黔产黄苞大戟中1个新的megastigmane糖苷

杜彩霞，易 平，陈俊磊，熊 燕，张嘉瑜，黄烈军，苑春茂，郝小江*，顾 玮*

•化学成分 •

黔产黄苞大戟中1个新的megastigmane糖苷

杜彩霞1, 2, 3，易 平1, 2，陈俊磊1, 2，熊 燕1, 2，张嘉瑜1, 2，黄烈军1, 2，苑春茂1, 2，郝小江1, 2*，顾 玮1, 2*

1. 贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室，贵州 贵阳 550014 2. 贵州医科大学 省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室，贵州 贵阳 550014 3. 毕节医学高等专科学校，贵州 毕节 551700

研究黔产黄苞大戟的化学成分。采用正相硅胶、RP-C18、HPLC、Sephadex LH-20等色谱技术对黄苞大戟化学成分进行分离纯化，并运用NMR、MS等现代谱学技术进行化学结构鉴定。从黄苞大戟80%乙醇提取物中分离鉴定出5个化合物，分别鉴定为(6,9)-布卢姆醇-6′--没食子酸酯（1）、(6,9)-布卢姆醇-6′--没食子酸酯（2）、-kaurane-3-oxo-16β-17-diol（3）、-16α,17-dihydroxy-atisan-3-one（4）、短叶苏木酚酸甲酯（5）。化合物1为新的megastigmane糖苷类化合物，命名为黄苞大戟苷A；化合物2～5首次从黄苞大戟中分离得到。

黄苞大戟；megastigmane糖苷；黄苞大戟苷A；(6,9)-布卢姆醇-6′--没食子酸酯；短叶苏木酚酸甲酯

黄苞大戟Boiss.是大戟科大戟属植物的多年生草本植物，又名草蔺如、水黄花、刮金板、粉背刮金板、中尼大戟。产于我国广西、贵州、四川、西藏、湖北、云南。生于海拔600～4500 m的山坡、灌丛或疏林下。主要用于治疗小儿黄水疥、水肿、水臌[1]。黄苞大戟在贵州分布广泛，多个少数民族均有记载其用法，苗族将其煎水服用于治疗便秘；布依族将其与蜂蜜、一支箭一起煎水服用于治疗水臌病；仡佬族将其与灯心草、刺五加、菖蒲、茜草等一起配伍煎水服治疗水急病[2]。据报道，黄苞大戟中主要有萜类、黄酮类、多酚类等化学成分[3-6]，现代药理研究表明，黄苞大戟具有抗肿瘤、抗艾滋病毒的作用[3-4]。作为一种重要的苗药资源，目前国内外对于黄苞大戟的化学成分和功效的研究报道较少，因此对其化学成分和药理活性进行系统研究，可以更深入的阐明该植物的药效物质基础，为该植物的开发应用提供科学依据。本实验对黔产黄苞大戟全草进行了化学成分研究，共分离得到5个化合物，分别鉴定为(6,9)-布卢姆醇-6′--没食子酸酯 [(6,9)-blumenol-6′--gallate，1]、(6,9)-布卢姆醇-6′--没食子酸酯 [(6,9)- blumenol-6′--gallate，2]、-kaurane-3-oxo-16β- 17-diol（3）、-16α,17-dihydroxy-atisan-3-one（4）、短叶苏木酚酸甲酯（methyl brevifolincarboxylate，5）。化合物1为1个新的megastigmane糖苷类化合物，命名为黄苞大戟苷A（sikkimenside A），化合物2～5首次从黄苞大戟中分离得到。

1 仪器与材料

Bruker Avance NEO 600MHz超导核磁共振仪（德国Bruker公司）；HITACHI高效液相色谱仪Primaide （日本日立公司）；Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱（半制备柱，250 mm×9.4 mm，5 μm，美国安捷伦公司）；QE Focus型串联四极杆飞行时间液质谱联用仪（赛默飞世尔科技有限公司）；Chirascan 型圆二色谱仪（英国应用光物理公司）；EYELA-1100型旋转蒸发仪（日本东京理化器械株式会社）；40～80目和200～300目柱色谱硅胶（青岛海洋化工厂）；反相填充材料RP-C18（25～40 μm，德国默克公司）；Sephadex LH-20凝胶（Pharmacia公司）；甲醇、石油醚、二氯甲烷、醋酸乙酯等试剂购买于天津市富宇精细化工有限公司；色谱甲醇（上海星可高纯溶剂有限公司）。

