贵州省荔波县汉族和布依族女性MTHFR与MTRR多态性的分布

覃意往，莫梅香，张龙炯，罗银亚，韦良银，胡季芳，鲁衍强*

(1.荔波县人民医院 妇产科，贵州 黔南布依族苗族自治州 558400； 2.上海张江普汇转化医学研究院 项目办公室，上海 201314)

叶酸是人体重要的营养素，叶酸摄入不足或代谢障碍会造成体内同型半胱氨酸升高和甲基化降低。孕期叶酸营养不足会导致神经管畸形[1]、先天性心脏病[2]、唐氏综合征[3]、唇腭裂[4]等出生缺陷，并与流产[5]、早产[6]等不良妊娠结局以及妊娠期糖尿病[7]、妊娠期高血压[8]等疾病密切相关。5, 10-亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase ，MTHFR)和甲硫氨酸合成酶还原酶(methionine synthase reductase，MTRR)是叶酸代谢通路中的关键酶，基因多态性决定了不同的酶活性以及叶酸利用能力。本研究针对荔波县汉族和布依族女性开展分子流行病学调查，研究MTHFRC677T、A1298C和MTRRA66G的基因多态性分布，获取本地区的群体遗传学特征。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选取2017年7月至2020年1月在荔波县人民医院进行围孕期保健的育龄健康女性，依据知情同意原则采集口腔黏膜细胞。本研究已获得中国医学科学院生命伦理研究中心批准。入组对象共1 342人，其中汉族236人，布依族1 106人。

1.2 检测方法

利用硅胶吸附法提取口腔黏膜细胞样本的基因组DNA。采用荧光定量PCR技术，检测MTHFRC677T、A1298C和MTRRA66G基因多态性。相关仪器、试剂(ABI公司)。

1.3 统计学分析

采用HaploView4.2软件进行单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)的Hardy-Weinberg平衡、连锁不平衡水平(linkage disequili-brium ，LD)分析。SPSS19.0软件分析基因型和等位基因频率。

2 结果

2.1 Hardy-Weinberg平衡分析

入组对象的MTHFRC677T、A1298C和MTRRA66G基因多态性分布符合遗传平衡(表1)。说明数据来自同一孟德尔群体，样本具有群体代表性。

表1 Hardy-Weinberg平衡分析Table 1 Hardy-Weinberg equilibrium analysis(n)

2.2 基因型频率分析

与汉族女性相比，布依族女性MTHFRC677T、A1298C的基因型频率有差异(P<0.05)，MTRRA66G的基因型频率差异无统计学意义(表2)。

表2 汉族、布依族女性MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G基因型频率Table 2 MTHFR C677T, A1298C, and MTRR A66G genotype frequencies of Han and Buyi women[n(%)]

2.3 等位基因频率分析

与汉族女性相比，布依族女性MTHFRC677T、A1298C的等位基因频率有差异(P<0.05)，MTRRA66G等位基因频率差异无统计学意义(表3)。

表3 汉族、布依族女性MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G等位基因频率Table 3 Allele frequencies of MTHFR C677T, A1298C, and MTRR A66G for Han and Buyi women [n(%)]

2.4 MTHFR C677T和A1298C连锁及单倍型分析

MTHFRC677T和A1298C两位点连锁情况(表4，5)。汉族和布依族女性均有6种组合，没有CT/CC、TT/AC和TT/CC。汉族女性频率最高的是CT/AA，布依族女性频率最高的是CC/AC。

表4 汉族女性MTHFR C677T和A1298C连锁型分布Table 4 Han women’s MTHFR C677T and A1298C linkage distributions(n,%)

表5 布依族女性MTHFR C677T和A1298C连锁型分布Table 5 MTHFR C677T and A1298C-linked distributions of Buyi women

汉族和布依族女性MTHFRC677T和A1298C两个位点构建的单倍型均存在3种组合：CA、TA、CC，两位点间存在完全连锁不平衡(表6)。

表6 汉族、布依族女性MTHFR C677T和A1298C的单倍型分布频率Table 6 Haplotype distribution frequencies of MTHFR C677T and A1298C for Han and Buyi women(%)

3 讨论

THFR和MTRR的基因多态性分布具有地域和民族差异[9]。近年来该领域的报道大多为汉族人群。中国布依族总人口有287万余人，97%分布在贵州省。荔波县隶属黔南布依族苗族自治州，布依族占全县人口的65%。本研究显示，荔波县布依族女性MTHFR677TT基因型频率(4.4%)低于汉族女性(10.6%)，MTHFR1298CC基因型频率(9.7%)高于汉族女性(4.7%)，MTRR66GG基因型频率(7.1%)高于汉族女性(5.9%)。荔波县汉族女性风险基因型MTHFR677TT的频率为10.6%，677T等位基因频率为30.5%，均高于已有报道的广东佛山市[10](5.6%，21.5%)、广西南宁市(7.7%，24.2%)[11]，低于河北廊坊市[12](37.8%，60.9%)、河南新乡市[13](38.9%，62.0%)、山东淄博市[14](43.6%，65.6%)等地，这些研究调查有助于了解机体对叶酸的利用能力，制定个性化的营养干预方案，对于MTHFR677TT的围孕期女性，更应酌情增加叶酸补充剂量或延长孕前增补时间，以避免胎儿出生缺陷以及孕产妇妊娠期并发症的发生。

通过调查各地区汉族及少数民族叶酸代谢关键酶的基因多态性分布，可以为基于群体遗传特征的出生缺陷病因学研究和临床干预研究提供依据，指导科学增补叶酸营养，实施个性化保健。优化少数民族地区妇幼保健服务模式，提高民族地区的百姓健康水平，不仅是全面实现千年发展目标，也是维护民族统一、建设和谐社会的要求[15]。