长沙市芙蓉区犬瘟热流行调查及分析

2021-05-29孙金梅张振伟

现代畜牧兽医 2021年5期

孙金梅，张振伟，钟浪，杨飞

（1.吉林农业大学动物医学院，吉林长春130000；2.西藏农牧学院动物科学学院，西藏林芝860000；3.湖南农业大学东方科技学院，湖南长沙410128）

犬瘟热（canine distemper，CD）属于麻疹病毒属，又称为犬麻疹病毒，容易造成动物机体多种器官系统相互传染，是一种高接触性、致死性的包膜RNA病毒疾病[1]，主要感染犬科[2]、野生食肉动物[3-4]、猫科动物和浣熊科动物[5]等。犬科动物一旦感染，致死率高达30%~80%[6]。犬瘟热病毒（CDV）分为肺炎型、消化道型、神经型及皮肤型，严重威胁宠物犬的健康。

GICA检测法即胶体金免疫层析法[7]，将抗原或抗体固定在微孔滤膜上，胶体金指示剂作为显色剂与其直接反应，继而出现肉眼可见的颜色变化，以达到检测病原的目的[8-9]。该检测法具有简单快捷、低成本、特异性好的优点[10-11]，是现在各类医院使用最普遍的疾病检测方法[12]。

ELISA检测法即酶联免疫吸附法。该技术将抗原或抗体固定在酶标板表面，使用酶标记物标记抗体或抗原，使其在酶标板表面与检测样品发生显色反应，最后使用酶标仪进行荧光检测，以达到检测病原的目的[13]。该检测法具有操作简单、低成本、精准度高、特异性好的优点[14]，是实验室最普遍使用的检测方法之一[15]。

通过GICA、ELISA两种检测方法检测湖南省长沙市芙蓉区5家宠物医院所收治的宠物犬犬瘟热病病发情况，为该地区犬瘟热的预防及治疗提供参考。

1 材料与方法

1.1 样品采集

调查时间：2020年3月12日~2020年4月12日。

调查医院：湖南省长沙市芙蓉区5家宠物医院，简称A、B、C、D、E医院。各医院样品采集情况见表1。

1.2 试验材料

10 mL真空采血管（EDTA）、一次性采血针，均购自广州邦标医疗器械有限公司；犬瘟热/犬副流感病抗原双联检测卡购自上海八通生物科技股份有限公司；犬瘟热病毒（CDV）ELISA检测试剂盒购自上海远研生物科技有限公司；100 mL PBS缓冲液。

100 mL PBS缓冲液的配制：量取90 mL双蒸水，加入100 mL容量瓶中，称取0.8 g氯化钠、0.02 g氯化钾、0.115 g无水磷酸氢二钠、0.156 g二水磷酸二氢钠、0.02 g磷酸二氢钾加入该容量瓶，定容至100 mL。

血清的制备：将采集到的血液样品放置于常温下20~30 min，血液自然凝固析出血清。

1.3 仪器设备

BCD-230SDCY冰箱购自青岛海尔股份有限公司；TDZ5-WS离心机购自金坛市鸿科仪器厂；DNM-9602酶标分析仪购自北京普朗新技术有限公司；Milli-Q Advantage A10超纯水仪购自默瑞（上海）生物科技有限公司；AR2130电子天平购自金坛市盛蓝仪器制造有限公司。

1.4 检测方法

1.4.1 GICA检测

使用样品稀释液稀释样品，再使用滴管将稀释后的样品取3~4滴，逐滴滴入指示卡的加样窗中，反应5~10 min，依据犬瘟热/犬副流感病抗原双联检测卡的判断指标判定犬瘟热感染结果，并记录。

1.4.2 ELISA检测

将酶标板各孔标记，设置阴、阳、空白对照组各2孔，使用PBS液对血清样品进行稀释，参照犬瘟热病毒ELISA检测试剂盒使用说明书依次对稀释样品进行加样→温育→洗涤→加酶→温育→洗涤→显色→终止反应等步骤，在酶标分析仪上使用450 nm的波长测定各孔吸光度，观察记录，并分析试验数据，参照说明书判定结果。

2 结果与分析

2.1 鼻黏液和血液样品GICA检测结果（见表1、表2）

表1 鼻黏液样品GICA检测结果Tab.1 GICA results of nasal mucus samples

由表1可知，5家宠物医院206只宠物犬鼻黏液样品犬瘟热检出率为46.60%，其中A医院检出率为32.43%，B医院检出率为66.07%，C医院检出率为54.55%，D医院检出率为50.00%，E医院检出率为32.79%。

表2 血液样品GICA检测结果Tab.2 GICA results of blood samples

由表2可知，5家宠物医院206只宠物犬血液样品犬瘟热检出率为48.54%，其中A医院检出率为32.43%，B医院检出率为67.86%，C医院检出率为59.09%，D医院检出率为53.33%，E医院检出率为34.43%。

