湖北地区猪细小病毒流行病学调查

赵润泽 同珂 李文静 李桐 陈少贤 陈腾 王钰 谭旭 王妍 张子微 刘国平

摘要 [目的]探究豬细小病毒在湖北省的流行情况。[方法]2018—2019年，从湖北省荆州、随州、黄冈、恩施、咸宁5个地区的规模化猪场收集出现繁殖障碍症状和有繁殖障碍史猪群的病料共1 407 份，采用巢式PCR法和PCR检测试剂盒进行检测，并分析PPV阳性率与不同地区、年龄段及季节之间的感染差异，最后对PPV阳性样品进行猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪圆环病毒2型（PCV2）及猪繁殖与呼吸综合症病毒（PRRSV）3种猪繁殖障碍性疾病的检测。[结果]1 407份样品中，巢式PCR法检出率为16.70%（235/1 407），PCR检测试剂盒的检出率为16.35%（230/1 407），2种检测方法的符合率为97.87%（230/235）。湖北各地区均有不同程度的感染，其中恩施地区的阳性率最高，为30.48%（57/187）;其次为咸宁、黄冈、荆州地区，阳性率分别为20.60%（62/301）、17.41%（47/270）、14.04%（33/235）;随州地区阳性率最低，为8.70%（36/414）。对不同年龄段猪群的检测结果表明，育肥猪的阳性率最高，为30.95%（65/210）;其次为后备猪和初产母猪，阳性率分别为17.97%（78/434）、15.71%（55/350）;经产母猪、0～30日龄仔猪的阳性率分别为9.05%（21/232）、8.84%（16/181）。PPV一年四季均流行，但春季（23.14%，121/523）和秋季（17.39%，68/391）是PPV感染的高峰期，而夏季（11.04%，33/299）和冬季（6.70%，13/194）感染率较低。PPV与其他繁殖障碍性疾病二重感染（42.13%，99/235）和三重感染（11.49%，27/235）较为常见，其中与PRRSV二重感染（21.70%，51/235）最为严重，三重感染以PPV+PRRSV+PCV2（5.53%，13/235）较多，四重感染在此次采集的样品中未检测到。[结论]该研究对湖北省PPV的流行情况及特点进行了调查，为PPV的防控提供了参考数据。

关键词 猪细小病毒;流行病学;混合感染

中图分类号 S 851.3文献标识码 A

文章编号 0517-6611（2021）08-0083-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.08.022

开放科学（资源服务）标识码（OSID）：

Epidemiological Investigation on PPV Infection in Swine in Hubei

ZHAO Run-ze，TONG Ke，LI Wen-jing et al （College of Animal Science，Yangtze University，Jingzhou，Hubei 434025）

Abstract [Objective]To study the prevalence of PPV in Hubei Province.[Method]From 2018 to 2019，1 407 samples of pig herd with the symptom and history of infertility were collected from three large-scale swine farms in 5 regions （Jingzhou，Suizhou，Huanggang，Enshi，Xianning） of Hubei Province and detected by the nested PCR method and PCR test kit.PPV positive rate and its difference in different regions，ages and seasons were analyzed.Finally，PPV positive samples were detected by the kits of three porcine reproductive disorders（PRV，PCV2，PRRSV）.[Result]In 1 407 samples，the positive rate of nested PCR was 16.7%（235/1 407），the positive rate of PCR test kit was 16.35%（230/1 407），the coincidence rate of two methods was 97.87%（230/235）.Different degrees of infection with PPV occurred in different regions of Hubei Province，the positive rate in Ensi region was the highest（30.48%，57/187），followed by Xianning region，Huanggang region，and Jingzhou region，the positive rates were 20.60% （62/301），17.41% （47/270），14.04% （33/235），respectively.The positive rate in Suizhou region was the lowest（8.70%，36/414）.The detection results of swine in different age groups showed that the positive rate of fattening pigs was 30.95%（65/210），followed by reserve pigs and primiparous sows，the positive rates were 17.97% （78/434） and 15.71% （55/350） respectively.The positive rates of postpartum sows and 0-30 day-old piglets were 9.05%（21/232） and 8.84%（16/181）respectively.PPV had strong prevalence all around year：spring（23.14%，121/523）and autumn（17.39%，68/391）were in peak of infection，but summer（11.04%，33/299） and winter （6.7%，13/194）were in low infection rate.PPV had double infection（42.13%，99/235）and triple infection（11.49%，27/235）with other porcine reproductive disorders，the double infection （21.70%，51/235） with PRRSV was the most serious.The triple infection（5.53%，13/235）with PRRSV and PCV2 was also serious.The quadruplexinfection was not detected in these samples.[Conclusion]This study investigated and analyzed the prevalence state and characteristics of PPV in Hubei Province，which provided references for the prevention of PPV.

