984例高龄孕妇无创产前基因检测结果与妊娠结局分析

赵艳芳 朱健生 万 宁 汪凤仪

1.安徽省芜湖市妇幼保健院(241001)；2.安徽省妇幼保健院

相关数据统计显示，我国新生儿出生缺陷总发生率为5%～6%，且有逐年增长趋势[1]。出生缺陷中染色体异常是最常见病因，产前胎儿染色体异常筛查是最有效防控措施[2]。血清学标志物检测及彩超检查是目前早期筛查出生缺陷的常规手段，但血清学标志物检出率为60%～85%，且存在5%假阳性，影响其检测精度[3]。介入性羊膜腔穿刺或绒毛穿刺检测染色体异常能够获取准确性高达98%～99%的检测结果，成为产前胎儿染色体异常筛查的金标准[4]。但有创操作存在流产风险。利用孕妇外周血胎儿游离DNA无创产前基因检测技术(NIPT)[5]，在21-三体、18-三体、13-三体、性染色体等染色体异常检测中敏感性、特异性均优于常规血清学检测[6]。本研究对芜湖地区984例高龄孕妇产前NIPT检测结果及妊娠结局进行回顾性分析，探讨NIPT筛查价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

经本院伦理委员会审批批准，选取2018年9月-2020年1月本院自愿行NIPT检测的高龄孕妇临床资料。纳入标准：≥35岁单胎妊娠；孕妇及家属知情自愿要求行NIPT检测。排除标准：①孕周<12周；②夫妻一方有明确染色体异常；③1年内接受过异体输血、移植手术、异体细胞治疗等；④胎儿超声检查提示有结构异常必须产前诊断；⑤有基因遗传病家族史或提示胎儿罹患基因病高风险；⑥孕期合并恶性肿瘤。

1.2 检测方法

1.2.1标本采集采集孕妇空腹外周静脉血取上清血浆离心处理后取上层血浆，置-80℃待测。

1.2.2 NIPT检测试剂盒购自安诺优达基因科技(北京)有限公司，提取待测样本中胎儿游离DNA。经cffDNA末端修复及连接反应后得到双链DNA分子。经PCR扩增后得到DNA测序文库。采用高通量基因测序技术进行样本测序检测。计算每条染色体reads占比及Z值，分析染色体非整倍体异常情况。

1.2.3染色体核型分析及基因芯片检测对NIPT检测提示高风险孕妇建议行羊膜腔穿刺产前诊断。告知侵入性产前诊断风险，签署知情同意书后常规消毒，B超引导下经腹羊膜腔穿刺取羊水。①核型分析： 1500r/min离心处理10min，将羊水细胞接种培养7～10d，获取羊水细胞制片，经标准低渗、固定、制片、G显带、染色处理后分析细胞核型，并与ISCN2016进行核型比对分析。②基因芯片检测：应用单核苷酸多态微阵列(美国AffymetrixCytoScan 750K)，按照芯片操作手册进行DNA消化、扩增、纯化、片段化、标记信号、杂交、洗片染色及扫描等。采用美国Affymetrix 基因芯片染色体分析软件(ChAS)将扫描所得原始芯片数据进行分析。拷贝数变异的报告阈值是缺失≥200kb，重复≥500kb。

1.3 妊娠结局随访

对所有NIPT检测高龄孕妇电话随访，记录产前检测结果及妊娠结局、新生儿状况等，随访截止到2020年7月。

2 结果

2.1 NIPT筛查

共纳入984例研究对象，年龄(40.7±5.5)岁(35～47岁)，孕周(20.6±4.1)周(13～24周)。984例行NIPT技术检测，有14例提示染色体筛查结果异常，筛查阳性率为1.42%。其中21-三体4例、18-三体3例13-三体2例、性染色体异常4例，其他染色体异常1例。

2.2 NIPT筛查与产前诊断对比

对14例NIPT筛查结果异常的高龄孕妇行羊膜腔穿刺并产前诊断。见表1。

2.3 妊娠结局

随访984例NIPT检测高龄孕妇，筛查低风险970 例中961例正常妊娠，9例因妊娠并发症或其他原因终止妊娠。NIPT筛查高风险14例经产前诊断明确染色体异常10例，其中3例21-三体(47，XN，+21)，2例18-三体(47，XN，+18)、2例13-三体(47，XN，+13)，1例特纳综合征(45，X)及1例XXY综合征(47，XXY)。其中9例选择引产终止妊娠；1例胎儿XXX综合征(47，XXX)坚持妊娠，产后新生儿状况正常；其余4例产前诊断结果正常(46，XN)，产后新生儿状况正常。见表2。

表1 NIPT筛查异常与产前诊断结果对比情况

表2 14例NIPT检测高风险孕妇羊水穿刺检测及妊娠结局

3 讨论

大量研究表明[7]，高龄孕妇不仅存在妊娠期并发症高风险，也存在新生儿出生缺陷风险。染色体非整倍体异常是临床常见出生缺陷，只能通过产前筛查来降低此类出生缺陷。常规B超检查和血清学检测有助于产前诊断，但假阳性率及假阴性率较高无法确诊[8]。羊水穿刺作为新生儿染色体异常排查的“金标准”特异性与灵敏性较高，但介入性检测有流产和感染风险，且患传染病孕妇不适合羊水穿刺。相关研究证实[9]，孕12周后孕母外周血游离胎儿DNA片段已够检测所需量，DNA片段基本包含胎儿所有基因组序列，通过检测孕妇外周血游离DNA即可获得胎儿染色体情况。NIPT可直接检测孕母外周血胎儿游离DNA而明确新生儿染色体情况，在常规产检及染色体异常筛查中有独特优势。

随着NIPT技术的广泛应用，有关NIPT假阳性案例报道不断增多。Suzumori[10]等提出NIPT对21-三体异常检出率为90.1%，假阳性率为0.21%；Hashilon[11]等报道NIPT作为一线筛查方案时其对高危、低危孕妇假阳性率不同；张卫华[12]等报道NIPT对21-三体、18-三体、13-三体假阳性率为0.17%，该研究针对非高龄孕妇。可见，虽然NIPT优于常规血清标志物筛查，但临床假阳性提示NIPT检测特异性有限，其阳性预测值、敏感性仍有待提高。本研究结果显示，984例高龄孕妇NIPT检测阳性率为1.42%，与文献[13]结果一致。通过对14例NIPT高风险者行产前诊断， 21-三体阳性预测值为75.0%，18-三体阳性预测值66.7%；13-三体阳性预测值为100%，性染色体阳性预测值为75.0%，他染色体阳性预测值为0%。考虑本研究对象针对高龄孕妇，且样本量较少，与文献[14-15]等结果存在一定差异。同时检测技术的局限性，NIPT对特殊结构异常如染色体倒位、易位不敏感。此外，本研究中尚有4例NIPT检测异常但产前诊断结果正常，这可能与限制性胎盘嵌合有一定关联，具体原因需进一步研究。提示，NIPT虽然是一种优于常规血清学检测的无创产前诊断手段，检测敏感性较好，但特异性受限导致NIPT尚不能彻底取代介入性染色体核型分析、基因芯片等产前诊断方法。

综上所述，NIPT技术应用于高龄孕妇有较好的筛查价值， NIPT筛查结果为高风险者仍需进行介入性产前诊断，从而避免假阳性或非必要引产。