血清肝再生磷酸酶-3鉴别诊断高、低级别浆液性卵巢癌价值

邹春玲 王黎明 沈晓萍

1.山东省龙口市人民医院(265701)；2.上海交通大学医学院附属新华医院崇明分院

浆液性卵巢癌是卵巢癌最常见的恶性肿瘤类型，临床上常将其分为高、低级别浆液性卵巢癌，二者在形态学、组织学改变以及临床治疗与预后等方面均存在较大差异[1]。低级别浆液性卵巢癌发展缓慢，预后良好；高级别浆液性卵巢癌进展迅速侵袭性强，预后较差[2-3]。因此，术前准确鉴别对治疗及预后有重要临床意义。但在临床诊断中，因不同级别的肿瘤可能存在组织学形态的交叉和重叠，增加了临床实践难度。因此，亟需寻找有效诊断浆液性卵巢癌的生物标志物，准确鉴别高、低级别浆液性卵巢癌，为临床确定治疗方案提供依据。肝再生磷酸酶-3(PRL-3)在晚期卵巢癌中的表达水平明显高于早期卵巢癌，与卵巢癌的发生发展有关[4]。基于此，本研究探讨血清PRL-3对高、低级别浆液性卵巢癌的鉴别价值，为术前鉴别两种卵巢癌提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年3月—2019年1月本院接受手术治疗的浆液性卵巢癌患者106例作为观察组，按美国M.D.Anderson肿瘤中心提出的分级系统[5]，将患者分为低级别45例(低级别组)，高级别61例(高级别组)。另选取同期本院行常规体检的健康女性98例为对照组。纳入标准：①术后病理切片确认为浆液性卵巢癌；②术前3个月未进行放疗或化疗；③临床病理资料完整。排除标准：①合并其他恶性肿瘤；②合并患有心脏、肝、肾等疾病；③合并自身免疫疾病。本研究经医院伦理委员会审批。

1.2 检测方法

采集患者晨空腹静脉血抗凝离心，取血清-20℃保存。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)仪检测血清PRL-3表达量。总RNA提取：从-20℃取出血清样本，Trizol试剂(日本TaKaRa公司)提取血清总RNA，异丙醇沉淀浓缩后75%酒精洗涤，干燥后加入100μl DEPC水，变性凝胶电泳检测总RNA完整度，紫外分光光度计检测所得RNA浓度。逆转录反应：取所得总RNA 2μg，按照逆转录试剂盒(北京天根生化有限公司)说明书将RNA逆转录为cDNA，-20℃保存。qRT-PCR反应(反应体系20μl)：取cDNA模板2μl，10μl 2×SYBR Green PCR Master Mix，上下游引物各1 μl，DEPC水6μl，每个样本设置3个平行。根据目的基因设计相应上下游引物，以GAPDH为内参，序列见表1。qRT-PCR反应条件：95℃ 30s；95℃ 10 s、60℃ 30 s，45个循环，qRT-PCR仪(赛默飞世尔科技中国有限公司)反应。根据各样本平均Ct值，采用2-ΔΔCt法计算PRL-3相对表达量。

表1 PRL-3及内参基因GAPDH引物序列

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 一般资料比较

高级别组、低级别组、对照组年龄、体质指数(BMI)、患糖尿病及高血压比例均无差异(P>0.05)，高级别组FIGO分期[6]为Ⅲ-Ⅳ期患者比例高于低级别组(P<0.05)。见表2。

表2 各组一般资料比较

2.2 血清PRL-3 mRNA表达量比较

血清中PRL-3表达水平高级别组最高(2.61±0.72)，低级别组次之(1.39±0.69)，对照组最低(1.16±0.43)(P<0.001)。

2.3 不同FIGO分期患者血清PRL-3表达量比较

血清PRL-3 mRNA表达量，低级别组中Ⅰ～Ⅱ期患者(1.31±0.62)与Ⅲ～Ⅳ期患者(1.68±0.51)比较无差异(t=1.652，P=0.106)，高级别组中Ⅰ～Ⅱ期患者(2.32±0.58)与Ⅲ～Ⅳ期患者(2.67±0.69)比较也无差异(t=1.501，P=0.139)。

