微波消解-电感耦合等离子体-质谱法测定柏子养心丸中总汞的含量
2021-05-25任琦许妍刘桂凤徐兰邓维
任琦，许妍，刘桂凤，徐兰，邓维
1.江西省药品检验检测研究院，国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室，江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心，江西 南昌 330029；2.解放军联勤保障部队第九〇八医院，江西 南昌 330002
柏子养心丸处方来源于《古今医统》卷七叶引《集验方》。上世纪八十年代初期多家企业获得当地卫生局批准并进行生产，为国家基本药物。现行标准收载于《中国药典》2020 年版一部，处方由炙黄芪、党参、当归、川芎、朱砂等十三味药组成，具补气、安神之功效，用于心悸易惊、失眠多梦等症［1-3］。方中朱砂为硫化物类矿物辰砂族辰砂，主含硫化汞（HgS），具有清心镇惊，明目，解毒之功效，用于心悸易惊，失眠多梦，癫狂发疯，小儿惊风等症［4-5］。《中国药典》2020 年版一部朱砂品种项下规定：本品含硫化汞（HgS）不得低于96%。因此，含朱砂中药制剂的总汞含量较高，而通过测定制剂中硫化汞（HgS）的含量，可以评价制剂中所投朱砂的真伪及投样量是否准确，因此有必要对柏子养心丸中总汞进行测定。而柏子养心丸现行标准仅有朱砂的显微鉴别，未对其特征性成分加以控制，难以有效控制产品质量，故本研究采用微波消解-电感耦合等离子体-质谱法［6-17］建立柏子养心丸中总汞含量测定方法，以期为柏子养心丸的质量评价供参考依据，保证临床用药安全。
1 仪器与试药
Agilent 7700 电感耦合等离子体-质谱仪（美国Agilent Technologies 有限公司）；Sartorius BSA 124SCW 电子天平（德国Sartorius 公司）；MARS-xpress微波消解仪（美国CEM 有限公司）；Milli-Q Direct 16 超纯水仪（Millipore 中国有限公司）；GST25-20赶酸仪（上海博通化学科技有限公司）。
元素内标标准溶液（209Bi 内标元素）：浓度为100 μg/mL，来源于Agilent，批号：5188-6625；调谐溶液：来源于安捷伦科技股份有限公司，批号为5184-3566；汞标准溶液：浓度为1 000 μg/mL，来源于中国计量科学研究院国家标准物质，批号：GBW 08617 13011；硝酸：来源于MERCK，批号：K48901 356713；超纯水：由Milli-Q 超纯水仪制得。
7 批柏子养心丸来源于7 个企业（北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂，批号：15035315，国药准字Z11020080，规格：每100 粒重10 g；上海华源制药安徽广生药业有限公司，批号：121201，国药准字Z34021073，规格：每瓶装60 g；江西药都樟树制药有限公司，批号：150403，国药准字Z36021835，规格：每瓶装60 g；九芝堂股份有限公司，批号：201412037，国药准字Z43020150，规格：每瓶装120 g；湖北诺得胜制药有限公司，批号：150102，国药准字Z42020282，规格：每瓶装60 g；芜湖张恒春药业有限公司，批号：1503071，国药准字Z34020946，规格：每瓶装36 g；南京同仁堂药业有限责任公司，批号：140910，国药准字Z32020029，规格：每瓶装60 g）。
2 方法与结果
2.1 仪器设置条件
电感耦合等离子体-质谱仪设置条件，射频功率：1 600 W；反应模式：氦模式；载气：氩气；载气流速：0.79 L/min；碰撞气体：氦气；氦气流速：4.5 mL/min；泵速：0.10 rps；采样锥孔径：1.0 mm；截取锥孔径：0.4 mm；离子透镜1∶3.5 V；离子透镜2∶-99.5 V；数据采集次数：3 次。
微波消解程序：消解功率800 W，25 min 内升温至150 ℃，保持5 min，再以5 ℃/min 升至180 ℃，保持25 min。
2.2 溶液的制备
2.2.1 供试品溶液的制备取柏子养心丸0.5 g，精密称定，置消解罐中，加硝酸6 mL，置微波消解仪中进行消解，消解完全后，消解罐自然冷却至室温，将消解液转入50 mL 量瓶中，用水少量多次洗涤消解罐，洗液合并于量瓶中，用水稀释至刻度，即得。再精密吸取上述溶液100 μL，置250 mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。同法同时制备试剂空白样品溶液。
