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GC法测定留兰香根茎叶中香芹酮的含量

2021-05-12罗洪莲万红才刘晓艳徐作刚任永奇

中国民族民间医药 2021年7期
关键词:香芹薄层内标

罗洪莲 万红才 刘晓艳 徐作刚 段 萍 任永奇

黔南州食品药品检验所,贵州 都匀 558000

留兰香(MenthaspicataL.)为唇形科薄荷属(Mentha Linn)植物,又名狗肉香,在我国贵州、云南、四川、新疆等地均有栽培,其味辛、甘,性微温,具有疏风解表、理气止痛、之功效。现代药理研究表明:留兰香具有抗菌、抗炎、抗病毒及抗氧化活性[1-4],常用于治疗感冒发热、咳嗽、头痛、咽痛、跌打瘀痛、胃肠胀气、乌疔、鸡窝寒、全身麻木和小儿疮疖。留兰香味清新、凉爽、香甜,其嫩叶常做调味香料食用,其挥发油广泛应用于牙膏、口香糖、糖果、香皂等物品的加香[5]。根据文献报道香芹酮为留兰香挥发油的主要有效成分[6],但其在全草中的含量分布情况尚不明确,为提高留兰香资源的利用效率,本实验采用气相色谱法(GC)及薄层色谱法对其根、茎、叶中的香芹酮含量差异进行比较。

1 仪器与试药

Aglient 7890B 气相色谱仪(美国Aglient公司),SK250LHC超声波清洗仪(上海科导仪器有限公司),AG135电子天平(梅特勒托利多);香芹酮对照品(德国Dr.Ehrenstorfer GmbH 批号: 141713,含量:99.0%),正十一烷对照品(德国Dr.Ehrenstorfer GmbH批号:G169369,含量99.6%),其他试剂均为化学分析纯。10批次留兰香药材分别采集于都匀大坪(批号:201901)、都匀邦水(批号:201902)、开阳毛云(批号:201903)、独山麻万(批号:201904)、独山影山(批号:201905)、遵义桐梓(批号:201906)、都匀剑江河(批号:201907)、都匀洛邦(批号:201908)、威宁草海(批号:201909)、毕节清水(批号:201910),均经贵州省食品药品检验所李扬主任药师鉴定为留兰香药材。

2 方法与结果

2.1 留兰香根茎叶的薄层图谱 分别称取3批次留兰香药材(批号分别为:201901、201902、201903)根、茎、叶细粉3.0 g,加乙醇30 mL,水浴回流30 min,滤过,取续滤液2 mL作为供试品溶液。另取香芹酮对照品约10mg,置10ml量瓶中,用乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。吸取对照品溶液与供试品溶液各5μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正己烷:乙酸乙酯:甲酸(10∶1∶0.1)为展开剂,展开后,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,105℃加热至斑点显色清晰。3个批次的留兰香叶供试品溶液色谱中,在与香芹酮对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点,在茎与根的供试品溶液色谱中,几乎看不见与香芹酮对应的斑点。色谱图如图1所示。

1.香芹酮对照品;2~10依次为3个批次留兰香药材的叶、茎、根图1 留兰香根茎叶的薄层图谱

2.2 留兰香根茎叶中的香芹酮GC含量测定

2.2.1 内标溶液的制备 取正十一烷对照品适量,精密称定,用正己烷稀释制成正十一烷浓度为0.2 mg/mL的溶液,作为内标溶液。

2.2.2 对照品溶液的制备 取香芹酮对照品适量,用内标溶液稀释制成香芹酮浓度约为0.2 mg/mL的溶液,作为对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备 取留兰香粉末约0.5 g,精密称定,置于具塞锥形瓶中,精密加入10 mL内标溶液,加塞,超声30 min,放冷至室温,用0.45 μm微孔滤膜过滤,即得。

2.2.4 色谱条件及系统适用性试验 色谱柱HP-5弹性石英毛细管柱(30 m×0.32 mm×0.25μm);检测器氢火焰离子化检测器;程序升温条件初始温度50 ℃,以2 ℃ /min 升温至 115 ℃,以 5 ℃ /min 升温至 150 ℃ ;气化室温度 250 ℃ ;检测室温度 280 ℃;尾吹 20 mL;空气 400 mL;氢气 40 mL;进样量 1 μL。在上述试验条件下,样品中的香芹酮、内标正十一烷与其他各杂质峰的分离度达到要求且峰形良好,符合《中华人民共和国药典》2015年版 四部通则0513气相色谱法项下的规定。

