漂浮法与膜过滤法测定白砂糖中螨的比对研究

苏俊婷，刘学文*，林雅慧*，陈海宁，罗炜诗，彭子慧，杨梦真

(1广东省科学院生物工程研究所，广东广州510316；2中国轻工业甘蔗制糖工程技术研究中心，广东广州510316)

0 引言

食糖是我国重要的大宗农产品[1-4]，作为全球第2大食糖消费国[5]，在2016/17年至2018/19年连续3个榨季中，中国食糖年消费量大致稳定在1500万t[6-7]，并将长期保持增长态势[7-8]，其中约40%被民用途径消耗[9]，因此食糖的安全与健康与人民生活息息相关。食糖在贮藏和运输的过程中一旦贮藏不当很容易受到螨类的污染，而污染食糖的最常见螨类为甜果螨[10-12]。食糖中的甜果螨不仅影响食糖的质量，造成经济损失；还可能因误食导致过敏性哮喘、肺螨病、肠螨病和尿螨病等[13-18]，危害人体健康。GB 13104-2014食品安全国家标准《食糖》[19]中螨的生物指标是不得检出。白砂糖作为日常生活中最为广泛使用的食糖[20]，是常用的调味品和甜味剂[21]，加强白砂糖中的螨类检测具有重要意义。

GB 13104-2014食品安全国家标准《食糖》中螨的检测方法是漂浮法，有研究表明[12]采用漂浮法分离原糖中的螨类时，一些难以浮出水面的螨体会影响检出率，使检出率不能达到 100%。QB/T 5008-2016轻工行业标准《白砂糖中螨的测定》[22]中螨的检测方法是膜过滤法。本文通过比对漂浮法和膜过滤法2种白砂糖中螨的检测方法，分析影响螨的检出率的因素，并尝试改变膜过滤法的实验条件，为白砂糖中螨的日常检测提供参考数据和方法，提高检测结果准确率。

1 材料与方法

1.1 样品制备

临用前将实验室饲养的螨经酒精灯加热处死，在显微镜下用0号毛笔挑取10头，至250 g经检测后未检出螨的白砂糖中充分混匀后备用。

1.2 试剂与仪器

三级水；载玻片；1000 mL锥形瓶；φ8 μm白色微孔滤膜、φ8 μm黑色微孔滤膜(上海兴亚净化材料厂)；磁力搅拌器(SilentShake)；隔膜真空泵(GM-1.0A，天津市津腾实验设备有限公司)；体视显微镜(SMZ745，尼康仪器上海有限公司)；光学显微镜(L2050，广州光学显微镜)。

1.3 方法

漂浮法：参照GB 13104-2014，添加温度为25℃的水至1000 mL锥形瓶的三分之二处，放置于磁力搅拌器上充分溶解后，补充25℃水至瓶口处水不溢出为止，将洁净载玻片与液面接触静置15 min后取下镜检，直至未检出螨为止。

过滤法：参照QB/T 5008-2016，添加温度分别为4、25、50和80℃的水900 mL至1000 mL烧杯中，放置于磁力搅拌器上充分溶解后过滤镜检，同时采用白色和黑色2种不同颜色的微孔滤膜过滤后进行比对。

1.4 统计学分析

采用SPSS 22.0软件进行统计分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。使用Origin 2015对实验数据进行绘图。

2 结果与分析

2.1 漂浮法与过滤法对螨检出率的影响

25℃水温下漂浮法与过滤法的螨的检出率如表1所示：

表1 漂浮法与过滤法的螨检出率

采用独立样本T检验比较2种方法对检出螨率的影响，结果表明过滤法的检出螨率显著高于漂浮法(P＜0.05)。如表1结果所示，12组实验中，采用漂浮法的螨漏检率为 58.33%(7/12)，采用过滤法全部都检出螨。

2.2 过滤法中水温对螨检出率的影响

采用单因素ANOVA方差分析比较不同水温溶解白砂糖对螨检出率的影响，结果如图1所示。

图1 不同水温的螨检出率

从图1可以看出，不同水温对螨的检出率有显著差异(F=24.091；P＜0.05)，图上不同水温间字母a、b、c、d表示差异具有统计学意义。水的温度越高，螨的检出率越高。

