丁香油、MS-222和异丙酚对大黄鱼的麻醉效果分析

杨 乐，张晓林，刘贤德

(集美大学水产学院，农业农村部东海海水健康养殖重点实验室，福建 厦门 361021)

大黄鱼(Larimichthyscrocea)属于鲈形目、石首鱼科、黄鱼属，因肉质细嫩、味道鲜美，且蛋白质含量较高、脂肪含量较低，受到广大消费者的青睐，是中国重要的经济鱼类之一[1-2]。大黄鱼对于人工操作、噪音、运输等会表现出极其明显的应激反应，长途活体运输常导致较高的死亡率，现已成为大黄鱼活体物流的技术瓶颈[3]。麻醉剂在国内外已被广泛地用于催产、标志及运输等渔业生产和研究之中。常见的渔用麻醉剂有间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐(MS-222)、丁香油、二氧化碳、2-苯氧乙醇和乙醚等，其中最常用的是MS-222和丁香油，异丙酚是近年来发展起来的一种麻醉剂[4-8]。多项研究证明，麻醉剂在降低鱼类对捕捞、人工操作及运输等应激反应方面发挥较好的作用[9]。

研究了丁香油、MS-222、异丙酚在不同质量浓度和水温下对大黄鱼的麻醉效果，并将适宜剂量的3种麻醉剂用于模拟运输，以评估对运输应激的缓解作用，同时对3种麻醉剂的麻醉效果和成本进行了比较分析，旨在为后期开展大黄鱼的长途活体运输提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

试验用鱼选自福建省宁德市蕉城区三都澳海区，规格均一、体表无伤、生长状况良好的大黄鱼成鱼，体质量(250.52±15.30) g，体长(22.36±2.02 cm)，从养殖海区运至集美大学水产学院试验场暂养2周，连续充气，每天早晚各投喂一次商业配合饲料，并进行排污换水处理，其间除去死亡或存活状况不好的鱼，一周后开始试验。

试验用3种麻醉剂：丁香油(华硕香料油有限公司)，密度1.05 g/mL，纯度(以丁香酚计)为99%，橘黄色的油状液体，有浓重香味，不易溶于水，使用时先按照丁香油∶乙醇=1∶9的体积比配置成母液后再溶于水；MS-222鱼用安定剂(上海渔夫宝水产用品有限公司)，淡黄色液体，可直接溶于水，纯度在99.5%以上；异丙酚(上海麦克林生化科技有限公司)，密度0.962 g/mL，纯度为98%，乳白色脂溶性制剂，微溶于水。

1.2 麻醉试验

试验前先将试验鱼停食2 d，再将鱼从养殖池转入装有麻醉剂的容器中，观察鱼的活动状态。待鱼进入麻醉状态后将其转入干净的海水中进行复苏，并用秒表记录麻醉和复苏过程中鱼的各种行为特征出现的时间。不同质量浓度麻醉剂对大黄鱼的麻醉试验中，设置丁香油质量浓度为5、10、20、40、80 mg/L；MS-222质量浓度为30、40、50、60、70 mg/L；异丙酚质量浓度为0.1、0.2、0.4、0.6、0.8 mg/L。依据不同质量浓度麻醉剂对大黄鱼的麻醉效果，选择适宜的质量浓度对大黄鱼进行不同水温条件下的试验，设置水温为10 ℃、15 ℃、20 ℃、25 ℃、30 ℃。

1.3 模拟运输试验

依据麻醉试验结果，设置质量浓度为10 mg/L的丁香油、40 mg/L的MS-222和0.2 mg/L的异丙酚对试验大黄鱼进行麻醉，待大黄鱼进入麻醉状态后将其放入装有4倍鱼体重量水(鱼水质量比为4∶1)、充氧的密封塑料袋内，设置5个时间段(12 h、24 h、36 h、48 h、72 h)进行模拟运输试验。每种麻醉剂试验5袋，每袋2尾鱼，将装有大黄鱼的密封塑料袋放入温度为20 ℃、15 ℃、25 ℃的恒温箱内，每隔6 h对密封塑料袋进行换气充氧。模拟运输12 h、24 h、36 h、48 h、72 h后将鱼从塑料袋中取出放入干净的海水中进行复苏，观察试验鱼的生存状态并计算复苏率。

