孕妇产前红细胞血型不规则抗体筛查及鉴定分析

血型不规则抗体是指除ABO血型以外的抗体，其产生多与输血和注射与血型不合的血液制品有关。血型不规则抗体的产生会引发免疫性输血反应、交叉配血困难等问题。对于孕妇而言，不规则抗体可能经胎盘进入胎儿体内，引发新生儿溶血（HDN）[1]。ABO血型系统溶血（ABO-HDN）在临床中较为常见，且病情程度轻，容易治疗。但非ABO-HDN 较为少见，且病情复杂，治疗难度大。以往研究认为Rh 血型系统所致HDN 最为严重[2]。近年来相关研究不断深入，除Rh 血型系统外，MNS 血型系统及多血型混合所致HDN 引起了国内外研究者的关注。本研究分析孕妇产前红细胞血型不规则抗体筛查及鉴定情况，探讨孕妇产前血型不规则抗体主要分型、高危因素及与非ABO-HDN的关系，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料选取2018年1月～2019年11月在我中心血站筛查产前红细胞血型不规则抗体的4 768例孕妇的血液样本，孕妇年龄21～42岁，平均（29.14±3.06）岁；其中2 912例为初产妇，1 856例为经产妇；2 757例有妊娠史，2 011例无妊娠史；897例有输血史。入选标准：①于妊娠20 周内行不规则抗体筛查；②单胎；③对本次研究知情且签署知情同意书。排除标准：①未定期产检；②双胎或多胎。

1.2 方法筛查及鉴定相关仪器、试剂：抗体筛查细胞（上海羽朵生物科技有限公司，批号：20190142、20190433），抗体特异性鉴定谱（欧蒙医学实验诊断股份公司，批号：20192402），凝胶卡（达亚美公司，ZB/DM 007-2001），LG16-A/B/C 离心机（北京雷勃尔离心机有限公司），HL-JN01 孵育仪（东硕仪表自动化有限公司）。

筛查及鉴定方法：采集所有受检者2ml 空腹静脉血，分离血清，使用微柱凝胶卡进行筛查和鉴定，具体方法严格按照说明书操作。取1%浓度抗体筛查细胞Ⅰ～Ⅲ各25μl，做好标记，加入50μl 血清，于孵育仪持续孵化15min，以离心机离心处理10min（1 000r/min）。肉眼观察结果，如果凝集散开检测结果为阴性；如果凝集不散开检测结果为阳性。对于阳性标本，以抗体特异性鉴定谱做特异性鉴定分析，若红细胞于微柱凝胶孔胶面/胶中凝集为阳性，若红细胞于微柱凝胶孔底部沉积为阴性。

1.3 观察指标①不规则抗体阳性检出率及特异性分布情况；②不同生育史、妊娠史、输血史孕妇不规则抗体阳性检出率；③孕妇产前不规则抗体阳性所致非ABO-HDN 发生率。

1.4 统计学方法采用SPSS 26.0 软件分析数据，计数资料以n（%）表示，行χ2检验，检验水准α=0.05，以P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不规则抗体检出情况4 768例孕妇中，28例不规则抗体阳性，阳性率0.59%。其中Rh 血型系统最多，占不规则抗体总数71.43%（20/28）；其次为MNS 血型系统，占10.71%（3/28），其他血型系统较少，见表1。

2.2 不同生育史、妊娠史、输血史孕妇不规则抗体阳性检出率经产妇、有妊娠史孕妇、有输血史孕妇不规则抗体检出率分别高于初产妇、无妊娠史孕妇、无输血史孕妇（P<0.05），见表2。

2.3 孕妇产前不规则抗体阳性所致非ABO-HDN发生率经鉴定，28例产前不规则抗体阳性孕妇非ABO-HDN 发生率为35.71%（10/28），其中多血型混合型发生率为50.00%，Rh 血型系统型发生率为40.00%，MNS 血型系统型发生率为33.33%，其他血型系统未见非ABO-HDN，见表3。

