循环MicroRNA-208b 对急性心肌梗死近期临床预后的影响

司红金，金 晨，徐 海

（南京医科大学附属淮安第一医院心内科，淮安 223300）

近年来研究发现microRNA（miRNA）可以通过与mRNA 的3’UTR 结合而在转录后水平对基因的表达进行精细的调控，它同时存在于细胞内及外周血中，参与各类疾病的发生发展，甚至可以作为诊断疾病的潜在生物学标记物，如肿瘤、组织损伤、自身免疫性疾病等［1］。特异表达于心脏的miRNA 在心肌损伤如心肌梗死时外周血循环浓度显著增高，如急性心肌梗死（AMI）患者外周血 microRNA-208b（miR-208b）表达水平显著高于不稳定心绞痛和非冠心病患者，可以作为AMI 的标记物，也是潜在的预测AMI 患者临床预后的指标［2］。最重要的是，miR-208b 在AMI 发生1h 内即能检测到明显升高，较传统心肌损伤标记物如cTn 具有一定优势，能作为诊断早期AMI 的生物学指标［3］。然而，目前对于miR-208b 作为AMI 患者近远期临床预后标记物的意义存在争议，有研究认为，miR-208b 是心血管事件的独立危险因素，增加心室重塑风险，而有学者利用cTnT 进行调整后发现miRNA 预测预后的价值较低，且miR-208b无法准确预测AMI 患者远期死亡率［2，4］。为进一步明确miR-208b 预测AMI 近期临床预后价值开展本项研究。

1 资料与方法

1.1 研究对象 随机连续性纳入2018 年4 月～2019 年3 月就诊于我院心血管内科的明确诊断为AMI 的患者共120 人，其中男性66 例，女性54 例，年龄介于47～81岁，平均（63.65±8.09）岁。AMI 的诊断标准依据参考中华医师协会制定的《急性冠脉综合征急诊快速诊疗指南》［5］，具体如下：①血中心肌坏死标志物（cTnI 或CKMB）明确升高，再结合至少以下三种提示心肌缺血的一种：a、典型胸痛超过30 min；b、心电图的动态演变（ST-T 明显抬高或压低，新出现的病理性Q 波，R 波进行性丢失或新出现的左束支传导阻滞）；c、影像学发现新的丧失活力的心肌或出现心室壁的反常运动［6］。纳入标准：（1）胸痛持续时间在24 小时内；（2）入院后行冠脉造影术明确AMI；（3）同意入组纳入研究，出院后规律服药及定期接受随访。同时排除合并不宜入组的疾病及个人原因治疗中断者。收集患者临床基本特征（包括年龄，性别构成及合并慢性病史），见表1 所示。

所有患者诊治过程获得我院医学伦理委员会认可，并获得充分知情同意。

1.2 标本收集及miR-208b 的检测 入院即刻抽取受试者静脉血约5mL 于抗凝管中，4℃静置半小时后离心3000g×10min，抽提血清于无菌RNA-free EP 管中，存储于-80℃冰箱中备用抽提RNA；使用mirVana PARIS 试剂盒提取血清中总RNA，应用Taq-Man miRNA Reverse Transcription 试剂盒进行逆转录，最后以Applied BioSystems 公司的miR-208b 和U6 检测试剂盒检测血浆miR-208b 及U6；每个样本均进行三次检测，检测结果取平均值［7］。

1.3 cTnI 和CK-MB 检测 入院即刻抽取静脉血进行快速cTnI 及CK-MB 检测，检测方法为电化学免疫荧光法。

1.4 MACE 定义 随访所有受试者出院后6 个月内主要不良心血管事件（major adverse cardiovascular events，MACE）发生情况包括新发心力衰竭、心因性死亡、非致死性再梗死、恶性心律失常及非计划再入院等。其中27 例患者随访过程中发生MACE，归为MACE 组，余下93 例未发生MACE 归为非MACE 组。

1.5 统计学方法 所有数据均采用SPSS 17.0 for windows 和SigmaPlot10.0 进行分析，以P＜0.05 为差异有统计学意义。连续计量资料采用均数±标准差（mean±SD）表示，两组间比较采用两个独立样本t 检验；计数资料以率或构成比表示，组间比较采用独立样本χ2检验；以Person 相关性分析评价miR-208a 与CK-MB及cTnI 之间的相关性，通过ROC 曲线估测miR-208b预测AMI 患者近期MACE 的价值，取约登指数最大为最佳诊断界值；同时应用Kaplan-Meier 生存分析研究miR-208b 水平对无MACE 生存率的影响。

2 结果

2.1 两组患者临床资料比较 由表1 可见，两组患者临床基本特征（年龄、性别构成比、合并慢性病史等）无明显差异性，具有可比性；而MACE 组患者miR-208b、CK-MB 及cTnI 水平显著高于非MACE 组患者，差异具有统计学意义，见表2。