2.4 血清PRL-3诊断高、低级别浆液性卵巢癌价值

以血清PRL-3水平为检测变量绘制ROC曲线，诊断高、低级别浆液性卵巢癌的ROC曲线下面积为0.887(95%CI：0.811～0.940)，截断值为1.95，灵敏度为90.2%，特异性为77.8%。见图1。

图1 血清PRL-3诊断高、低级别浆液性卵巢癌的ROC曲线

3 讨论

浆液性卵巢癌是临床常见的卵巢癌，早期诊断困难，其中高级别浆液性卵巢癌预后差，低级别浆液性卵巢癌预后较好[7]。血清PRL-3是一种蛋白质酪氨酸磷酸酶，在卵巢癌患者中呈高表达，敲除PRL-3基因发现，其可参与卵巢癌的肿瘤发生及恶性表型的维持[8]。PRL-3可促进癌细胞上皮间质转化，提高癌细胞的侵袭、迁移能力，并能作用于下游蛋白或酶来调控多条信号通路，从而影响癌细胞的增殖和凋亡[9]。研究表明，PRL-3可通过抑制PTEN表达激活PI3K-AKT信号传导，从而导致上皮间质转化，而上皮间质转化是癌变过程中癌细胞入侵的关键步骤[10]。Zhang等[11]研究发现，PRL-3与Ⅱa类组蛋白脱乙酰基酶4(HDAC4)竞争性结合，导致HDAC4与心肌细胞增强因子2A(MEF2A)和组蛋白分离，乙酰化的MEF2A进而与性别决定相关基因簇2(SOX2)启动子区域结合，促进SOX2表达，从而诱导卵巢癌细胞转化为肿瘤干细胞。Liu等[12]研究结果显示，PRL-3在卵巢癌中表达水平升高，敲除PRL-3基因能抑制卵巢癌细胞株A2780生长，推测PRL-3可通过抑制c-fos转录，参与调节整合素α2的信号通路，从而参与浆液性卵巢癌的转移。本研究结果显示，浆液性卵巢癌患者血清PRL-3表达水平明显高于对照组，且高级别患者表达量高于低级别患者，表明血清PRL-3在浆液性卵巢癌中高表达，且随着癌症进展而不断升高。原因可能是PRL-3可通过调控多种信号通路，影响卵巢癌细胞的增殖和凋亡，并诱导卵巢癌细胞向肿瘤干细胞转化，从而参与浆液性卵巢癌的发生发展。本研究高、低级别浆液性卵巢癌Ⅰ-Ⅱ期、Ⅲ-Ⅳ期患者间均未见差异，提示FIGO分期对血清PRL-3表达量影响不大。既往研究表明，PRL-3-HDAC4-MEF2A / histones-SOX2信号转导轴可能是抑制卵巢癌转移和复发的潜在治疗靶标，PRL-3在卵巢癌的发生发展中发挥重要作用[11]。PRL-3可成为浆液性卵巢癌的潜在生物标志物。因此本研究探讨了PRL-3对浆液性卵巢癌的诊断价值，结果显示血清PRL-3水平诊断高、低级别浆液性卵巢癌的AUC为0.887，截断值为1.95，灵敏度为90.2%，特异性为77.8%，提示PRL-3水平对高、低级别浆液性卵巢癌具有一定的诊断价值。PRL-3已被证明参与了多种肿瘤发生发展的环节，目前已针对PRL-3为癌症治疗靶点展开了广泛研究。本研究结果显示PRL-3在卵巢癌中特异性表达且具有一定诊断价值，提示PRL-3有望成为浆液性卵巢癌的靶向治疗位点，针对不同级别患者采用不同治疗方案，以期取得更好的临床疗效。

综上所述，浆液性卵巢癌患者血清中PRL-3表达上调，且高级别患者表达量高于低级别患者，PRL-3对高、低级别浆液性卵巢癌有一定诊断价值。但由于本研究样本量少，结果可能具有局限性，尚需扩大样本量进一步验证PRL-3在临床诊断及治疗中的应用价值。