云南大理白族儿童冬季腹泻病原微生物检测与分析

忽欣怡，李雲，李学尧，傅思武，聂蕾，刘玮玮

（西北民族大学医学部，甘肃 兰州 730030）

0 引言

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2019 年12 月至2020 年2 月大理地区三甲医院（主要为大理大学第一附属医院）内6 岁以下腹泻患儿门诊粪便标本297 份，其中男性170份，女性127 份；0 ≤x＜1 岁263 份（88.55%），1≤x＜3岁24份（8.08%），3≤x≤6 岁10份（3.37%）。297 份标本中白族儿童有112 份，白族男性63 份，白族女性49 份；0 ≤x＜1 岁104 份（92.86%），1 ≤x＜3 岁6 份（5.36%），3 ≤x ≤6 岁2 份（1.79%）。纳入标准：年龄≤6 岁；24h 排便≥3 次，且大便性状改变（呈稀便、水样便等）[2]，所有患儿监护人均知情同意并签署同意书。

1.2 试剂仪器

轮状病毒/腺病毒抗原检测试剂盒（乳胶法）（杭州艾博生物医药有限公司），血琼脂平板、麦康凯平板、念珠菌平板（郑州安图生物工程股份有限公司），革兰氏阳性、阴性细菌药敏卡（法国生物梅里埃公司），牛脑心浸液培养基（天和生物），全自动微生物鉴定仪（型号：VITEK 2 Compact，法国生物梅里埃公司）。

1.3 实验方法

1.3.1 镜检筛查寄生虫感染。

1.3.2 细菌培养与鉴定

标本于牛脑心浸液培养基内增菌，24h 后分别接种于血平板和麦康凯平板，37℃培养24h 后选择疑似致病菌的菌落进一步分纯（如：血平板有疑似念珠菌的灰白色隆起菌落，可进行格兰染色确认后接种于念珠菌显色平板上）。相关操作参照《全国临床检验操作规程》[3]进行。已分离纯化的病原菌用全自动微生物鉴定系统VITEK 2 Compact 进行鉴定。

1.3.3 病毒学检测

轮状病毒和肠道腺病毒检测采用金标及乳胶免疫层析法，具体操作步骤严格按说明书进行。

1.4 统计学分析

采用SPSS 19.0 软件，计数资料用百分比（%）表示，检出率的组间比较采用χ2检验，检验水准α=0.05，P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 大理地区三甲医院6 岁以下腹泻患儿检测情况

297 份标本经病原检测阳性为107 份，检出率为36.03%。其中轮状病毒（HRV）检出94 例，检出率最高，达31.65%（94/297），见表1。3 个年龄组中检出率差异无统计学意义（P＞0.05），不同性别儿童的检出率比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

综合以上实验的结果，设计出生长准有序氮化镓纳米线的两步生长法：使用2nm/2nm镍-金双层薄膜作为催化剂，第一步在850℃生长10s得到有序的但长度较短的纳米线，作为有序纳米线“幼苗”；第二步将温度降低到750℃生长200s，得到表面光滑，方向性好的有序纳米线。

2.2 白族儿童检测情况

白族儿童112 份腹泻标本中经病原检测阳性为37 份，检出率为33.04%。其中轮状病毒（RV）检出31 例，检出率最高，达27.68%（31/112），见表3。3 个年龄组中检出率差异有统计学意义（P＜0.05），不同性别儿童的检出率比较差异无统计学意义（P＞0.05）见表4。

表1 297 例腹泻患儿病原微生物检出率及构成情况（n,%）

表2 297 例腹泻患儿病原微生物年龄、性别分布（n,%）

表3 112 例白族腹泻患儿病原微生物检出率及构成情况（n,%）

表4 112 例白族腹泻患儿病原微生物年龄、性别分布（n,%）

2.3 白族和其他民族患儿检测情况

107 例病原阳性标本病原微生物民族分布情况见表5。

表5 107 例病原阳性标本病原微生物民族分布[n(%)]