Key words Porcine parvovirus;Epidemiology;Mixed infection

猪细小病毒（porcine parvovirus，PPV）是猪细小病毒科的ssDNA病毒，PPV感染主要引起初产母猪和经产母猪出现不孕、流產、产死胎、木乃伊胎和重复返情等繁殖障碍[1]，繁殖障碍的严重程度取决于毒株的致病性和母猪所处的妊娠期。在母猪妊娠30 d内感染，主要导致胚胎死亡或被母体重吸收;妊娠30～70 d，主要表现为流产、产死胎、木乃伊胎;妊娠70 d后感染，一般不引起病害，母猪多能正常产仔，但这些仔猪常常带有抗体并长期带毒。PPV毒株大致分为4种类型：①以NADL-2为代表的弱毒株，感染妊娠母猪后无法经胎盘感染胎儿，被用作弱毒疫苗株;②以NADL-8为代表的强毒株，感染血清阴性母猪后，引起病毒血症，并跨越胎盘屏障感染胎儿并致死;③以Kresse株为代表的皮炎型强毒株;④肠炎型毒株，主要引起肠道病变[2]。近年来，随着规模化养猪业的迅速发展，PPV感染日益严重，不同年龄、品系、性别的家猪和野猪均可感染。病猪和带毒猪是主要传染源，通过口、鼻分泌物和排泄物向外排毒。PPV在全球范围内普遍流行，瑞典、克罗地亚等欧洲国家在家猪、野猪均检出PPV[3-4];泰国、韩国等亚洲国家也相继报道了PPV的感染情况[5-6];我国河南、四川、贵州等地区PPV均出现不同程度的感染[7-8]。感染PPV的母猪无明显的临床症状，且疫苗免疫后也无法阻止病猪排毒，猪细小病毒的广泛传播及隐性感染[9]，给养猪业造成了严重的危害。为深入了解湖北地区PPV的流行特点，笔者于2018—2019年从湖北省5个地级市的规模化猪场收集出现繁殖障碍症状和有繁殖障碍史猪群的病料共1 407 份，采用笔者所在课题组建立的巢式PCR法对PPV进行调查，并分析不同地区、年龄段、季节及与其他繁殖障碍性疾病混合感染的情况，以期为PPV的防控提供参考数据。

1 材料与方法

1.1 样品采集 2018—2019年，1 407 份被动送检样品，采自湖北省荆州、随州、黄冈、恩施、咸宁5个地区的规模化猪场，临床上出现繁殖障碍症状的母猪及其所产仔猪和有繁殖障碍史猪群。其中，荆州235份、随州414份、黄冈270份、恩施187份、咸宁301份，样品置于冰上保存运输至实验室，并于24 h内完成后续检测。

1.2 样品预处理及病毒DNA提取 样品预处理参照文献[10]方法，具体步骤如下：取1 mL猪全血置于1.5 mL EP管中，1 500 r/min 离心30 min，取上清，预处理样品用于后续病毒DNA提取。样品病毒DNA提取采用Axygen体液提取试剂盒，具体步骤参照试剂盒说明书进行。用Nanodrop1 000检测所提取DNA的浓度和纯度，将DNA于-20 ℃下条件保存备用。

1.3 病原学检测 采用巢式PCR法对样品进行病原学检测。引物序列如表1所示。同时，采用猪细小病毒PCR检测试剂盒进行复检，具体步骤参照试剂盒说明书进行。

1.4 数据统计与分析 对不同地区、年龄段、不同季节及混合感染的检测结果，采用SPSS 24.0软件中的卡方检验进行差异显著性分析，P>0.05表示差异不显著，P<0.05表示差异显著。通过Origin 2019软件对检测样品的PPV感染率进行处理分析。

2 结果与分析

2.1 不同地区PPV的检测结果 不同地区规模化猪场PPV的检测结果（表2）显示，PPV阳性样品数为235份，平均阳性率为16.70%（235/1 407）。其中恩施地区PPV阳性率最高，为30.48%（57/187）;其次为咸宁、黄冈、荆州地区，阳性率分别为20.60%（62/301）、17.41%（47/270）和14.04%（33/235）;随州地区最低，为8.70%（36/414），不同地区间PPV阳性率差异显著（P<0.05）。结果表明，荆州、随州、黄冈、咸宁、恩施5个地区规模化猪场均有不同程度感染，而恩施地区的感染尤为严重。

2.2 不同年龄段猪群PPV的检测结果 对不同年龄段猪群PPV的感染情况进行分析，其中育肥猪的阳性率最高，为30.95%（65/210），其次是后备猪和初产母猪，阳性率分别为17.97%（78/434）和15.71%（55/350），而经产母猪、0～30日龄仔猪的阳性率较低，分别为9.05%（21/232）和8.84%（16/181），不同年龄段猪群间PPV阳性率差异显著（P<0.05，表3）。这表明不同年龄段猪群的感染程度相差较大，育肥猪是PPV感染的重灾区。

2.3 不同季节PPV的检测结果 对不同季节猪PPV感染情况进行分析，其中春季的阳性率最高，为23.14%（121/523）;其次是秋季和夏季，阳性率分别为17.39%（68/391）和11.04%（33/299）;冬季PPV的阳性率最低，为6.70%（13/194）。不同季节PPV阳性率差异显著（P<0.05，表4）。这表明PPV一年四季均流行，但春季和秋季是PPV感染的高峰期，而春季感染更为严重。

