Aptima、HC2检测对CIN2及以上宫颈病变的诊断效果

于新颖 季 静

1.江苏省常州市第二人民医院(213003)；2. 江苏省无锡市妇幼保健院

宫颈上皮内瘤变2级(CIN2)的发生可影响到宫颈癌前病变的进展速度，导致远期宫颈浸润癌或宫颈原位癌发病风险上升[1-2]。临床上通过对于宫颈病变的早期诊断，为宫颈癌的筛查及宫颈病变的阻断提供参考。宫颈细胞学筛查能够在 CIN2级宫颈病变诊断中发挥作用，但筛查标本采集误差较大、假阴性率相对较高。人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA(Aptima)和HPV DNA二代杂交捕获(HC2)能够在宫颈病变的诊断过程中发挥作用，其中HPV E6/E7 mRNA能够评估宫颈HPV病毒浸润和潜在致病风险[3-4]；而HC2能够评估不同亚型HPV病毒感染的高危分型，对于指导宫颈病变的筛查及宫颈锥形切除均具有一定价值[5]。为了对比分析HPV E6/E7 mRNA及HC2的具体筛查价值，从而指导临床上宫颈癌前病变的诊疗，本次研究选取疑似宫颈病变患者，探讨HPV E6/E7 mRNA及HC2筛查效能。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年1月—2019年6月在本院就诊的疑似宫颈病变患者100例，中位年龄42.5岁(24～72岁)。纳入标准：①最终均经病理学确诊；②本院行Aptima、HC2检查；③患者及家属知情同意。排除标准：①有宫颈手术史；②有盆腔放射治疗史。本研究经本院伦理委员会审批。

1.2 Aptima检查

采用细胞裂解法获取宫颈刮片检测液体，取上清液移入另一EP管，加入等体积的异丙嗪溶液，室温放置30min，1000r/min离心10min，取沉淀物为RNA，加入75%乙醇溶液1ml溶解， 1000r/min离心10min取上清，加入20μl DEPC水计算RNA浓度，单位为μg/μl。采用SuperScript IV 逆转录试剂盒(赛默飞公司，Invitrogen SuperScript IV反转录酶)进行cDNA合成，采用金斯瑞oligo进行引物合成和设计，β-actin作为内参，E6/E7 mRNA引物5’tttggctctgaccattctgt 3’:下游5’gtcctcacctgagggacccc3’，设置3组复孔，取平均值，CISILE2018高通量PCR仪器购自常州福生生物技术有限公司。

1.3 HC2检查

采用美国Digene公司的第二代杂交捕获试验(HC-II)采样工具包从宫颈管采集标本,进行HC-II检测操作并分析。检测目前已知的13种高危型HPV，HPV≥ 1.0 ng/L为阳性。

1.4 统计学处理

数据整理分析采用SPSS22.0软件。HPV E6/E7 mRNA表达值采用M(Q25,Q75)表达，两组比较采用秩和检验；诊断价值采用灵敏性、特异性、阳性预测值和阴性预测值评估，计数资料比较使用χ2检验。检验水准为双侧=0.05。

2 结果

2.1 确诊情况

100例疑似宫颈病变患者最终确诊慢性炎症9例，CIN1级23例，CIN2级34例，CIN3级22例，宫颈癌12例。

2.2 不同宫颈病变者HPV E6/E7 mRNA值比较

HPV E6/E7 mRNA从高到低依次为：CIN3[27801.19(16781.29,32011.88)copies/ml]， CIN2[9003.82(6780.88,11021.80)copies/ml]，宫颈癌[6770.28(4100.28,7220.22)copies/ml]，CIN1[5102.39(3378.82,7800.83)copies/ml]，慢性炎症[2810.02(1622.01,3820.88)copies/ml](P=0.000)。

