烯酰吗啉在葡萄上残留及风险状况分析

牛艳，吴燕，杨静，姜瑞，王晓菁

(宁夏农林科学院，宁夏 银川 750002)

烯酰吗啉(dimethomorph)是吗啉类低毒广谱性杀菌剂[1]，通过破坏细胞壁膜的形成，对各个阶段的卵菌都有灭菌作用，特别是在孢子囊梗和卵孢子的形成阶段作用更明显，从而引起孢子囊壁的分解，达到杀菌的目的[2]。烯酰吗啉在国内市场迅速得到开发，使用量大幅度上升，现在已经是霜霉病、疫病的最大使用药剂[3]，可用于葡萄、烟草、黄瓜、马铃薯等作物[4-7]。霜霉病在葡萄上的发生极其频繁，危害严重，通过对20%烯酰吗啉悬浮剂室内毒力测定表明，该药剂对宁夏贺兰山东麓的葡萄霜霉病菌的生长具有良好的抑制作用[8]。随着人们对葡萄质量安全和生产环境的日益重视，开展烯酰吗啉在葡萄上残留实验及安全评估十分必要。

目前关于烯酰吗啉残留的检测方法及消解动态国内外已有相关研究[9-13]，刘河疆等[14]开展了新疆鲜食葡萄产区农药残留膳食摄入风险评估研究，结果表明，新疆鲜食葡萄检出的农药均为低风险农药，慢性和急性膳食摄入风险均较低。张文等[15]对兰州市售葡萄中39种农药残留水平进行分析及风险评估，结果表明，兰州市售葡萄中农药的慢性膳食摄入风险总体较低，风险可控。然而对于烯酰吗啉在贺兰山东麓葡萄上的残留消解规律、最终残留实验及风险状况分析还未见报道。本研究开展了烯酰吗啉在葡萄上残留消解规律及最终残留实验的研究，应用超高效液相色谱串联质谱仪对残留实验葡萄样品中烯酰吗啉的残留进行检测，并对其膳食暴露风险进行评估。研究对于提升葡萄产品质量和环境质量，确保葡萄产业安全、健康发展具有推动作用。

1 材料与方法

1.1 仪器设备与试剂

超高效液相色谱串联质谱仪(TSQ QUANTUM ACCESS MAX，配ESI源，美国Thermo公司)；营养调理机(惠尔宝公司)；电子天平(精度0.01 g，瑞士梅特勒公司)；漩涡混匀器(德国IKA公司)；恒温振荡器(国华企业)；离心机(TD-40L，上海安亭)。烯酰吗啉标准品购于农业农村部环境保护科研监测所；乙腈和甲醇均为色谱纯；水为一级；氯化钠为分析纯；N-丙基乙二胺(PSA)(德国CNW公司)；80%烯酰吗啉水分散粒剂(陕西美邦农药有限公司)。

1.2 处理设计

根据农药登记残留田间实验标准操作规程[16]要求，对葡萄开展田间实验。

1.2.1 消解动态

在宁夏银川和安徽宿州选择未施用烯酰吗啉的实验小区，按照NY/T 788—2018《农药残留实验准则》[17]的要求，以制剂800倍液于葡萄果实生长到成熟个体一半大小时施药1次，于施药后2 h、1 d、2 d、3 d、5 d、7 d、10 d、14 d、21 d、30 d、45 d采集葡萄果实。各小区间设保护带，另设空白对照小区。随机法采集葡萄的果实，每次每棵树采集葡萄8～10串果实，不少于2 kg。将样品弃去病株、残株，除去果梗，缩分后留取300 g，装入样品袋，标签标记后，-20 ℃低温保存待用。

1.2.2 最终残留

设置高低2个施药剂量，低剂量按制剂3 200倍稀释，高剂量按制剂2 133倍稀释。设2次施药和3次施药2个处理。按照实验设计时间开始第1次施药，施药间隔期7 d。采样时间为距离最后一次施药的间隔时间为7 d、14 d、21 d、28 d。各小区间设保护带，另设空白对照小区。样品采集同上。

1.3 样品处理

称取经高速匀浆后的葡萄样品10.00 g于50 mL离心管中，加入20 mL乙腈，在振荡器振荡提取1 h后，加入5 g氯化钠，手动摇匀1 min，放置离心机中3 000 r·min-1离心5 min，取上清液2.0 mL于提前称取好150 mg PSA的10 mL试管中，涡旋净化后离心，上层液用0.22 μm针式有机滤膜过滤，吸取200 μL过滤液用甲醇定容至1.00 mL，装入2 mL进样小瓶中，待测。