表1 不规则抗体特异性分布

表2 不同生育史、妊娠史、输血史孕妇不规则抗体阳性检出率

表3 孕妇产前不规则抗体阳性所致非ABO-HDN 发生率

3 讨论

不规则抗体是引发HDN的重要原因，严重损害新生儿生命健康，影响生育质量[3]。因此，红细胞血型不规则抗体筛查为孕妇产前筛查中的重要项目，以避免含有弱抗体的受血者输入含有相应抗原的红细胞而受到免疫刺激，预防溶血性输血。Rh血型系统相关抗体是引发非ABO-HDN、免疫性输血反应的常见不规则抗体[4]，此外还有其他不规则抗体，充分认识不规则抗体特异性分布情况、相关因素、对非ABO-HDN的影响，更有助于指导临床合理制定预防方案。

3.1 孕妇产前红细胞血型不规则抗体特异性分布研究已经证实，Rh血型系统相关抗体为最常见的不规则抗体[5]。本研究4 768例孕妇产前血液样本，共检出28例不规则抗体阳性，阳性率0.59%，其中Rh 血型系统占71.43%，其次为MNS 血型系统（占10.71%），其他血型系统较少。Rh 不规则抗体中抗-E 占35.71%、抗-C 占14.29%。由此可见抗-E、抗-C 为Rh 血型系统中常见不规则抗体[6]。因此，可以将产妇RhCcEe 抗原作为常规检测，指导临床为其提供相同血液成分，避免输血引发同种免疫。另外，研究中发现MNS 血型不规则抗体也较多，其中以抗-M 为主。抗-M 为常见抗体，存在形式为IgM，是一种天然抗体。以往认为抗-M 不会经胎盘传输给胎儿，但近年来有诸多抗-M 引发HDN的报道[7]，因此临床中也应重视抗-M 检测。

3.2 孕妇产前红细胞血型不规则抗体产生相关因素孕妇产前红细胞血型不规则抗体产生因素较多，本研究结果显示生育史、妊娠史、输血史均会增加不规则抗体发生率，其原因复杂。女性妊娠、生育过程中会产生血型同种抗体，随着妊娠、分娩次数增多，不规则抗体形成风险升高[8]。另外，异体输血增加血型同种抗体产生风险，而且输血量、输血次数与同种抗体产生率呈正相关[9]。因此，分析孕妇孕产史、输血史情况，对于预测孕妇产前红细胞血型不规则抗体的产生，指导临床积极采取预防方案具有重要意义。

3.3 孕妇产前不规则抗体与非ABO-HDN母胎血型不合会引发HDN，由非ABO血型不合引发的HDN 为非ABO-HDN，患儿病情多较为严重，后遗症、死亡风险较高[10]。本研究结果显示，引发非ABO-HDN的主要不规则抗体类型为Rh 血型系统、MNS 血型系统及多血型混合。非ABO-HDN 发生机制为受孕妇M 抗体刺激影响，胎儿体内产生抗M抗体，IgG 经胎盘进入血液循环中，破坏红细胞，引发溶血[11]。因此，临床中应特别关注Rh 血型系统、MNS 血型系统及多血型混合相关不规则抗体，积极采取预防措施，预防非ABO-HDN的发生。另外，对于孕妇产前不规则抗体阳性者，应加强新生儿监测，一旦发现新生儿出生24h 内有黄疸表现，且呈现加重趋势，应立即检查血常规、胆红素、网织红细胞，明确是否发生非ABO-HDN，尽早治疗，以免导致不良预后。

综上所述，孕妇产前红细胞血型不规则抗体主要涉及Rh 血型系统、MNS 血型系统，有经产史、妊娠史、输血史的孕妇不规则抗体阳性检出率更高。孕妇产前红细胞血型不规则抗体阳性有引发非ABO-HDN的风险，应积极采取防治措施。