炒地龙与地龙饮片中次黄嘌呤和肌苷含量的比较

孙立丽，霍秦秦，王婉婷

（吉林市食品药品检验所，吉林 吉林）

0 引言

炒地龙为地龙的清炒炮制加工品。炒地龙照炒炙法（《中国药典》2015 版 四部 通则0213）清炒炮制。

地龙的来源有广地龙和沪地龙，广地龙主产于广东、海南、广西，春季至秋季捕捉；沪地龙主产于浙江、江苏、上海、山东、河南等地[1]。现省内制药企业、药品批发、市售及医疗机构应用的地龙药材均为广地龙，沪地龙较少见。

化学成分：地龙体内含有多种蛋白质类、多肽类、核苷酸、氨基酸以及脂肪酸等化学成分[2]。蛋白质是地龙的主要活性成分之一；多肽类包括活性地龙肽和抗菌肽等；核苷酸是地龙代谢的重要化学成分，地龙中主要有次黄嘌呤、黄嘌呤、鸟嘌呤、尿嘧啶等核苷酸成分；地龙含有多种氨基酸，包括了人体必需的八种氨基酸。

药理作用： 生地龙主要有平喘、抗凝血、抗血栓、抗肿瘤、降血压等药理作用，所含的蚯蚓解热碱具有良好的解热作用。地龙的平喘降压作用，主要是含有次黄嘌呤、黄嘌呤等核苷酸成分, 并有抗组织胺及舒张支气管作用，从而达到止咳平喘的目的[3]。

1 样品收集

起草样品收集情况：共收集地龙2 个品种10 批次药材，其中广地龙8 批、沪地龙2 批，来自广西、河北、海南、广东、江苏、安徽等10 个产地。

2 含量测定

地龙主要活性成分有肌苷、次黄嘌呤、琥珀酸等。肌苷又可称为次黄嘌呤核苷，它在化学结构上与次黄嘌呤极为相似，仅比次黄嘌呤多了一个呋喃糖。

参照有关文献[5，6]采用高效液相色谱法对炒地龙中肌苷、次黄嘌呤进行含量测定。

2.1 仪器与试药

高效液相色谱仪Waters e2695；电子天平METTLER MS105DΜ， 电子天平JA5003；

肌苷对照品，批号：140669-201104，含量100%，中国食品药品检定研究院；

次黄嘌呤对照品，批号：140661-201704，含量100%，中国食品药品检定研究院；

甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2.2 方法考察

方法：采用高效液相色谱法以次黄嘌呤和肌苷为定量指标，进行含量测定[7]，对10 批地龙样品炮制前后进行含量考察。

十六年前，有着优越家世的古意，顶着耀眼的光坏，就读于一所名牌大学，跟青梅竹马的女友十分相爱，已经准备谈婚论嫁。

色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.01mol/L 磷酸二氢钾溶液—50%甲醇溶液（80 ∶20）为流动相；检测波长为254nm；柱温30℃；流速0.8ml/min；进样量20μl。

对照品溶液与供试品溶液制备:

对照品溶液的制备:取次黄嘌呤对照品与肌苷对照品适量，精密称定，置同一100ml 量瓶中，加0.9%氯化钠溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置20ml 量瓶中，加0.9%氯化钠溶液稀释至刻度，摇匀，制成每1ml 中含次黄嘌呤对照品25μg、肌苷对照品50 μg 的混合对照品溶液。

供试品溶液的制备：取本品粉末（过三号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入0.9%氯化钠溶液25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）30min，放冷，再称定重量，用0.9%氯化钠溶液补足减失的重量，摇匀，离心10min（4000r/min），精密量取上清液5ml,置10ml 量瓶中，用0.9%氯化钠溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液20μl 注入液相色谱仪，测定。

3 方法学考察结果

3.1 线性关系考察

标准曲线的制备：精密称取次黄嘌呤对照品10.24mg、肌苷对照品20.70mg，置同一100ml 量瓶中，加0.9%氯化钠溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液；精密量取对照品储备液5ml，置20ml 量瓶中，加0.9%氯化钠溶液稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。精密吸取对照品溶液5、10、15、20、25μl，分别注入液相色谱仪，测得峰面积，以进样量（ng）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。结果次黄嘌呤回归方程为Y=5392.9X-38420 r ≈1.0000，进样量在128-640ng 范围内线性关系良好。

肌苷回归方程为 Y=2822.3X-34021 r ≈1.0000，进样量在258.75-1293.75ng 范围内线性关系良好。结果见表1、表2。

表1 次黄嘌呤标准曲线数据

表2 肌苷标准曲线数据

3.2 仪器精密度试验

取同一供试品（CDL-06）溶液，连续进样6 次，每次20μl，依法测定，记录峰面积。结果见表3。

次 黄 嘌 呤 平 均：682233，RSD=1.2%；肌 苷 平 均：1663696，RSD=1.5%

结果表明精密度良好。

3.3 稳定性考察

取同一供试品（CDL-06）溶液，分别在0h、3h、6h、9h、12h、18h、24h 各进样测定一次，记录峰面积。结果见表4。

表3 精密度试验结果

表4 稳定性试验结果

次黄嘌呤平均值：722540，RSD=5.7%，肌苷平均值：1716031，RSD=2.8%。

结果表明：供试品溶液在24h 内次黄嘌呤相对标准偏差较大，稳定性较差。

3.4 重复性考察

取同一批供试品（CDL-06）6 份，依法测定，平行测定6 次，计算。结果见表5。

表5 重复性试验结果

结果次黄嘌呤平均含量为545.98 μg/g，RSD 为1.5%；肌苷平均含量为2.76mg/g，RSD 为2.2%，表明本方法重复性较好。

3.5 准确度试验

取已知含量的样品（CDL-06）（含次黄嘌呤520.55 μg/g、肌苷2.80 mg/g）6 份，每份约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入对照品混合溶液（次黄嘌呤0.02496mg/ml、肌苷0.1457mg/ml）5ml，分别精密加0.9%氯化钠溶液适量，使总体积至25ml，依法测定，计算回收率，结果次黄嘌呤平均回收率为95.9%，RSD=5.6%，肌苷平均回收率为93.0%，RSD=4.8%，n=6。结果见表6、表7。

表6 次黄嘌呤回收率试验结果

表7 肌苷回收率试验结果

表8 样品含量测定结果

4 样品测定

10 批样品测定结果：依法测定地龙炮制前、后样品中次黄嘌呤和肌苷含量，结果见表8。

实验结果：地龙10 批生品含量次黄嘌呤在 262.566-632.371μg/g 之 间，均 值450.28μg/g 、肌 苷 在1.820-3.560mg/g 之间，均值2.30 mg/g，炒地龙10 批含量次黄嘌呤在282.703- 658.166μg/g 之间，均值479.08μg/g 、肌苷在1.381- 2.804 mg/g 之间，均值1.96mg/g。地龙10 批炒制前后含量均有变化，炒地龙次黄嘌呤的含量相应增高、肌苷含量相应降低。

5 讨论

地龙经过炮制后化学成分或多或少会有一些变化。如炒制地龙中肌苷含量较生品相应降低，而次黄嘌呤含量增高，平喘疗效增强；炮制品较地龙生品中蚓激酶的含量会减少[8]。