2.2.2 内标溶液的制备精密量取209Bi 内标标准溶液1 mL，置100 mL 容量瓶中，用2%硝酸稀释至刻度，摇匀，即得209Bi 的内标溶液（浓度为1 μg/mL）。
2.2.3 汞标准储备溶液的制备取汞标准物质（标准值为1 000 μg/mL）1 mL，置100 mL 量瓶中，用2%硝酸稀释至刻度，摇匀，即得汞的标准储备液（浓度为10 μg/mL）。
2.2.4 汞标准曲线溶液的制备精密量取汞标准溶液储备液0、0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0、2.5 mL，分别置50 mL 量瓶中，用2%硝酸稀释至刻度，摇匀，即得。（浓度分别为0、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、5.0ng/mL）
2.3 测定法
采用在线内标法，用三通管将含209Bi 内标溶液与供试品溶液后进入电感耦合等离子体-质谱仪。测定时以209Bi 作为内标，标准进样管始终插入内标溶液中，依次从样品管中吸入各个浓度的标准曲线溶液，以测量值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
2.4 线性关系考察
取“2.2.4”项下标准曲线溶液，按“2.1”项下仪器设置条件进样测定，记录仪器响应值。以汞元素质量浓度（ng/mL）为横坐标，与测量值为纵坐标进行线性拟合，绘制，得汞元素线性回归方程Y=0.002 2X+4.996 8×10-4，r=0.996 3。结果表明汞质量浓度在0～5.0 ng/mL 范围内与测量值线性关系良好。
2.5 检测限试验
取“2.2.1”项下空白样品溶液适量，按“2.1”项下仪器设置条件重复进样测定11 次，计算仪器响应值的标准偏差，3 倍标准偏差对应的质量浓度即为检测限，结果汞的检出限为0.011 1 ng/mL。
2.6 精密度试验
取“2.2.4”项下汞元素标准溶液（浓度3 ng/mL），按“2.1”项下仪器设置条件重复进样测定6 次，记录仪器响应值，测定结果分别为3.020、3.013、3.002、3.109、3.015、3.121 ng/mL，RSD 为1.8%（n=6），表明仪器精密度良好。
2.7 重复性试验
称取柏子养心丸（上海华源制药安徽广生药业有限公司，批号：121201）0.5 g，精密称定，共取6份，按“2.2.1”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下仪器设置条件进样测定，记录仪器响应值。结果见表1，6 份样品中汞的平均含量为186 868 ng/g，RSD 为1.3%（n=6），表明本方法重复性良好。
表1 重复性试验结果
2.8 加样回收率试验
称取柏子养心丸（上海华源制药安徽广生药业有限公司，批号：121201）0.25 g，精密称定，共取6 份，采用加样回收试验，加入标准溶液（浓度为5 μg/mL）50 mL，按“2.2.1”项下方法制备，再按“2.1”项下仪器设置条件进样测定，计算加样回收率，结果见表2。
表2 回收率试验结果
计算公式：回收率=（测得总量-样品中的量）÷添加量×100%
2.9 样品中总汞的测定
称取7 批柏子养心丸样品各0.5 g，精密称定，分别按“2.2.1”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下仪器设置条件进样测定，计算样品总汞的含量（mg/kg），结果见表3。
表3 样品中总汞的测定结果（mg/kg）
3 讨论
本次试验结果可知，参照《中国药典》2020年版一部对部分药材重金属及有害元素的限度规定，汞不得超过0.2 mg/kg，根据柏子养心丸的用法与用量：水蜜丸一次6 g，小蜜丸一次9 g，2 次/d。按每日服用量折算，总汞的限度：水蜜丸不得过0.002 4 mg/d，小蜜丸0.003 6 mg/d。结果7 批样品总汞含量均大于拟定的限度，表明柏子养心丸中总汞含量都非常高。但有研究表明［4-5］，朱砂在体内不能被完全溶解吸收，占给药量的98.5%以硫化汞（HgS）形式随粪便排出体外，而1.5%的可溶性汞盐才是能被人体所吸收的成分，也是朱砂中有毒的成分。因此有待进一步研究柏子养心丸中可溶性汞的毒性风险，为柏子养心丸的安全性评价供参考依据，保证其临床用药安全。