表1 两组患者基本临床特征比较（例/%）

表2 实验室检查指标、胸痛持续时间及循环micoRNA-208b比较

2.2 miRNA-208b 与CK-MB 及cTn I 关系 由表2，我们发现，MACE 组患者miRNA-208b、cTnI 及CKMB 水平均显著高于非MACE 组，进一步通过Pearson相关分析分别比较miRNA-208b 与cTnI 及CK-MB 发现，miR-208b 与cTnI 呈正相关关系（r=0.307，P＜0.01），然而，miRNA-208b 与CK-MB 无相关关系（r=0.204，P=0.122），详见图1 及图2。

2.3 ROC 曲线评估miR-208b 对AMI 患者近期预后的预测价值 如图3 所示，miR-208b 与cTnI 对AMI 患者近期预后预测价值较高，其ROC 曲线下面积（AUC）（95%CI）分别为0.84（0.75-0.94）和0.92（0.86-0.98），两者具备同等预测价值（P＞0.05），且两者预测价值均显著高于CK-MB（AUC（95%CI）=0.68（0.56-080）），P＜0.05。三者最佳预测界值（约登指数最大）及在该值下的预测敏感性和特异性如表3 所示。

图1 miR-208b与cTnI呈正相关关系

图2 miR-208b与CK-MB无明显相关性

表3 cTnI、CK-MB及miR-208b对STEMI患者近期临床预后的预测效率

2.4 Kaplan-Meier 生存分析研究miR-208b 水平对无MACE 生存率的影响 由表3 可知，miR-208b 的最佳预测界值为3.18，以3.18 为界，将所有患者分为高miR-208b 组（miR-208b＞3.18，n=66）以及低miR-208b组（miR-208b ≤3.18，n=59），应用Kaplan-Meier 生存分析发现，低miR-208b 组无MACE 生存率显著高于高miR-208b 组（P＜0.05），如图4 所示。

3 讨论

既往已有多项研究证明，心脏相关microRNA 可以作为诊断AMI 的标记物，如miR-208b、miR-133a及miR-499，且在AMI 早期外周血含量即明显升高，可以作为早期诊断AMI 的指标［1-2，7-8］，但目前关于microRNA 用于预测AMI 临床预后的临床意义仍旧存在较大争议。我们发现，随访过程中发生MACE 的AMI患者入院即刻外周血循环miR-208b 水平显著高于非MACE 患者，同时Pearson 相关分析表明，miR-208b 水平与cTnI 水平呈正相关关系，然而miR-2008b 与CKMB 之前的相关性未发现，与既往研究不一致［9］。cTnI是由损伤的心肌细胞释放至血，外周血循环cTnI 水平可反映心肌损伤范围，同时也是评估AMI 患者临床预后的有利指标［10-11］，既往研究指出miR-208b 也可能是由损伤的心肌细胞释放入血，其水平反应心肌损伤程度及病变范围［2］，AMI 患者血管病变越重miR-208b 水平越高，这可能是miR-208b 与cTnI 两者呈正相关关系的理论基础。以上结果表明miR-208b 可以作为评估AMI 患者临床预后的指标，同时miR-208b 与cTnI 的预测信息不完全重叠，miR-208b 可以提供cTnI 以外的诊断信息，两者联用可以弥补cTnI 升高延迟及时间窗相对较短等不足。microRNA 对预后的影响可能与其影响心肌细胞的生存及心脏功能恢复，加重心肌纤维化，参与心室重构过程等有关［12］。

图4 低miR-208b组无MACE生存率显著高于高miR-208b组

通过ROC 曲线发现miR-208b 对AMI 患者近期预后的预测价值较高，其曲线下面积（AUC）（95%CI）为0.84（0.75-0.94），最佳诊断界值为3.18，该界值下的敏感性及特异度分别为0.69（0.53-0.82）和0.90（0.73-0.98）。更重要的是，我们发现miR-208b 的预测价值与cTnI 相近均显著高于CK-MB，说明miR-208b 可以作为AMI近期临床预后的标记物，与cTnI 联合应用时可提高其预测AMI 患者6 个月内MACE 的准确性。随着循环miR- 208b 水平增加，AMI 患者30d 死亡风险和心衰风险相应增加［13］；此外，高水平的miR-208b 发生MACE及左心室重塑的风险较大，AMI 患者接受有效再灌注治疗后循环miR-208b 水平显著降低，这与再灌注治疗防止心梗范围进一步扩大有关［2］。以miR-208b 的最佳预测界值3.18 为界，将患者分为高miR-208b 组（miR-208b＞3.18，n=66）以及低miR-208b 组（miR-208b ≤3.18，n=59），应用Kaplan-Meier 生存分析发现，低miR-208b 组无MACE 生存率显著高于高miR-208b 组，进一步表明miR-208b 可以作为评估AMI 患者近期临床预后的标记物。

总之，本研究发现循环miR-208b 可以作为预测AMI 近期临床预后的生物学标记物，高水平的miR-208b 不利于预后，通过治疗下调miR-208b 进一步改善AMI 预后的尚需开展研究，增加新的证据。