2.2 鼻黏液和血液样品ELISA检测结果（见表3、表4）

由表3可知，5家宠物医院206只宠物犬鼻黏液样品犬瘟热检出率为49.51%，其中A医院检出率为37.84%，B医院检出率为67.86%，C医院检出率为59.09%，D医院检出率为53.33%，E医院检出率为34.43%。

表3 鼻黏液样品ELISA检测结果Tab.3 ELISA results of nasal mucus samples

由表4可知，5家宠物医院206只宠物犬血液样品犬瘟热检出率为54.37%，其中A医院检出率为40.54%，B医院检出率为75.00%，C医院检出率为68.18%，D医院检出率为53.33%，E医院检出率为39.34%。

表4 血液样品ELISA检测结果Tab.4 ELISA results of blood samples

2.3 各型犬瘟热发病及治愈结果（见表5）

表5 各型犬瘟热发病及治愈结果Tab.5 Incidence and cure results of canine distemper 单位：%

由表5可知，采用ELISA检测血液样品，5家宠物医院206只宠物犬各类型犬瘟热的检出率为54.36%、治愈率为74.11%、死亡率为25.89%。其中，肺炎型检出率为33.93%、消化道型检出率为48.21%、神经型检出率为7.14%、皮肤型检出率为10.71%；肺炎型治愈率为71.05%、消化道型治愈率为87.04%、神经型治愈率为12.50%、皮肤型治愈率为66.67%；肺炎型死亡率为28.95%、消化道型死亡率为12.96%、神经型死亡率为87.50%、皮肤型死亡率为33.33%。

3 讨论

犬瘟热作为一种高致病性传染性疾病[16]，少数病犬表征明显（皮肤型），多数通过呼吸道进入肺部，使其发生炎症（肺炎型），随后侵染呼吸道相邻的组织器官，如肠道、肝脏等（消化道型），少数病原还可以感染神经元（神经型）。其中,皮肤型、肺炎型、消化道型的治愈率远远高于神经型[17]。

犬瘟热在美国、澳大利亚[18]、韩国[19]、巴西[20]、不丹[21]、坦桑尼亚[22]及中国[23]等都有不同程度的大流行，多种动物如犬、海獭、猫、狮子、土狼、浣熊等均会被其感染。根据犬瘟热类型的不同，成年犬科动物一旦感染，致死率可达30%~80%，幼年动物致死率甚至高达80%~90%[24]，是一种宠物犬养殖过程中不可忽视的疾病。尽管近年来在宠物犬上广泛使用疫苗进行预防，但防治效果却并不理想。其原因可能是犬瘟热病毒是一种单链RNA病毒，由于RNA单链结构并不稳定，导致其很容易发生变异[25]。因此，为了解湖南省长沙市芙蓉区宠物犬的犬瘟热的流行及治疗情况，本研究通过对该地区5家动物医院进行为期一个月的走访调查、定点采样来收集样品，再以GICA检测法、ELISA检测法获得宠物犬犬瘟热流行情况。结果表明，ELISA检出率比GICA检出率高，与秦凤英[26]在2014年使用GICA检测法与ELISA检测法检测梅毒特异性抗体的所表现的差异性相同。GICA检测法表现出更高的灵敏性，与王逸群等[27]在2018年使用GICA检测法与ELISA检测法检测类风湿关节炎患者血清抗环瓜氨酸肽抗体所表现出的灵敏性相同。所以，本研究使用GICA检测法与ELISA检测法检测犬瘟热病毒的结果是可信的。

利用两种方法检测出来的犬瘟热感染率在48.54%~54.36%，明显高于赵九州等[28]在2019年调查大熊猫自然保护区（栗子坪）周边区域的犬瘟热感染率（4.7%），也明显高于陈秀[29]在2012年在菏泽地区调查的犬瘟热流行情况（27.8%），与张昕等[30]在2018年成都地区的犬瘟热感染率50.71%相似。本研究调查的地点为5家宠物医院，而一般只有在宠物患病的情况才会送来医院治疗，造成本次调研结果远远高于其他地区。本研究所采集的样品均来源于湖南省长沙市芙蓉区，只有206只宠物犬，其横向空间不够广、数据量不够多。本研究开展时间正值春季，其检测结果也与张昕等[30]所统计的春季犬瘟热病毒的检出率56.19%相似。所以，本次针对长沙市芙蓉区的犬瘟热检测结果具有相当的可信度。本次调研所有患病犬的治愈率为74.11%，致死率为25.89%，远远低于白建等[31]在2012年统计犬瘟热的致死率（93%），与李昊洋[32]于2017年所做的犬瘟热防疫与治疗方案研究结果相似（75%）。出现这种现状的原因是近年来对犬瘟热的治疗研究更加成熟，李昊洋[32]对该疾病治疗方案的不断探索，才使得该地区治愈率如此高。