黄苞大戟样品2017年5月采自贵州省黔东南苗族侗族自治州，经贵州省中国科学院天然产物重点实验室顾玮副研究员鉴定为黄苞大戟Boiss.，凭证标本（HGK-2015-25）存放于贵州省中国科学院天然产物重点实验室。

2 提取与分离

黄苞大戟（19 kg）粉碎后用80%乙醇回流提取4次，每次分别提取4、3、3、2 h，滤过，合并提取液，减压浓缩后将浸膏（2 kg）分散于水中，依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取。将各个部位萃取液浓缩，得到石油醚部位（230 g），醋酸乙酯萃取部位（350 g），正丁醇部位（523 g）。醋酸乙酯部位首先通过正相硅胶柱色谱（40～80目），二氯甲烷-甲醇（100∶0→0∶100）梯度洗脱，经薄层色谱（TLC）分析合并相似流分Fr. 1～18。

Fr. 2首先经过RP-C18柱色谱，水-甲醇（60∶0→0∶100）梯度洗脱，其次经过Sephadex LH-20凝胶[二氯甲烷-甲醇（1∶1）]发现有结晶洗出，最后将其结晶洗出后通过HPLC半制备色谱分离[水-甲醇（30∶70）]，得到化合物3（R＝37.7 min，4.3 mg），4（R＝41.4 min，5.5 mg）。Fr. 3经反复硅胶柱色谱（200～300目）后经过Sephadex LH-20凝胶分离得到化合物5（28.2 mg）。Fr. 5首先经RP-C18分段，其次反复通过硅胶柱色谱（200～300目）分离得到化合物1和2的混合物，最后经HPLC半制备色谱分离[水-甲醇（40∶60）]，得到化合物1（13.1 mg，R＝36.5 min）和2（23.5 mg，R＝41.4 min）。

3 结构鉴定

表1 化合物1和2的波谱数据

图1 化合物1的关键HMBC和1H-1H COSY相关

通过化合物1和2的ROSEY谱（图2）可以看出，化合物1中，H-6和H-8、H-12相关；化合物2中，H-6和H-11、H-12相关，H-7和H-12相关，H-8和H-10相关，H-和H-13相关。但H-6所处的位置特殊，邻位是2个甲基 (C-11、C-12)、1个季碳 (C-1)、1个CH2(C-7)，所以仍不能确定其绝对构型。进一步通过化合物1和2的ECD计算证明二者计算值分别与实验值的吻合度良好（图3），从而最终确定化合物1和2的绝对构型。故最终鉴定化合物1为(6,9)-布卢姆醇-6′--没食子酸酯，命名为黄苞大戟苷A（sikkimenside A）。化合物2为(6,9)-布卢姆醇-6′--没食子酸酯。结构见图4。

化合物3：白色粉末，TLC检测，喷雾10%硫酸乙醇试液显紫红色，ESI-MS: 343.4 [M＋Na]+，分子式为C20H32O3。1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 3.51 (1H, d,= 10.8 Hz, H-17α), 3.42 (1H, d,= 10.8 Hz, H-17β), 2.51 (1H, dd,= 8.4, 6.6 Hz, H-2), 2.13 (1H, m, H-1α), 2.07 (1H, m, H-13α), 1.98 (1H, m, H-14α), 1.42～1.64 (8H, m, H-6, 7, 11, 12), 1.24 (1H, d,= 9.0 Hz, H-9β), 1.10 (3H, s, H-20), 1.09 (3H, s, H-18), 1.04 (3H, s, H-19)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 37.8 (C-1), 34.1 (C-2), 218.3 (C-3), 47.14 (C-4), 55.6 (C-5), 21.2 (C-6), 39.3 (C-7), 43.3 (C-8), 54.3 (C-9), 38.5 (C-10), 19.3 (C-11), 26.6 (C-12), 40.6 (C-13), 40.8 (C-14), 52.2 (C-15), 79.7 (C-16), 69.8 (C-17), 27.3 (C-18), 21.0 (C-19), 17.6 (C-20)。以上数据同文献对比一致[8]，故鉴定化合物3为- kaurane-3-oxo-16β-17-diol。

