血清SHBG联合Gene-Xpert检测对涂阴肺结核的诊断价值*

苗 雨，段月庭

1.山东省聊城市人民医院检验科，山东聊城 252000；2.山东省聊城市肿瘤防治院结核科，山东聊城 252000

结核病是全球重大公共卫生问题之一，同时也是影响人们健康的慢性疾病之一。我国是全球22个结核病高负担国家之一，结核病的发病率较高[1-2]。结核病早期无特异性临床表现，而且目前临床研究多关注于涂阳肺结核的早期发现及治疗[3]。涂阴肺结核是指有肺结核临床症状或影像学检查有异常表现，但行痰涂片镜检至少有3次阴性结果，其临床表现多样，并且轻重不一，易与其他呼吸系统疾病混淆，导致临床诊断困难[4]，传统诊断方法阳性率较低、耗时较长。因此，寻找一种准确、高效、快速的诊断方法具有重要临床意义。近年来研究发现，通过肺泡灌洗液行Gene-Xpert检测对诊断涂阴肺结核具有重要价值[5]。性激素结合球蛋白(SHBG)是肝脏产生的循环类固醇结合球蛋白，大多数研究发现，SHBG水平与多囊卵巢综合征、妊娠期糖尿病等女性疾病有关[6-7]。近年来也有研究发现，结核病患者脂联素水平呈高表达，可进一步上调肝细胞核因子-4A水平，导致血清SHBG水平升高[8]，揭示了肝脏SHBG产生的可能分子机制，但有关血清SHBG对涂阴肺结核患者的诊断价值国内外少见报道。基于此，本研究对88例疑似涂阴肺结核患者行SHBG联合Gene-Xpert检测以考察其对涂阴肺结核的诊断价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取山东省聊城市人民医院2017年6月至2019年6月88例疑似涂阴肺结核患者为研究对象，其中男42例，女46例；年龄35～71岁，平均(52.38±6.83)岁。其中肺泡灌洗液结核分枝杆菌培养诊断出非结核性肺部炎症(其他肺部感染)患者30例纳入非结核性肺部炎症组，男18例、女12例，年龄34～71岁、平均(53.30±5.80)岁；涂阴肺结核患者58例纳入涂阴肺结核组，男34例、女24例，年龄35～70岁、平均(51.90±7.53)岁。纳入标准：(1)涂阴肺结核患者符合新版《结核病诊断标准(WS 288-2017)》[9]；(2)所有患者肝、肾、心功能正常；(3)所有患者及家属对本研究知情同意，并签订临床研究协议书。排除标准：(1)伴有心肌梗死的患者；(2)伴有大量咯血的患者；(3)基本资料不全的患者。

1.2仪器与试剂 SHBG检测试剂盒(货号：JLC5863)购自上海晶抗生物工程有限公司；Gene-Xpert实时荧光定量PCR仪购自美国Cepheid公司。

1.3方法

1.3.1肺泡灌洗液的收集 所有患者均行胸部CT和X线片检查，根据患者影像学检查结果，同时用Olympus支气管镜检查，以病变部位作为灌洗部位，用支气管镜把10～20 mL生理盐水灌入病变支气管中，通过负压吸引回收灌洗液，重复3次，收集约20 mL灌洗液至无菌瓶内，待用。

1.3.2血清SHBG水平的检测 采集两组患者空腹外周静脉血3 mL，4 ℃静置2 h，3 000 r/min离心5 min，取上层血清，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清SHBG水平，操作均严格按照试剂盒说明书步骤进行。

1.3.3肺泡灌洗液行Gene-Xpert检测 取约5 mL肺泡灌洗液与处理液(氢氧化钠∶异丙醇=2∶1)均匀混合，在室温下静置20 min，随后将混合液转移至多室塑料反应盒中，采用Gene-Xpert实时荧光定量PCR仪进行测定，并记录结果。

2 结 果

2.1临床表现及CT、X线片检查结果 所有患者均伴有夜间盗汗症状100.00%(88/88)，有发热，咳嗽、咳痰，痰中带血，呼吸困难症状的患者分别占40.91%(36/88)、57.95%(51/88)、12.50%(11/88)、2.27%(2/88)。X线片、CT检查结果伴有斑片影、云絮影患者占64.77%(57/88)，有结节影、空洞影、胸腔积液患者分别占20.45%(18/88)、21.59%(19/88)、10.23%(9/88)。

2.2两组患者血清SHBG水平比较 非结核性肺部炎症组、涂阴肺结核组SHBG水平分别为(35.15±8.12)、(50.37±10.19)ng/mL。与非结核性肺部炎症组相比，涂阴肺结核组血清SHBG水平明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.3血清SHBG水平对涂阴肺结核的诊断价值 以血清SHBG水平为检验变量绘制ROC曲线，结果显示，血清SHBG诊断涂阴肺结核的ROC曲线下面积(AUC)为0.856(95%CI:0.756～0.922)，截断值为39.94 ng/mL，特异度为79.31%，灵敏度为80.00%。见图1。