2.3 过滤法中滤膜颜色对螨检出率的影响

黑色和白色2种滤膜在体式显微镜下的视野如图2所示。由图2可见，80℃水温过滤后，黑色滤膜与白色滤膜上的糖晶都很少、视野干净，黑色滤膜上的螨对比度更大、立体感更强，更易于被观察。4℃水温过滤后，残留在滤膜上的糖晶较多，黑色滤膜上的糖晶可能会影响螨的观察，白色滤膜上的螨更易于被观察。

图2 不同水温不同颜色滤膜的体式显微镜视野

过滤法中不同颜色滤膜对螨检出率的影响如表2所示，采用独立样本T检验比较2种不同颜色滤膜对螨检出率的影响，结果表明2种滤膜对螨检出率无显著差异(T=0.623；P=0.543)。

3 讨论

3.1 漂浮法与过滤法的比较

表2 滤膜颜色对螨检出率的影响

通过比对 25℃水温下漂浮法与过滤法对螨检出率的影响，发现对于白砂糖中含螨量较少(10头)的情况，采用漂浮法漏检率高达 58.33%(7/12)，而过滤法未出现漏检情况。过滤法的螨检出率显著高于漂浮法，这可能是由于白砂糖杂质较少溶解后气泡较少，螨没有漂浮上来，或检验人员取载玻片时，螨跟着水一起滴落等等，因此漂浮法对检验人员的熟练程度要求较高。过滤法相较于漂浮法更省时，螨检出率更高，但是依然没有达到100%的检出率，其原因可能包括：①滤膜上较多的砂糖结晶会覆盖螨体、结晶颜色形态和螨体相似而影响螨体被观察。②实际过滤过程中，因砂糖结晶堵住滤膜，糖液需分多次过滤，糖液在多次转移中可能导致螨体不慎丢失。

3.2 过滤法中不同水温的比较

如图1所示，不同水温对过滤法中的螨检出率存在显著差异。根据表3蔗糖的溶解度随温度的变化，不同水温下的螨检出率与蔗糖溶解度的线性方程为y=-0.0165x2+11.527x-1133.9，相关系数为r2=0.8981；因此水的温度越高，蔗糖溶解度越大，过滤法的检出螨率越高。如图2所示，由于溶液的温度高时，白砂糖溶解度高，溶液容易透过滤膜，不会在滤膜上形成糖晶，堵塞滤膜，导致多次过滤引起螨丢失。

表3 蔗糖溶解度表[23]

3.3 过滤法中不同滤膜的比较

由表2结果可知，不同颜色的滤膜对过滤法的检验结果无显著影响，但是随着水的温度升高，蔗糖溶解度增大，滤膜上残留的糖晶减少，黑色滤膜上的螨较白色滤膜上的螨更易于被观察。而对于黑色滤膜上残留糖晶较多的情况，经验不足的检验人员可能会较难从糖晶中分辨出螨，此时可选择白色滤膜。

4 结论

漂浮法和过滤法均能检出白砂糖中的螨，但是对于白砂糖中螨含量较少的情况，检验人员操作误差大，采用漂浮法容易出现漏检的情况。过滤法能在一定程度上降低检验人员的操作误差，大大提高检测准确率。但是过滤法中白砂糖的溶解度会影响检测结果，在日常检验中应注意充分搅拌白砂糖使其充分溶解后，分多张滤膜多次充分冲洗过滤。在白砂糖中杂质较多，较难溶解的情况下，可适当提高水的温度辅助过滤。黑色滤膜上的螨对比度更大、立体感更强，更易于被观察；黑色滤膜上的过多糖晶可能会影响螨的观察，也可选用白色滤膜。每种检测技术都有一定的优缺点，应对检测方法进行交叉使用，如白砂糖中杂质较多的情况下，可先采用漂浮法检测后，再提高水的温度采用过滤法，取长补短，以便快速、准确检测白砂糖中的螨。