2-氰基-4-氯-5-(4-甲基苯基)咪唑的高效液相色谱分析

李晓琼 ， 王红英 ， 陈玉晶 ， 张 洁 ， 赵东璞

(1.郑州兰博尔科技有限公司 ， 河南 郑州 450009 ； 2.河南省化工研究所有限责任公司 ， 河南 郑州 450052)

0 前言

氰霜唑是日本石原产业株式会社独立开发的新一代苯基咪唑类杀菌剂，对以霜霉病、疫病为代表的卵菌纲病害和油菜科的根腐病有优异的防效[1-2]。2-氰基-4-氯-5-(4-甲基苯基)咪唑(2-Cyano-4-chloro-5-(4-methylphenyl)imidazole)是合成氰霜唑的关键中间体(图 1)，其含量对氰霜唑合成的收率和质量有重要影响，因此2-氰基-4-氯-5-(4-甲基苯基)咪唑含量的实时分析监控是非常必要的[3]。尽管氰霜唑的分析方法多有报道，但目前国内还未见有2-氰基-4-氯-5-(4-甲基苯基)咪唑分析方法的报道，本文采用液相色谱法开发了一种2-氰基-4-氯-5-(4-甲基苯基)咪唑的定量分析方法。该方法简便快捷，分离效果好，准确度和精密度均能达到定量分析的要求，可作为企业生产过程控制中间体的分析手段，为产成品质量控制提供重要保障[4-6]。

图1 2-氰基-4-氯-5-(4-甲基苯基)咪唑的结构

1 实验部分

1.1 试剂和溶液

乙腈，色谱纯；水，高纯水；2-氰基-4-氯-5-(4-甲基苯基)咪唑标样，质量分数为99.76%，自提纯；2-氰基-4-氯-5-(4-甲基苯基)咪唑工业品。

1.2 仪器

Agilent 1220高效液相色谱仪，具有可变波长紫外检测器；色谱工作站；色谱柱：150 mm ×4.6 mm(id)不锈钢柱，内装5 μm粒径的 XDB C18填充物。

1.3 液相色谱操作条件

流动相，60∶40(体积比)的乙腈-水，经过滤和超声脱气；流速，1.0 mL/min；柱温，室温；检测波长，254 nm；进样体积，5 μL；保留时间，2-氰基-4-氯-5-(4-甲基苯基)咪唑约3.7 min。

1.4 测定步骤

1.4.1标样溶液的配制

称取2-氰基-4-氯-5-(4-甲基苯基)咪唑标样0.03 g(精确至0.000 2 g)，置于25 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀备用。

1.4.2试样溶液的配制

称取2-氰基-4-氯-5-(4-甲基苯基)咪唑试样0.03 g(精确至0.000 2 g)，置于25 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀备用。

1.4.3测定

在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻2针标样溶液的响应值相对变化≤1.5%后 ，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

1.4.4计算

将测得的2针试样溶液以及试样溶液前后2针标样溶液中2-氰基-4-氯-5-(4-甲基苯基)咪唑峰面积分别进行平均。试样中2-氰基-4-氯-5-(4-甲基苯基)咪唑的质量分数X(%)按下式计算：

式中：r1，标样溶液中2-氰基-4-氯-5-(4-甲基苯基)咪唑峰面积的平均值；r2，试样溶液中2-氰基-4-氯-5-(4-甲基苯基)咪唑峰面积的平均值；m1，2-氰基-4-氯-5-(4-甲基苯基)咪唑标样的质量，g；m2，2-氰基-4-氯-5-(4-甲基苯基)咪唑试样的质量，g；P，标样中2-氰基-4-氯-5-(4-甲基苯基)咪唑的质量分数，%。

2 结果与分析

2.1 色谱条件的选择

首先，用紫外分光光度计对2-氰基-4-氯-5-(4-甲基苯基)咪唑标准溶液进行全波长扫描，发现在波长254 nm处有较强吸收，选择254 nm为检测波长对样品进行测定。然后，分别选用不同比例的乙腈-水在不同流速下进行分析测试，发现以60∶40(体积比)的乙腈-水作为流动相，流速为1.0 mL/min时，2-氰基-4-氯-5-(4-甲基苯基)咪唑前后杂质都能得到较好地分离，各峰峰形对称性好，保留时间相对较短，因此选择了60∶40(体积比)的乙腈-水作为流动相。

2.2 线性关系曲线的测定

在上述色谱操作条件下，按照“标样溶液的配制方法”，配制5个不同浓度的2-氰基-4-氯-5-(4-甲基苯基)咪唑的标样溶液，依次进行测定，测定结果见表1。以2-氰基-4-氯-5-(4-甲基苯基)咪唑标样质量体积浓度为横坐标，相应的2-氰基-4-氯-5-(4-甲基苯基)咪唑峰面积为纵坐标绘制出对应的关系曲线，计算得出线性回归方程为：y=7.851x+235.14，相关系数为：R2=0.999 5，见表1、图2。

2.3 精密度的测定

在上述色谱操作条件下，称取5个同一批次的试样，按照上述方法配制成5个试样溶液进行平行测定，2-氰基-4-氯-5-(4-甲基苯基)咪唑质量分数平均值为96.18%，标准偏差为0.47，变异系数为0.49%。

表1 线性相关性测定结果

图2 线性关系曲线

2.4 方法的准确度的测定

在上述色谱操作条件下，称取5份已知质量分数的2-氰基-4-氯-5-(4-甲基苯基)咪唑的试样，分别加入已知质量的2-氰基-4-氯-5-(4-甲基苯基)咪唑标样，配成5个混合样，依次进行测定，结果见表2，测得平均回收率为99.70%。从检测结果可以看出：该测定方法具有较好的准确度。

表2 添加回收率测定结果

3 结论

本文开发了一种2-氰基-4-氯-5-(4-甲基苯基)咪唑的高效液相色谱分析方法，该方法使用XDB C18色谱柱(5 μm，150 mm×4.6 mm)，优化的检测条件为紫外检测器检测波长254 nm，流动相60∶40(体积比)乙腈-水，流速1.0 mL/min。同时对该方法测试的线性关系、准确度和精密度进行了评价。结果表明，利用该方法分析2-氰基-4-氯-5-(4-甲基苯基)咪唑样品时，含量与峰面积具有较好的线性关系，方法的准确度和精密度较高，操作简单、快速、准确，完全能够满足企业对产品生产和控制时的分析要求，是进行产品质量检测的理想分析方法。