1.4 数据分析

从把鱼放入装有麻醉剂的水体中开始，到鱼出现各种麻醉行为阶段的时间来反映麻醉效果，再将其放入干净的海水中为开始，记录鱼出现复苏行为阶段的时间来评估复苏效果。复苏率为麻醉剂作用一段时间后，从复苏到完全复苏的鱼尾数占试验鱼总尾数的百分比。

采用Excel 2013进行数据统计分析，并用Origin 9.0软件绘制相关图表。数据结果以平均值±标准误差(Mean±SE)表示，P<0.05表示有显著性差异，P>0.05表示无显著性差异。

2 结果

2.1 大黄鱼麻醉阶段和复苏阶段的行为状况

在3种麻醉剂作用下，大黄鱼在麻醉和复苏阶段表现出一系列明显不同的行为状态(表1)，据此可区分不同的麻醉或复苏阶段。其中，麻醉以进入A3阶段为宜，复苏以进入R4阶段为宜。

表1 麻醉及复苏各阶段鱼的行为状况

将大黄鱼放入装有麻醉剂的容器后，起初有明显撞壁应激行为，一段时间后鱼体对外界刺激的反应能力降低，撞壁行为变得不明显，鳃盖张合频率降低，但鱼体仍然可以水平游动(A1阶段)；接着鱼体失去平衡，时而侧翻游动(A2阶段)；进而停止游动，侧躺于容器底部，不再进行连续性游动(A3阶段)，此时认为鱼体已进入麻醉状态。如果质量浓度过高，麻醉鱼会停止呼吸(A4阶段)，这种状态被认为是深度麻醉状态。经过一定时间后，将处于A3阶段的鱼放入海水中进行复苏，一段时间后恢复呼吸(Rl阶段)，随后鱼体行为逐渐恢复正常，直至完全正常(R4阶段)。

2.2 不同麻醉质量浓度的麻醉效果

图1所示，在3种不同质量浓度的麻醉剂下，大黄鱼进入麻醉的时间各不相同，但三者的变化趋势是一致的。即麻醉剂的质量浓度越高，大黄鱼进入麻醉状态的时间越短，完全复苏所需时间越长。丁香油在5～10 mg/L范围内大黄鱼进入麻醉的时间降幅最大，在10倍以上；在10～80 mg/L范围内时间降幅相比较小。MS-222在30～40 mg/L范围内大黄鱼进入麻醉的时间降幅最大；在40～50 mg/L范围内大黄鱼进入麻醉的时间几乎没有变化；在50～70 mg/L范围内进入麻醉的时间降幅相对较小。异丙酚在0.1～0.8 mg/L范围内大黄鱼进入麻醉时间降幅差别不大。

图1 3种麻醉剂不同质量浓度下鱼体进入麻醉状态(A3阶段)及完全复苏(R4阶段)的时间

2.3 不同水温下的麻醉效果

设置丁香油10 mg/L、MS-222 40 mg/L、异丙酚0.2 mg/L，探讨不同水温条件下对大黄鱼休眠诱导所需时间的影响，试验结果如图2所示。在10～30 ℃的温度范围内，随着水温的改变，鱼体进入麻醉时间均呈先增后减趋势。在丁香油中，水温为20 ℃时，鱼体进入麻醉时间最长；在MS-222中，水温为15 ℃时，鱼体进入麻醉时间最长；对于异丙酚，在水温为25 ℃时，大黄鱼进入麻醉的时间最长。

图2 水温对3种麻醉剂麻醉效果的影响

2.4 模拟运输试验的复苏率

按照麻醉试验得到适宜麻醉质量浓度和水温对大黄鱼进行模拟运输，不同运输时间下的复苏率如图3所示。由图3可知，随着运输时间的延长，大黄鱼复苏率会逐渐降低。当模拟运输时间为24 h时，丁香油和MS-222麻醉的复苏率为90%，而异丙酚麻醉的复苏率为70%。

图3 运输时间对大黄鱼复苏率的影响

3 讨论

3.1 丁香油、MS-222、异丙酚麻醉大黄鱼的适宜质量浓度选择

Marking等[10]认为，理想的麻醉剂质量浓度需同时满足被试动物3 min之内进入麻醉状态，5 min之内苏醒的要求。

丁香油价格低廉，安全性高[11]。试验中，丁香油质量浓度为5 mg/L时，大黄鱼长时间不能进入麻醉状态，可能是由于丁香油质量浓度过低所导致的；在10～40 mg/L的质量浓度范围内，大黄鱼进入麻醉时间相差不大且复苏时间较短。由于高质量浓度的麻醉剂会对鱼体造成伤害，选择10 mg/L的丁香油为本试验的适宜质量浓度，试验结果与赵艳丽等[12]对大黄鱼的麻醉效果结果一致[13]。