图1 血清SHBG诊断涂阴肺结核的ROC曲线

2.4行Gene-Xpert检测对涂阴肺结核的诊断价值 以肺泡灌洗液结核分枝杆菌培养为金标准，行Gene-Xpert检测诊断涂阴肺结核的灵敏度为74.14%(43/58)，特异度为73.33%(22/30)，准确度为73.86%(65/88)。见表1。

表1 Gene-Xpert检测对涂阴肺结核的诊断价值(n)

2.5血清SHBG联合Gene-Xpert检测对涂阴肺结核的诊断价值 与SHBG及Gene-Xpert单独检测比较，二者联合检测的灵敏度、特异度、准确度均明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 血清SHBG联合Gene-Xpert检测对涂阴肺结核的诊断价值[%(n/n)]

3 讨 论

涂阴肺结核是我国结核病防控中不可忽视的一环，在我国结核病患者人群中，涂阴肺结核约占85.6%[10]。涂阴肺结核患者多伴有咳嗽症状，但咳嗽症状与肺结核并无明显关系，此外涂阴肺结核患者常伴有体质量下降、乏力、发热、盗汗等症状[11]。本研究发现，所有患者均伴有夜间盗汗症状，有发热症状的患者占40.91%(36/88)，有咳嗽、咳痰症状的患者占57.95%(51/88)，缺乏典型的临床症状。X线片、CT检查结果伴有斑片影、云絮影患者占64.77%(57/88)，同样缺乏特异性。因此，临床上医师需要借助辅助检查、询问患者病史行综合诊断，以提高涂阴肺结核的诊断率。

对于涂阴肺结核的临床诊断主要依靠病原学检查，但是其易受外界因素，如检测标本的获取方式或时间、结核分枝杆菌的数量、患者间断性排菌等影响。因此，病原学检查诊断涂阴肺结核的灵敏度低，且检测耗时长，无法满足临床上快速诊断的要求。结核分枝杆菌Gene-Xpert检测是世界卫生组织在2011年推荐的对适应人群进行痰液检测的手段。近年研究发现，通过支气管镜检查获得肺泡灌洗液标本行抗酸杆菌涂片及培养的阳性率高于痰液标本，可明显提高结核病诊断的灵敏度[12]。

张海晴等[13]用Gene-Xpert MTB/RIF试剂盒对疑似结核病患者进行检测，检测结果与痰涂片、培养及核酸扩增检测方法比较，在涂阳标本中，Xpert MTB/RIF对结核分枝杆菌的检出率高达98.2%，在涂阴标本中Xpert MTB/RIF对结核分枝杆菌的检出率为72.1%。王芳等[14]的研究发现，肺泡灌洗液结核分枝杆菌培养阳性患者中，Gene-Xpert检测在诊断涂阴肺结核中的灵敏度为80.77%，特异度为52.38%，准确度为63.23%，说明结核分枝杆菌Gene-Xpert检测诊断涂阴肺结核有一定应用价值，是一种简便、快速、高效的检查方法，同时该研究发现患者临床表现以咳嗽、咳痰、发热、夜间盗汗为主，CT、X线片检查结果以斑片影、云絮影多见，与本研究结果相同。同时本研究中行肺泡灌洗液Gene-Xpert检测诊断涂阴肺结核的灵敏度为74.14%(43/58)，特异度为73.33%(22/30)，准确度为73.86%(65/88)，提示肺泡灌洗液Gene-Xpert检测对涂阴肺结核具有一定的诊断价值，有望成为临床上诊断涂阴肺结核的辅助方法。

近几年，血清蛋白质组学技术的快速发展为涂阴肺结核的诊断提供了新的可能[15]。周颖等[16]利用蛋白质组学验证涂阴肺结核的候选血清标志物，结果表明SHBG检测涂阴肺结核的AUC为0.92，灵敏度和特异度分别为87.14%和85.11%，提示SHBG是值得进一步研究的肺结核候选血清标志物。本研究发现，与非结核性肺部炎症组相比，涂阴肺结核组血清SHBG水平明显升高，说明SHBG与涂阴肺结核关系密切，可能与结核分枝杆菌感染导致肺部炎性反应有关。此外黄琪淋等[17]研究发现，SHBG诊断涂阴肺结核的AUC为0.781，其联合血清淀粉样蛋白4检测诊断涂阴肺结核的灵敏度和特异度分别为84.1%、91.1%，表明二者联合检测有助于涂阴肺结核的辅助诊断。本研究以疑似涂阴肺结核患者作为研究对象，以血清SHBG为检验变量绘制ROC曲线，结果显示肺泡灌洗液诊断涂阴肺结核的AUC为0.856(95%CI:0.765～0.922)，截断值为39.94 ng/mL，特异度为79.31%，灵敏度为80.00%，说明血清SHBG水平对涂阴肺结核具有一定的诊断价值。采用SHBG、Gene-Xpert联合检测诊断涂阴肺结核的灵敏度为93.33%(28/30)，特异度为94.83%(55/58)，准确度为94.32%(83/88)，二者联合检测可明显提高单项检测的灵敏度、特异度和准确度。

综上所述，血清SHBG联合Gene-Xpert检测可提高涂阴肺结核的诊断效能。