GC-MS法测定广藿香油中塑化剂的含量

王斌，梁伟龙，林钦贤，张华勇，康志英

(1.广州市香雪制药股份有限公司，广东 广州 510663；2.四川香雪制药有限公司，四川 南充 637000；3.宁夏隆德县六盘山中药资源开发有限公司，宁夏 固原 756300)

邻苯二甲酸酯(phthalic acid esters，PAEs)，又称酞酸酯，是邻苯二甲酸形成的酯的统称，主要作为增塑剂(塑化剂)使用，添加到塑胶中以增强弹性、透明度、耐用性和使用寿命，邻苯二甲酸二辛酯(DEHP)为其最重要的品种[1]。PAEs在多种产品中使用，例如玩具[2]、食品包装材料[3]、药品[4-8]、化妆品[9-10]、洗涤剂[11]等。现代研究表明：PAEs具有高稳定性、低挥发性，易扩散到空气、饮用水、土壤或与之接触的物品中，可通过呼吸、皮肤接触和饮食等途径进入人体，改变人体雌激素水平，导致细胞突变、致畸、内分泌失调、生殖系统及肾脏损害等[12]。

广藿香油，别名百秋李油，为唇形科刺蕊草属植物广藿香[Pogostemoncablin(Blanco) Benth.]的干燥地上部分提取的挥发油[13]，为广藿香的主要有效成分。目前市场上出售的广藿香油以塑料瓶或桶装为主，邻苯二甲酸酯类塑化剂在包装、运输、储存过程中的迁移是一个安全隐患，但关于广藿香油中塑化剂的检测研究较少，因此，本文基于采用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术，建立一种操作简便、灵敏度高、检测限低、准确性高的广藿香油中邻苯二甲酸酯类塑化剂的检测方法。

1 仪器与材料

1.1 仪器 QP2010 Ultra型气相色谱-质谱联用仪(日本岛津公司)；DB-5MS毛细管柱(30 m × 0.25 mm × 0.25 μm，安捷伦科技有限公司)；XS-204型万分之一电子天平、MX5型百万分之一电子天平(梅特勒-托利多国际贸易有限公司)；KQ-500VDE型超声波发生器(昆山市超声仪器有限公司)；RE-52CS型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；SHZ-88型恒温振荡器(常州恒德仪器制造有限公司)；TDZ5-WS型离心机(上海乔跃电子有限公司)；TC-15型电热套(海宁市新华医疗器械厂)；XH-D型调速旋涡混合器(无锡沃信仪器有限公司)。

1.2 材料 邻苯二甲酸二甲酯(DMP，纯度：99.2%)、邻苯二甲酸二异丁酯(DIBP，纯度：99.9%)、邻苯二甲酸二丁酯(DBP，纯度：99.7%)、邻苯二甲酸二乙酯(DEP，纯度：98.9%)、邻苯二甲酸二环己酯(DCHP，纯度：99.9%)、邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯(DMEP，纯度：97.9%)、邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯(BMPP，纯度：98.5%)、邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯(DBEP，纯度：96.6%)、邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯(DEEP，纯度：98.3%)、邻苯二甲酸二戊酯(DPP，纯度：98.4%)、邻苯二甲酸二己酯(DHXP，纯度：98.4%)、邻苯二甲酸丁基苄基酯(BBP，纯度：99.8%)、邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP，纯度：99.5%)、邻苯二甲酸二正辛酯(DNOP，纯度：95.4%)、邻苯二甲酸二壬酯(DNP，纯度：98.5%)均购自德国Dr.Ehrenstorfer公司；正己烷(Merck公司)；氦气(深圳天蓝工业气体有限公司，纯度≥99.999%)。市售广藿香油及自提广藿香油，经广州市香雪制药股份有限公司康志英制药高级工程师鉴定为唇形科刺蕊草属植物广藿香 [Pogostemoncablin(Blanco) Benth.]的干燥地上部分经水蒸气蒸馏提取的挥发油。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 柱温为程序升温：初始温度为60 ℃，保持1 min，之后以20 ℃·min-1升至220 ℃，再以5 ℃·min-1升至250 ℃，保持1 min，再以20 ℃·min-1升至290 ℃，保持7.5 min；检测器温度为260 ℃，进样口温度为260 ℃；载气：氦气；流速1 mL·min-1；进样方式：自动，不分流进样；进样量：1 μL；电离方式：电子轰击源(EI)；离子源温度：230 ℃；传输线温度：280 ℃；采集模式：选择离子扫描模式(SIM)；离子源电压：70 eV；溶剂延迟：7 min。15种邻苯二甲酸酯类塑化剂质量浓度为1 mg·L-1的GC-MS总离子流图见图1，其具体的定性和定量离子见表1。