图3 香芹酮对照品溶液气相色谱图

图4 留兰香叶供试品溶液气相色谱图

2.2.5 线性试验 精密称取32 mg香芹酮对照品置10 mL量瓶中,用内标溶液溶解并稀释制成3.2 mg/mL的溶液,作为对照品贮备液,精密量取对照品贮备液适量,用内标溶液逐级稀释制成浓度分别为1.6、0.8、0.4、0.2、0.1、0.05 mg/mL的对照品溶液。分别精密吸取1μL按2.2.4色谱条件测定,记录色谱图。以香芹酮对照品溶液与内标溶液峰面积之比为纵坐标(Y),以香芹酮对照品质量浓度 C(mg/mL) 为横坐标(X)绘制标准曲线,并进行线性回归,得到香芹酮的回归方程:Y=0.848X-0.0119(R=0.9998),即香芹酮质量浓度在 0.05 ~ 3.2 mg/mL间呈良好的线性关系。见表1、图5。

表1 香芹酮线性关系数据表

图5 香芹酮标准曲线

2.2.6 精密度试验 取同一对照品溶液重复进样6次,考察系统的精密度。香芹酮峰面积与内标峰面积之比的RSD为0.04%,符合《中华人民共和国药典》2015 年版四部通则9101药品质量标准分析方法验证指导原则中对精密度的要求(RSD≤2%)。见表2。

表2 香芹酮精密度试验结果

2.2.7 稳定性试验 分别于0、2、4、6、8、10 h精密吸取供试品溶液1μL按2.2.4色谱条件测定,记录色谱图。香芹酮峰面积与内标峰面积之比的RSD为0、06%,表明此条件下香芹酮在10 h内稳定。见表3。

表3 香芹酮稳定性试验结果

2.2.8 重复性试验 平行取批号为201902的留兰香药材叶粉末样品6份,按上述方法制备供试品溶液及对照品溶液,按2.2.4色谱条件测定,记录色谱图,按内标法以峰面积计算,6份样品中香芹酮百分含量之间的RSD为1.88%。见表4。

表4 香芹酮重复性试验结果

2.2.9 回收试验 精密称取香芹酮对照品25 mg,用内标溶液稀释制成2.5 mg/mL的对照品贮备液。分别精密吸取对照品贮备液1 mL、2 mL、3 mL置50 mL量瓶中,用内标溶液稀释制成香芹酮浓度分别为0.05 mg/mL、0.1 mg/mL、0.15 mg/mL的溶液,分别作a、b、c溶液。取9份已知香芹酮含量的留兰香叶粉末(香芹酮含量为0.384%,见表4)约0.25g,精密称定,分别置9个具塞锥形瓶中,每三份分别精密加入a、b、c溶液10 mL,加塞,超声30 min,放冷至室温,用0.45μm微孔滤膜过滤,分别精密吸取1μL按2.2.4色谱条件测定,记录色谱图,考察系统的回收率。平均回收率为96.5%,RSD%为1.3%,符合《中华人民共和国药典》2015 年版四部通则9101药品质量标准分析方法验证指导原则中对回收率的要求。见表5。

表5 香芹酮回收率实验结果

2.2.10 留兰香根茎叶中香芹酮含量的测定结果 取10个不同批次留兰香样品,按上述方法制备供试品溶液及对照品溶液,各精密吸取1μL按2.4色谱条件测定,记录色谱图,按内标法以峰面积计算,测定结果见表6。

表6 5批样品中香芹酮含量测定结果

3 讨论

本试验首先选用合适的薄层色谱法[7],对不同批次留兰香根、茎、叶中的香芹酮含量进行测定,由图1可见,3个批次的留兰香叶供试品溶液色谱中,在与香芹酮对照品色谱相应的位置上显相同斑点,在茎与根的供试品溶液色谱中,几乎看不见与香芹酮对应的斑点,表明留兰香叶中香芹酮的含量较高,能在薄层图谱中显清晰斑点,而茎根中香芹酮的含量很低以致此薄层色谱方法未能鉴别出。为进一步确定根茎叶中香芹酮的含量,经查阅文献,本试验选用上述气相色谱条件[8],建立留兰香药材中香芹酮的GC含量测定方法,并对此方法进行方法学考察,确定该方法准确、可靠。测定结果表明,留兰香药材不同部位中的香芹酮含量差异显著,含量高低为:叶>茎>根。此次研究明确了留兰香药材中香芹酮的主要分布部位,为其药用部位的选择提供实验数据依据,以提高留兰香资源的利用效率。

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