶有坏死区（图1c）、坏死区切面可见化脓灶（图1d）。肝肿大、颜色不均、表面散在出血点（图1e）。胰腺颜色为暗红、肿大（图1f）。脾脏皱缩（图1g）。肾肿大，皮髓质交界清晰、出血，肾被膜出血斑与白色坏死区相交织（图1h）。

2.3 狍子细菌分离培养及鉴定结果（见图2）

血平板中可见大量菌落，菌落呈灰色、圆形、表面光滑、边缘规则，直径3~3.5 mm左右，呈β溶血。麦康凯培养基可见菌落呈透明、圆形、表面光滑、边缘规则，直径3 mm左右。

由图2可知，革兰氏染色镜检为阴性杆菌。结果显示为铜绿假单胞菌。

2.4 狍子病理学观察结果（见图3）

肝：低倍镜下观察，肝细胞呈条索状排列、淤血。高倍镜下观察，肝窦内红细胞聚集、肝细胞出现不同程度肿胀、颗粒变性；肝细胞间隙内巨噬细胞、淋巴细胞增多（图3a）。

肾：低倍镜下观察，集合管大面积出血；集合管上皮细胞坏死脱落、聚集于集合管腔内。高倍镜下观察，远曲小管和近曲小管部分上皮细胞颗粒变性、高度肿胀且脱离基底膜；部分脱落的上皮细胞发生坏死崩解，仅残存细胞轮廓；肾小球毛细血管充血、出血，肾小囊可见脱落的上皮细胞（图3b）。

脾：低倍镜下观察，被膜增生、脾小梁增生明显、白髓比例增加、红髓比例减少。高倍镜下，红髓细胞间隙增宽、呈水肿样病变、浆细胞和巨噬细胞增多（图3c）。

胰腺：低倍镜下观察，胰腺结构松散、淤血、出血。高倍镜下观察，胰腺水肿、胰腺泡形态不一、胰腺泡坏死、坏死区域纤维化、伴有大量淋巴细胞浸润（图3d）。

肺：低倍镜下观察，肺组织大面积坏死、出血、间质增宽；病变严重区域肺泡内可见大量红染物质、病变相对轻微处肺组织代偿性肺气肿、肺泡腔显著增宽。高倍镜下观察，肺泡内红染物质为浆液性，含有多量红细胞、肺泡壁上皮细胞、炎性细胞以及细胞脆片（图3e）。

肺组织脉管炎明显，坏死肺组织内可见大量多核巨细胞；浆细胞、巨噬细胞浸润（图3f）。

心脏：低倍镜下观察，心肌纤维水肿、排列松散、部分区域心肌细胞呈液化性坏死。高倍镜下可见心肌细胞颗粒变性、肌细胞间有大量红细胞、炎性细胞浸润（图3g）。

口腔：低倍镜下观察口腔内原有组织结构破坏、口腔内组织大面积出血、炎性细胞大面积浸润、血管大面积增生。高倍镜下可见坏死组织内纤维化明显，多核巨细胞、浆细胞、淋巴细胞浸润（图3h）。

3 诊断

经临床剖检特征观察、细菌的分离、培养、鉴定以及组织病理学观察，死亡狍子由于口腔外伤导致溃烂，铜绿假单胞菌感染，并扩散至全身，肺、肾等重要脏器发生明显的脓毒败血症症状，且各重要组织脏器发生炎性坏死，为典型的细菌感染引发全身性菌血症死亡病例。

4 讨论

铜绿假单胞菌为假单胞菌属，革兰氏染色呈阴性。首先由Gersard于1882年从伤口脓液中分离得到[3]。该菌广泛存在于自然界中，如土壤、水和空气中，作为人畜共患病原菌，可引起人与动物发病。由于铜绿假单胞菌为条件致病菌，健康机体很少感染发病。铜绿假单胞菌引起的疾病常出现在烧伤、外科创伤、术后的免疫力低下宿主。当机体免疫力降低时，其体内的铜绿假单胞菌容易生长繁殖，引发感染[4-8]。

临床上，铜绿假单胞菌的感染常见于禽类、反刍动物[9-13]。近年来，有水貂感染铜绿假单胞菌的文献报道[14-18]；水产养殖中，该病原造成的影响也越来越显著[19-21]。而在野生动物研究领域，铜绿假单胞菌引起疾病的报道相对较少，曾有朱鹮、大熊猫、袋鼠等发生感染的报道[22-25]。铜绿假单胞菌是呼吸系统疾病常见的致病菌之一，关于该菌的文献研究多集中于呼吸系统，对该菌引发其他脏器的病变描述相对少见[17]。在本病例中，狍子由于口腔外伤导致口腔溃烂，铜绿假单胞菌引起继发感染，并最终导致菌血症，依靠其致死毒素、肠毒素、溶血毒素等引发死亡[26]，经病理学诊断发现铜绿假单胞菌除引起肺部病变外，在狍子的肾、心、胰腺等组织均可观察到此菌造成的组织器官损伤。