男性不育患者精子线粒体膜电位及顶体酶活性检测研究

杨茜

（昆明医科大学第一附属医院， 云南 昆明）

0 引言

男性不育症是一种发病率极高的综合病症，导致此病发生的因素是多种多样的，在育龄夫妇中，占比高达10%。一直以来，常规精液分析在男性生育能力的评估中占据着重要作用，但是，单纯通过常规指标是很难评估出精子的受精能力的。常规检查和实际生育能力之间是存在很大差距的，因此，需要对男性不育患者进行精子功能的检测[1]，从而提升男性生育能力检测的全面程度和科学程度。一般情况下，精子凋亡表示着精子运动能力的下降与丧失，所以，精子运动能力与精子凋亡之间是具有紧密联系的。精子顶体酶活性检测可以更加科学、有效地评估精子受精的能力，在精子生育力的评估中具有重要意义。本次研究对男性不育患者的精子线粒体膜电位及顶体酶活性进行检测[2]，以此评估其在男性不育的诊断评估中的作用。

1 资料与方法

1.1 基本资料

研究资料均为本院收集的，是在2019 年12 月至2020年12 月期间收治的男性不育患者共有90 例，其中，弱精子症30 例，畸精子症30 例，弱畸精子症30 例，同时，选取同期纳入的健康人群90 例，对比这些研究资料的基本情况，无显著的统计学意义，具备较好的可比较性（P＞0.05）。

1.2 检测方法

1.2.1 精液的采集

要求两组研究对象禁欲3 天，应用手淫法收集被检测人员的精液，将精液放在无菌杯内，然后放在水浴箱中半小时，进行液化。

1.2.2 常规精液检测

在进行精液常规检测的过程中，应用精子分析仪，此仪器是由美国BDFACSCalibur 公司生产的，严格按照实验室检验手册操作规则进行改良巴氏染色和K 严格精子形态分析。试剂来自于浙江星博生物科技股份有限公司。

1.2.3 精子线粒体膜电位检测

常规洗涤精液标本，并对其实施离心处理，应用PBS悬浮沉淀，获取精子标本，密度控制为300g*5min。加入JC-1（5ug/ml），进行恒温避光，经过10 分钟后实施洗涤。再应用PBS 重悬沉淀。应用流式细胞仪对其进行检测。波长488mm，应用FSC 和SSC，通过FL1 和FL2 检测光强度。MMP 正常精子比例=橙红色精子百分比。

1.2.4 精子顶体酶检测

应用Kennedy 方式对标本进行检测，把标本分成测定管与空白管。各自精子数7.5*106 个，进行离心处理20 分钟[3]，然后将精浆去除掉，加入100ul 抑制剂，然后将精浆蛋白酶抑制剂去除，加入1000ul 反应液，在对照管中加入1000ul 终止液。在反应停止以后，将两管实施离心处理，取上清液200ul，放入空白酶标板，检测（波长405mm）。按照公式计算出总顶体酶活性。

1.3 统计学方法

应用SPSS19.0 统计学软件进行统计分析，对正态分布的数据进行t 检验，对非正态分布的数据进行χ2检验，采用平均数± 标准差的形式表示数据的分布趋势，若P＜0.05 表示数据的比较差异具有统计学意义。

表1 两组精子PFM、PNM、MMP、顶体酶活性的检测结果

2 结果

2.1 比较两组精子PFM、PNM、MMP、顶体酶活性的检测结果

见表1。

3 讨论

精子线粒体在精子获能与供能中是发挥着重要作用的，是提供精子运动动力的重要细胞器[4]。一般情况下，在细胞正常的代谢中，线粒体能量传递到电子，通过呼吸链传递，并且将质子送到内膜之外，这样就形成了电位差距，也就是形成线粒体膜电位。此电位可以对线粒体产能的状况进行正确反映[5]。当MMP 为正常的水平的时候，跨膜负电压水平是比较高，若降低则预示着供能受到阻碍。本次研究结果显示：男性不育患者的MMP 显著下降，此结果充分证明了：MMP 在一定程度上可以解释不育发生的原因[6]。顶体酶位于精子头部的基质、内膜，是一种丝氨酸蛋白溶解酶。随着顶体的合成，该溶解酶也随之成型了，而且这种物质是没有活性的[7]。当精子获能、与透明带结合的时候，顶体PH 水平上升，顶体酶活化，为精子和卵子结合提供能量。通过本研究结果显示，男性不育患者的顶体酶活性显著比正常男性低，这就表示顶体酶活性不正常可能是造成男性出现不育的重要原因[8]，同时其也是导致弱精子症、畸精子症、弱畸精子症的重要原因[9,10]。

总之，精子线粒体膜电位、顶体酶活性检测在男性生育力的诊断中具有重要作用，是能够客观评估男性不育患者的精子质量的重要标准，具有实际研究价值[11,12]。