1.4 检测条件

使用超高效液相色谱串联质谱仪对葡萄样品进行烯酰吗啉残留检测。检测条件如下，使用色谱柱为Xterra MS-C18色谱柱(100 mm×2.1 mm，3.5 μm；Waters公司)；柱温初始温度为40 ℃；进样量为1.0 μL；流速为0.3 mL·min-1；流动相为甲醇水溶液；传输汽化温度为300 ℃；辅助气流速为10 mL·min-1；鞘气流速为30 mL·min-1；扫描方式为SRM(正)；电压为3 500 V。

2 结果与分析

2.1 标准曲线及定量限

将1 000 mg·L-1的烯酰吗啉标准样品用甲醇稀释配得0.01、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50 mg·L-1系列标准溶液。在0.01～0.50 mg·L-1，标样曲线y=3×106x+16 963，线性相关r=0.999 0。量取0.01 mg·L-1标准溶液色谱图的峰高(图1)，以3倍信噪比计算得到本方法检出限为0.003 mg·kg-1，定量限为0.01 mg·kg-1。

RT、AA、SN分别代表保留时间、峰面积、信噪比。图2同。

2.2 加标回收及精密度

试验结果表明，烯酰吗啉农药添加质量浓度0.01 mg·L-1时，平均回收率93.0%，相对标准偏差11.1%；添加质量浓度1.0 mg·L-1时，平均回收率88.4%，相对标准偏差9.5%；添加质量浓度5.0 mg·L-1时，平均回收率92.4%，相对标准偏差3.1%。添加谱图见图2。

图2 葡萄样品中烯酰吗啉残留量测定色谱

2.3 消解动态及最终残留

对消解动态结果进行分析发现，葡萄中烯酰吗啉消解动态曲线均呈指数函数关系。宁夏葡萄样品的消解方程为Ct=7.612 4e-0.038t，半衰期为18.2 d，r=-0.931 5；安徽葡萄样品消解方程为Ct=2.623 4e-0.064t，半衰期为10.8 d，r=-0.933 8，消解率最终达到95%，葡萄中烯酰吗啉的残留量随时间逐渐减少。

在最后一次施药后间隔时间为7、14、21、28 d采集的最终残留葡萄，对最终残留结果进行分析发现，烯酰吗啉在葡萄中的残留量分别为0.081～4.500、0.024～2.970、0.014～2.700和0.010～1.540 mg·kg-1，残留实验中值分别为0.27、0.46、0.13和0.36 mg·kg-1。烯酰吗啉农药最终残留量随着采样时间的延迟呈逐步降低趋势，残留量与施药次数和施药量均相关，随着施药次数和施药量的增加，残留量增大。

2.4 风险状况分析

烯酰吗啉在我国菠菜、番茄、黄瓜、辣椒、马铃薯、葡萄等作物上已有农药残留登记，根据《农药每日允许摄入量制定指南》《农药残留风险评估指南》及卫生部2002年发布的《中国不同人群消费膳食分组食谱》或权威参考资料中的膳食结构数据，基于残留实验数据开展膳食摄入风险评估，采用安全间隔期14 d采集样品的残留中值0.46 mg·kg-1，依据GB 2763—2019[18]，查询烯酰吗啉每日允许摄入量(ADI)值为0.2 mg·kg-1体重(bw)及其在其他食物中的限量值，人群平均体重按照63 kg计算[19]，结果见表1。普通人群烯酰吗啉的国家估算每日摄入量(NEDI)为3.68 mg，日允许摄入量为12.6 mg，采用ADI%计算烯酰吗啉的慢性膳食摄入风险。烯酰吗啉的国家估算每日摄入量占日允许摄入量的29%，慢性膳食摄入风险概率是29%，结果表明，烯酰吗啉在葡萄上的残留量通常不会对一般人群健康产生不可接受的风险，属于低风险状态。

表1 烯酰吗啉膳食风险评估情况

3 小结与讨论

用乙腈对葡萄样品进行提取，采用PSA净化，超高效液相色谱串联质谱仪检测，通过对烯酰吗啉农药在葡萄中进行3个添加水平实验，结果表明，其平均回收率为88%～93%，相对标准偏差为3.1%～11.1%，符合农残分析的要求[20-21]。烯酰吗啉在宁夏、安徽两地葡萄中的半衰期分别为18.2 和10.8 d，消解曲线符合一级动力学方程Ct=Coe-kt(式中，K为降解速率常数；C0为农药的初始浓度；Ct为t时刻农药的浓度；t为时间；e是自然对数的底数)。通过最终残留实验，制剂用药量2 133～3 200倍液，施药2～3次，采集距末次施药间隔7、14、21、28 d的最终残留量为0.01～4.50 mg·kg-1。烯酰吗啉在葡萄中慢性膳食摄入风险为29%，安全间隔期14 d之后烯酰吗啉在葡萄中的残留量处于低风险状态。