图2 化合物1和2的选择性1H-1H ROSEY相关

图3 化合物1和2的ECD谱

图4 化合物1和2的结构

化合物4：白色粉末，TLC检测，喷雾10%硫酸乙醇试液显紫红色，ESI-MS: 343.4 [M＋Na]+，分子式为C20H32O3。1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 3.60 (1H, d,=10.8 Hz, H-17α), 3.47 (1H, d,= 10.8 Hz, H-17β), 2.60 (1H, m, H-2), 2.33 (1H, m, H-2), 2.03 (1H, m, H-11α), 1.87 (1H, m, H-14′), 1.85 (1H, m, H-1β), 1.82 (1H, m, H-12), 1.63 (1H, m, H-13′), 1.49 (1H, m, H-13), 1.47 (1H, m, H-6α), 1.46 (1H, m, H-6β), 1.42 (1H, m, H-7β), 1.37 (1H, m, H-1α), 1.31 (1H, m, H-9) , 1.29 (1H, m, H-5), 1.24 (1H, m, H-11β), 1.23 (1H, m, H-15′), 1.13 (3H, s, H-20), 1.10 (3H, s, H-18), 1.06 (3H, s, H-19), 0.82 (1H, m, H-14)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 38.0 (C-1), 34.1 (C-2), 217. 6 (C-3), 47.6 (C-4), 55.7 (C-5), 19.6 (C-6), 38.7 (C-7), 32.9 (C-8), 50.9 (C-9), 37.2 (C-10), 23.0 (C-11), 32.1 (C-12), 23.2 (C-13), 27.2 (C-14), 52.5 (C-15), 74.1 (C-16), 69.0 (C-17), 26.2 (C-18), 21.6 (C-19), 13.5 (C-20)。以上数据与文献对比基本一致[9]，故鉴定化合物4为-16α,17- dihydroxy-atisan-3-one。

化合物5：淡黄色粉末，TLC检测，喷雾10%硫酸乙醇试液显黑色，ESI-MS: 329.2 [M＋Na]+，分子式C14H10O8。1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 7.29 (1H, s, H-7), 4.42 (1H, dd,= 2.0, 7.7 Hz, H-9), 3.63 (3H, s, OCH3), 2.98 (1H, dd,= 7.7, 18.7 Hz, H-10a), 2.47 (1H, dd,=2.0, 18.7 Hz, H-10b)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 145.9 (C-2), 138.5 (C-3), 112.9 (C-3a), 143.7 (C-4), 140.6 (C-5), 149.7 (C-6), 108.1 (C-7), 115.1 (C-7a), 160.2 (C-8), 40.6 (C-9), 37.0 (C-10), 52.1 (OCH3)。以上数据经文献对比一致[10]，故鉴定化合物5为短叶苏木酚酸甲酯。

利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突

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A new megastigmane glycoside fromfrom Guizhou Province

DU Cai-xia1, 2, 3, YI Ping1, 2, CHEN Jun-lei1, 2, XIONG Yan1, 2, ZHANG Jia-yu1, 2, HUANG Lie-jun1, 2, YUAN Chun-mao1, 2, HAO Xiao-jiang1, 2, GU Wei1, 2

1. Key Laboratory of Chemistry of Natural Products of Guizhou Province and Chinese Academy of Sciences, Guiyang 550014, China 2. State Key Laboratory of Functions and Applications of Medicinal Plants, Guizhou Medicinal University, Guiyang 550014, China 3. Bijie Medical College, Bijie 551700, China

To study the chemical constituents of.The chemical constituents were isolated and purified by column chromatography,RP-C18, HPLC and Sephadex LH-20, and their chemical structures were elucidated on the basis of 1D-NMR, 2D-NMR, and MS data.Five compounds were isolated fromand identified as (6,9)-blumenol-6′--gallate (1), (6, 9)-blumenol-6′--gallate (2),-kaurane-3-oxo 16β-17-diol (3),-16α, 17-dihydroxy- atisan-3-one (4) and methyl brevifolincarboxylate (5).Compound 1 is a new megastigmane glycoside, named sikkimenside A, compounds 2—5 are isolated fromfor the first time.

Boiss.; megastigmane glycoside; sikkimenside A; (6,9)-blumenol-6′--gallate; methyl brevifolincarboxylate

R284.1

A

0253 - 2670(2021)08 - 2205 - 05

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.08.002

2020-12-03

国家自然科学基金资助项目（U1812403）；国家自然科学基金资助项目（31860074）；贵州省科技计划项目（黔科合支撑[2018]2799号）

杜彩霞，女，硕士，研究方向为天然药物化学。E-mail: 1370809176@qq.com

顾 玮，女，博士，副研究员，研究方向为民族药物化学。E-mail: guwei2009@126.com

郝小江，男，博士，研究员，研究方向为化学生物学。E-mail: haoxj@mail.kib.ac.cn

[责任编辑 王文倩]