图1 15种PAEs GC-MS总离子流图 注：15种邻苯二甲酸酯标准溶液的出峰顺序依次为：1-DMP、2-DEP、3-DIBP、4-DBP、5-DMEP、6-BMPP、7-DEEP、8-DPP、9-DHXP、10-BBP、11-DBEP、12-DCHP、13-DEHP、14-DNOP、15-DNP

表1 15种PAEs的定性和定量离子

2.2 混合标准储备溶液的制备 精密称取上述15种标准品各约0.1 mg，用正己烷配制成浓度为10 mg·L-1的储备液，于4 ℃冰箱中避光保存，备用。

2.3 标准系列溶液的制备 将上述标准储备液，用正己烷稀释至每1 mL分别含0.05、0.1、0.3、0.5、1.0 mg的标准系列溶液，即得。

2.4 供试品溶液的制备 取本品溶液约2 g，精密称定，置50 mL具塞反应管中，加入2 mL蒸馏水，涡旋混匀，再准确加入正己烷20 mL，涡旋1 min，剧烈振摇1 min，超声提取30 min，1 000 r·min-1离心5 min，取上清液转移至锥形瓶中，于40 ℃下蒸干，转移至1 mL量瓶中，加正己烷至刻度，摇匀，0.22 μm滤膜滤过，即得。

2.5 线性范围 取“2.3”项下的15种PAEs的混合标准溶液，按照“2.1”项下色谱条件进行分析。试验采用逐级稀释的方法，以信噪比(S/N)等于3，进样量为1 μL时计算方法的检出限，以峰面积(Y)对溶度(X)进行线性回归。15种PAEs的回归方程和线性范围见表2。

表2 15种PAEs的回归方程和检出限

2.6 精密度试验 取“2.3”项下浓度为1.0 mg·mL-1混合对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件，重复进样6次，记录各成分的峰面积。结果显示15种PAEs的峰面积RSD均小于2.0%，说明仪器精密度良好。

2.7 加标回收率试验 为验证方法的准确性，对阴性样品进行了0.05、0.3 mg·L-12个剂量的加标回收试验，每个加标水平分别进行了6次的平行试验，计算平均回收率及相对标准偏差，结果见表3。

表3 15种PAEs加标回收率结果(n=6)

2.8 测定法 将不同来源的广藿香油按“2.4”项下的方法制备供试品溶液，在“2.1”项下色谱条件进行分析，其计算公式如下：

式中：W-样品含量(mg·kg-1)；C-样品溶液中塑化剂的浓度(mg·L-1)；Co-方法空白中塑化剂的浓度(mg·L-1)；V-样品溶液的体积(mL)；f-稀释倍数；m-样品的质量(g)。

表4试验结果显示：市售广藿香油中，除S3及S7未检测到塑化剂外，其余批次均有不同程度的检出，其中S1检出DBP为0.042 mg·kg-1，S2检出DBP为0.058 mg·kg-1，S6检出DEHP为0.035 mg·kg-1，根据原卫生部办公厅关于通报食品及食品添加剂邻苯二甲酸酯类物质最大残留量的函[14]规定：DEHP、DINP、DBP最大残留量分别为1.5、9.0和0.3 mg·kg-1，以上检测的3批次的广藿香油塑化剂的残留量均符合规定；而在自提广藿香油中均未检出塑化剂，结果提示市售塑料瓶装广藿香油的塑化剂在储存过程中的迁移可能是其污染的途径之一。

表4 塑化剂检测结果(n=3)

3 结论与讨论

PAEs一般呈无色透明油状黏稠液体，水溶性低，水解慢，易溶于有机溶剂和类脂[15]，提取溶剂常用正己烷、甲醇等，但甲醇的极性较大，提取的杂质较多，存在一定困难，本试验考察了索氏提取、超声提取、液-液萃取、固相萃取等提取方式，发现超声提取分离率高，提取时间短，因此本试验选择正己烷超声提取。另外，试验前必须对检测试剂、玻璃制品、超纯水系统等进行净化处理，并且在测定试剂空白时，进行比较和扣除。

农药残留、提取工艺、包装材料、运输储存过程中塑化剂的迁移可能是中药油脂污染的重要来源[15]，因此建立中药油脂有效合理的安全性评价方法及限度至关重要。PAEs危害严重，但在目前实际生产和生活中尚不能完全离开它们，如何减少或去除PAEs的污染已经成为科学工作者亟待解决的问题。