MS-222易溶于水，复苏时间短[14]。对鲫鱼、金鱼、罗非鱼的研究中表明，在运输过程中使用MS-222既能提高活体的存活率，又能延长运输时间，这与本试验结果一致[15-17]。但其具有酸性，会对鱼体的品质造成一定的影响[18]。试验中，MS-222质量浓度为30 mg/L时，鱼体不能进入完全麻醉状态。在40～50 mg/L的质量浓度范围内，MS-222对大黄鱼的麻醉效果相似。但50 mg/L的MS-222，对鱼体的麻醉时间超过了3 min，不符合理想麻醉质量浓度的要求。因此，40 mg/L的MS-222为本试验的适宜质量浓度。

异丙酚具有低浓度，高效率的特点[19]。试验中，异丙酚的质量浓度为0.1 mg/L时，大黄鱼可在3 min内进入麻醉状态，但其剂量不易掌握。且麻醉试验初期，大黄鱼的应激水平明显强于丁香油和MS-222。在0.1～0.8 mg/L的质量浓度范围内，麻醉时间随着麻醉剂质量浓度的升高而缩短，与 Balko等[20]研究结果相同。质量浓度在0.2～0.6 mg/L内，异丙酚对大黄鱼的麻醉效果无明显差异，所以0.2 mg/L的异丙酚为本试验大黄鱼的适宜质量浓度。

3.2 水温对麻醉效果的影响

水温是影响麻醉效果的重要因子。通过研究青鳉、虹鳟、斑点叉尾鮰表明，在有效质量浓度范围内，随着水温的升高，鱼类进入完全麻醉状态所需时间会缩短[21-23]。这主要是因为鱼鳃是麻醉剂进入鱼体的主要途径，温度升高时增加了其呼吸频率，使得单位时间内麻醉剂通过鱼鳃的剂量增加，从而减少了鱼体进入麻醉的时间[24]。然而，本试验结果显示，3种麻醉剂随着水温的升高，进入麻醉时间先增加后减小。在15～25 ℃时，3种麻醉剂使大黄鱼进入麻醉状态需最长的时间，推测原因可能是15～25 ℃处于大黄鱼的最适生长温度范围，在此温度范围内，大黄鱼具有较强抗逆性，能够抵抗外部环境的变化，因而进入麻醉状态所需时间最长，但具体的机理还需要进一步研究。也有研究表明，水温较高时麻醉剂的效果降低，即在较高温度下，鱼麻醉运输后的复苏率和存活率大大降低[25]。目前，关于水温对鱼类麻醉效果的研究结果存在较大争议，这可能与鱼的种类、长度和体重、性别、状态、压力等等有着密切的关系[26]。

3.3 丁香油、MS-222、异丙酚模拟运输的复苏率及成本比较

在运输过程中大黄鱼应激性强，具有较高的死亡率，但通过合理使用麻醉剂可降低其死亡率[27]。试验结果显示，运输时间为12 h时，丁香油、MS-222、异丙酚的复苏率都在80%以上。延长运输时间至24 h，丁香油和MS-222的复苏率为90%，而异丙酚的复苏率仅为70%，已不具备实际运输的意义。说明丁香油和MS-222的麻醉效果好，在对大黄鱼进行短距离运输时，可优先考虑。根据市面上出售的2种麻醉剂的价格可得，丁香油单价0.33元/mL，MS-222单价0.23元/mL，两者售价相差不大。但是，由于丁香油的不溶性，在使用过程中需要加无水乙醇按1∶9(丁香油∶无水乙醇)的体积比配置成母液后使用，这相当于增加了丁香油的体积，减少了用量，间接地减少了经济成本。综合考虑可得，相对于其他2种麻醉剂，丁香油更适合作为大黄鱼活体运输的麻醉剂。

4 结论

比较了丁香油、MS-222和异丙酚3种麻醉剂对大黄鱼的麻醉效果。结果显示，当丁香油、MS-222和异丙酚的质量浓度分别为10 mg/L、40 mg/L、0.2 mg/L时，大黄鱼的适宜麻醉水温分别为20 ℃、15 ℃、25 ℃，其中，丁香油的麻醉效果较好，经济成本更低。建议在大黄鱼的活体运输中，可优先考虑丁香油。

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