2.3 Aptima和HC2检测诊断CIN2及以上病变价值

诊断CIN2及以上病变的灵敏性Aptima检测低于HC2检测，特异性Aptima检测高于HC2检测(均P<0.05)；Aptima和HC2检测诊断CIN2及以上病变的阳性预测值和阴性预测值未见差异(P>0.05)。见表1。

表1 两种检测诊断CIN2及以上宫颈病变的价值[%(例)]

3 讨论

不同高危因素导致的宫颈柱状上皮的早期病变，能够增加宫颈癌前病变或者宫颈癌的发生风险[6]。在HPV16/18高危亚型感染的过程中，癌基因的异常激活，能够显著提高宫颈柱状上皮细胞分化障碍的风险，促进宫颈原位癌的发生[7]。通过对于宫颈病变的早期筛查，能够为临床上宫颈部分切除或者锥形切除提供参考，从而阻断宫颈上皮内瘤变-宫颈癌的演变过程[8]。临床上采用宫颈细胞学筛查(TCT)进行常规筛查后，由于部分患者宫颈病变位置较深，或检测主观差异，部分研究报道TCT筛查灵敏度不足70%，其漏诊率维持在较高水平[9]。单纯HPV病毒分型虽然能够在宫颈病变的筛查过程中发挥作用，但单纯HPV病毒分型诊断宫颈高级别上皮内瘤变的阳性符合率较低，部分患者可由于使用药物而呈现HPV假阴性[10]。本次研究通过对于HPV E6/E7 mRNA及HC2诊断学对比，探讨高级别CIN病变筛查的有效手段。

HPV E6/E7 mRNA是反应HPV病毒致病颗粒复制程度的指标，能够通过整合宫颈柱状上皮细胞，加剧癌细胞内P16蛋白或者MAPK信号通路的激活，最终促进癌细胞的持续增殖并显著诱导癌细胞扩增风险；HC2是反应HPV高危病毒感染的分型指标，高危型HPV病毒感染，能够促进宫颈癌细胞的发生和中晚期病情进展过程[11]。目前为止多数研究揭示了E6/E7 mRNA或HC2在诊断宫颈病变过程中的作用[12-13]，但在高级别CIN2患者中的对比分析较少。

在本次纳入研究的宫颈病变患者中多数患者的宫颈病变为CINI1-2，持续的宫颈CIN1-2进展能够增加远期宫颈癌的发生风险。低级别宫颈病变患者中HPV E6/E7 mRNA扩增水平高于宫颈炎症患者；而在宫颈高级别病变患者中HPV E6/E7 mRNA高于低级别及宫颈炎症患者，表明HPV E6/E7 mRNA在不同宫颈病变患者中存在表达差异。宫颈病变程度越高、病情越严重，HPV E6/E7 mRNA扩增水平越高。这主要由于宫颈病变程度越高，宫颈柱状上皮细胞内HPV致病颗粒蛋白的转录水平越高，癌基因的整合作用越明显，导致HPV E6/E7 mRNA上升。有其他研究者也发现，在宫颈高级别病变或宫颈癌患者中，HPV E6/E7 mRNA扩增水平可随着宫颈癌细胞活跃程度的上升而升高，而宫颈原位癌或浸润癌患者中，HPV E6/E7 mRNA的表达可呈对数上升[14-15]。相比于HC2可以发现 ，HPV E6/E7 mRNA诊断宫颈高级别病变的灵敏度较低，而诊断特异度相对较高。提示HPV E6/E7 mRNA对于宫颈病变筛查的敏感性虽然低，但准确性相对较强，临床上可通过HC2检测提高敏感度，改善高级别病变的筛查效能。Aptima和HC2检测诊断CIN2及以上病变的预测值并无明显差异，提示二者均能够在宫颈高级别病变筛查中发挥作用。

综上，Aptima与HC2检测在CIN2及以上病变中有较好的诊断效果，必要时临床上可以通过联合Aptima与HC2提高宫颈CIN2高级别病变的筛查效果。