2.4 混合感染情况 为了解PPV与其他繁殖障碍性疾病混合感染的情况，将PPV检测结果呈阳性的235份样品进行PRV、PRRSV、PCV2检测。结果显示，PPV与其他繁殖障碍性疾病二重感染（42.13%，99/235）最为常见，其中PPV+PRRSV二重感染率最高，为21.70%（51/235）;其次是PPV+PRV、PPV+PCV2，二重感染率分别为11.49%（27/235）、8.94%（21/235）;三重感染率较低，为11.49%（27/235），PPV+PRV+PCV2、PPV+PRRSV+PRV、PPV+PRRSV+PCV2分别为1.70%（4/235）、4.26%（10/235）、5.53%（13/235）;四重感染情况在此次收集的样品中并未发现（表5）。分析发现，二重感染率显著高于三重感染率（P<0.05）。

3 讨论

该研究对2018—2019年湖北地区PPV的流行情况进行调查，结果显示PPV平均阳性率为16.70%（235/1 407），其中荆州、随州、黄冈、恩施、咸宁地区的阳性率分别为14.04%（33/235）、8.70%（36/414）、17.41%（47/270）、30.48%（57/187）和20.60%（62/301），結果表明湖北地区规模化猪场均有不同程度感染，其中恩施地区的感染尤为严重。出现这种差异，通常是由于猪场的饲养密度、免疫程序及管理水平的差异所致[15]，也可能受地理位置和自然条件等因素的影响。恩施地区相邻省市均为养猪大省，频繁的猪只调运成为PPV传播的重要途径。此外，恩施位于鄂南地区，该地区山林丰富，雨水充足，且散养户较多，对规模化养猪场建立优良的生物安全体系形成阻碍。刘明莉等[16]于2014年1—6月在河南省驻马店市进行PPV调查（PPV阳性率为25.00%）;谭小兵等[17]于2015—2016年从四川遂宁市规模化猪场采集649份样品，进行PPV流行情况监测与分析，结果发现PPV阳性率为28.04%;杨先富等[18]于2017年对贵州省剑河县3个猪场进行PPV流行情况调查，结果发现3个猪场PPV的阳性率分别为35.09%、42.06%和46.18%。研究表明，PPV在我国分布广泛且造成严重损失，而湖北地区PPV阳性率相对较低，考虑到2018年非洲猪瘟在国内蔓延，规模化养猪业配备比以往更优良的管理水平及生物安全体系，大大降低了PPV的传播。

不同年龄段猪群PPV的调查结果显示，不同年龄段猪群的感染程度相差较大，其中育肥猪的阳性率最高，其次是后备猪、初产母猪和经产母猪，0～30日龄仔猪最低。新生仔猪通过摄取初乳中的母源抗体，获得对 PPV 的被动保护[19];后备猪和育肥猪的饲养密度较其他年龄段猪群更为密集，饲养环境和管理水平也相对较低。即使接受疫苗免疫的病猪，也无法阻止其通过口-鼻、排泄物向外排毒[20]，污染环境、饲料及饮水等，造成大规模的感染，这也可能是后备猪和育肥猪未按照母源抗体的消长规律进行合理免疫，母源抗体水平降至临界点后免疫不及时所致[19]。

PPV在湖北地区一年四季均可流行，但春季和秋季是PPV感染的高峰期，而春季感染更为严重。究其原因，湖北地处亚热带，降水充沛，雨热同季，春季气温多变，秋季气温下降迅速，且春、秋季的降水量显著高于夏、冬季，温度和湿度更适宜PPV在猪舍内存活和传播[21]。此外，猪的汗腺不发达，散热困难，母猪的最佳繁殖环境温度为20～23 ℃，当环境温度过高时，机体不能完成正常的生理调节而出现热应激，产生一系列的生理、病理变化，不利于卵泡发育和成熟，同时炎热的子宫环境也不利于受精卵的附植和发育[22]。因此，规模化猪场往往在春、秋季进行集中配种，这也增加了PPV的传播风险，需要加强春、秋季猪群的综合防疫工作。

该研究中PPV与其他繁殖障碍性疾病混合感染的检测结果显示，二重感染（42.12%）和三重感染（11.49%）较为常见，与PRRSV二重感染（21.70%）最为严重，三重感染以PPV+PRRSV+PCV2（5.53%）较多，四重感染在此次采集的样品中未检测到，与吕其壮等[23]的研究结果相一致。由于PPV与其他繁殖障碍性疾病具有协同作用，多种病原混合感染已成为常态，未来对猪繁殖障碍性疾病也应从多病原混合感染的维度进行防控。

为做好PPV防控工作，可从以下方面着手：①建议每隔4～6月对所有妊娠母猪重新接种疫苗，虽然疫苗可以保护猪群免受猪细小病毒病的侵害，但无法阻止病猪排毒;②多种病原混合感染已成为常态，今后猪病的防控与净化也应以多病原治理为思路;③优良的免疫程序要搭配科学的管理制度，现代化养殖业要以疫病净化为手段，以建立生物安全体系为核心。

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