3 讨论

3.1 研究意义

腹泻病（Diarrhea）是由多种病因引起的以大便次数增多（每天＞3 次）和大便性状改变（稀便或水样大便）为主要特征的消化道综合征。全球每年约有17 亿例儿童腹泻病的发生，每年约有52.5 万名5岁以下儿童死于腹泻病，是5 岁以下儿童死亡的第二大原因[4]。2019 年中国营养学会指出中国0～5 岁儿童过去2 周内腹泻发生率为7.5%，处于较高水平，且受年龄、城乡、母亲教育程度、家庭人均收入等多因素的影响[5]。加之白族的饮食结构与生活习惯与其他地区人群相比有所不同，且经济相对落后、疾病预防意识淡薄、高原山区气候多变等，儿童腹泻发病率高。且目前尚无此方面的研究，临床缺乏基础研究数据支撑。因此开展云南大理白族儿童冬季腹泻病原学监测工作意义重大，可为该地区儿童冬季腹泻的防控提供数据参考。

3.2 结果分析

3.2.1 大理地区三甲医院6 岁以下腹泻患儿检测情况

本研究显示，大理地区297 份儿童腹泻标本病原检出率为36.03%（107/297），其中病毒占94.39%（101/107），细菌占1.87%（2/107），真菌占2.80%（3/107），轮状病毒合并猪带绦虫感染占0.93%（1/107）。主要集中分布于0～1 岁婴儿，占85.05%（91/107）。

3.2.2 白族儿童检测情况

112 份白族儿童腹泻标本病原检出率为33.04%，病毒占89.19%（33/37），细菌占2.70%（1/37）,真菌占5.41%（2/37），轮状病毒合并猪带绦虫感染占2.70%（1/37）。说明2019 年12 月至2020 年2 月云南大理白族儿童冬季腹泻病原微生物以病毒为主（尤其是轮状病毒HRV，阳性占比83.78%），这与本研究中所有6 岁以下腹泻儿童病原检测情况一致，也与上海等地区研究结果一致[6]。据相关统计，全球每年约有45.34 万5 岁以下儿童死于轮状病毒感染所致的腹泻，死亡率约为5.00%[7]。这可能与轮状病毒主要通过空气和接触被污染物进行传播、传播速度快、有2～3d 潜伏期，且侵犯人体肠道后易诱发肠道坏死，造成严重的水、电解质、酸碱平衡紊乱有关[8]。从年龄分布来看，阳性占比最高为0 ≤x＜1 岁组（83.78%），且3 岁以下患儿阳性占比（94.59%）明显高于3 岁以上患儿，这可能与3岁以下婴幼儿从母体获取的IgG 抗体逐渐消耗殆尽，而特异性IgM 抗体产生不足，免疫功能尚未发育成熟有关。这与国内报道有所不同，朱佩强[9]研究显示1 ≤x＜3 岁年龄组检出率最高，造成不同的原因除了地区差异外还可能和本研究样本量较少致使数据不够具有代表性有关。而从性别分布来看，白族儿童男女检出率差异无统计学意义（P=0.939＞0.05），提示白族儿童腹泻检出率对于不同性别无差异。

3.2.3 各民族分布情况

从表5 可知，107 例阳性病例中，汉族和白族儿童最多，且所有民族病原阳性占比最高均为轮状病毒。此外，检出的所有福氏志贺菌、猪带绦虫感染以及大部分的白色念珠菌感染都来自白族儿童，提示可能与白族人群喜食生皮（生猪皮）等饮食习惯有一定关系，值得相关疾病防治时引起注意。

4 结论

云南大理白族儿童冬季腹泻病原微生物以轮状病毒为主，此外白色念珠菌、福氏志贺菌、猪带绦虫感染也占一定比例，提示可能与饮食习惯等社会因素有关[10-12]。其检出率与性别无关，但与年龄有关，3 岁以下儿童更容易发生感染性腹泻，这与婴幼儿自身免疫功能未完善有关[13-15]。因此，临床治疗应在了解微生物感染类型及分布规律基础上实行针对性防治，同时家属和医护人员也应该重视饮食卫生和习惯在腹泻防治中的作用。