猪肉中多种兽药残留的同时测定
2021-05-25陈倩娟王利霞侯玉雷付裕
陈倩娟 王利霞 侯玉雷 付裕
（锐德检测（天津）技术有限公司 天津 300000）
1 前言
我国是畜肉生产和消费大国, 为防止畜类疫病发生, 兽药被广泛应用于对畜类的治疗。 兽药的使用可以降低畜禽发病率与死亡率、提高饲料利用率、促生长和改善产品的品质。但是，由于科学知识的缺乏和经济利益的驱使， 非法使用兽药的现象普遍存在。 GB 31650-2019《食品安全国家标准 食品中兽药最大残留限量》、农业部公告第560 号兽药地方标准废止目录、农业农村部公告第250 号食品动物中禁止使用的药品及其他化合物清单中均对食品动物药物残留进行了规定, 其中包括甲硝唑、 氯霉素类、磺胺类、喹诺酮类等兽药。 国标方法采用的是分类检测各类兽药, 优点是样品前处理适用范围广,缺点是样品前处理复杂, 完成不同种类的兽药检测耗时较长。 现在迫切需要建立畜肉中兽药多残留的高通量快速检测方法，简化前处理步骤、降低试剂消耗量已成为快速分析兽药残留检测技术的发展趋势。建立对多种兽残留的检测方式，对监测畜产品的兽药残留和保障动物源性食品安全有至关重要的作用。
2 实验部分
2.1 实验仪器及耗材
仪器配置：Ultimate 3000 和 TSQ ENDURA 高效液相色谱-质谱联用； 色谱柱：Hypersil GOLD Dim.（mm）：100×2.1；SHIMSEN QuEChERS 多兽残专用提取包 （P/N 380-00155）；SHIMSEN QVet-NM+净化柱（P/N：380-00925-16）；进样小瓶、移液器。
2.2 分析条件
2.2.1 5 种沙星的UHPLC 条件
色谱柱：Hypersil GOLD Dim.（mm）：100×2.1；流速：0.3 mL/min；进样量：10 μL；柱温：40℃；流动相：A：0.1%甲酸水B：甲醇；
梯度洗脱程序如下：
质谱条件
离子化模式：ESI，正负离子同时扫描扫描模式：多反应监测（MRM）；碰撞气：氩气鞘气：氮气流速：55 Arb；雾化气：氮气流速：0 Arb 辅助气：氮气流速：2 Arb；离子传输管温度：350℃脱溶剂温度：350℃。
表1
2.2.2 磺胺UHPLC 条件
色谱柱：Hypersil GOLD Dim.（mm）：100×2.1；流速：0.4 mL/min；进样量：10 μL；柱温：40℃；流动相：A：0.1%甲酸水，B：乙腈。
梯度洗脱程序如下：
质谱条件
离子化模式：ESI，正负离子同时扫描扫描模式：多反应监测（MRM）；碰撞气：氩气鞘气：氮气流速：40 Arb；雾化气：氮气流速：0 Arb 辅助气：氮气流速：10 Arb；离子传输管温度：320℃脱溶剂温度：350℃。
表2
2.2.3 氯霉素UHPLC 条件
色谱柱：Hypersil GOLD Dim.（mm）：100×2.1；流速：0.4 mL/min；进样量：10 μL；柱温：40℃；流动相：A：0.1%甲酸水，B：甲醇；
梯度洗脱程序如下：
质谱条件
离子化模式：ESI，正负离子同时扫描扫描模式：多反应监测（MRM）；碰撞气：氩气鞘气：氮气流速：40 Arb；雾化气：氮气流速：0 Arb 辅助气：氮气流速：2 Arb；离子传输管温度：325℃脱溶剂温度：400℃。
表3
2.2.4 甲硝唑UHPLC 条件
色谱柱：Hypersil GOLD Dim.（mm）：100×2.1；流速：0.3 mL/min；进样量：10μ0；柱温：40℃；流动相：A：0.1%甲酸水；B：甲醇。
梯度洗脱程序如下：
质谱条件
离子化模式：ESI，正负离子同时扫描扫描模式：多反应监测（MRM）；碰撞气：氩气鞘气：氮气流速：45 Arb；雾化气：氮气流速：0 Arb 辅助气：氮气流速：2 Arb； 离子传输管温度： 350℃脱溶剂温度：350℃。
表4
2.3 样品前处理
2.3.1 SHIMSEN QuEChERS 样品提取
精确称取猪肉样品5.0 g，加5 mL 5%甲酸乙腈涡旋混匀30 s，加入SHIMSEN QuEChERS 多兽残专用提取包 （5010-050123 QuEChERS Extract Tubes for Vet Drugs In Foods 50/p），涡旋混匀 30s，8000r/min离心5 min，取2 mL 上清液待净化。
2.3.2 SHIMSEN QuEChERS 样品净化
将2 mL 提取液转移至SHIMSEN QuEChERS多兽残专用净化包 （5010-015204 QuEChERS Dispersive。 Tubes for Vet Drugs In Foods 100/p）中，涡旋混合 30 s，8 000 r/min 离心 5 min，取上清液1mL，加200 μL 水涡旋混匀，室温下氮吹至近干，加10%甲醇水定容至1 mL，超声溶解，过0.22 μm 微孔滤膜，进LC-MS/MS 分析。
2.3.3 SHIMSEN QVet-NM+样品提取
精确称取猪肉样品5 g， 加入5 g 无水硫酸钠、均质子，震荡提取1 min，加入10 mL 的1%醋酸乙腈溶液，剧烈震荡提取10 min，8 000 r/min 离心5 min，上清液备用。
2.3.4 SHIMSEN QVet-NM+样品净化
准确吸取5 mL 萃取液置于SHIMSEN QVet-NM+萃取套组， 以每秒1 滴流速加压， 滤液过0.22 μm 滤膜，取 1 mL 滤液上机。
3 实验结果
3.1 标准样品的MRM 谱图，见图1。
图1
3.2 猪肉中多种兽药的LC-MS/MS SHIMSEN QuECh- ERS 检测添加回收结果，见表5。
表5
3.3 猪肉中多种兽药的LC-MS/MS SHIMSEN QVet- NM+ 检测添加回收结果，见表6。
表6
4 结论
本文采用岛津的 SHIMSEN QuEChERS 和SHIMSEN QVet-NM+产品对猪肉样品进行净化，Hypersil GOLD 色谱柱进行分离，采用高效液相色谱-串联质谱检测，对猪肉基质中5 种沙星、氯霉素、甲硝唑、磺胺类药物进行分析，其中SHIMSEN QVet-NM+在第一步提取时加入无水硫酸钠易结块，有可能对目标物提取不充分。 该方法操作简单、分析速度快、重现性好，适用于猪肉中多兽药残留量的同时测定。
