西藏野生青冈蕈菌丝分离培养条件研究

2021-04-17邵妍丽任军辉张高翔

陕西林业科技 2021年1期

邵妍丽，任军辉，张高翔

(西藏职业技术学院，拉萨 850000)

青冈蕈 (Tricholmaquercicola) 是隶属于担子菌纲口蘑科口蘑属的一种名贵野生食用菌，分布于西藏、云南、四川等省份[1]，因其具有松茸的香气，价格不及松茸一半，广受消费者欢迎；另外其营养丰富，氨基酸总含量不但高于松茸，人体必需的二十种氨基酸除蛋氨酸未检出外，绝大多也均高于松茸[2]，是难得的高原保健食品。自然条件下青冈蕈分布于较高海拔的高山栎林下[3]，采摘不便、产量不稳，不能满足市场需求。因此我们进行了野生青冈蕈菌丝培养条件研究，以期为人工栽培提供指导。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 材料采集 2019年8月-2019年9月、2020年7月-2020年9月，分两批采自林芝周边海拔3 000 m左右的栎类树下，采摘时选择完整、无病虫害、菌盖直径为3～5 cm的子实体(稍带泥土)放入采集箱中带回试验室[4-7]。

1.1.2 材料预处理将子实体表面泥土洗净，沥干表面水水分后备用。

1.2 方法

1.2.1 培养基筛选采用4种培养基进行菌丝分离培养：

(1)马铃薯葡萄糖培养基(PDA)(P1)

马铃薯浸提液200 g、葡萄糖20 g、琼脂18 g、水1 000 mL、pH值自然[8]。

(2)马铃薯综合培养基(P2)

马铃薯200 g、葡萄糖20 g、KH2PO43.0 g、MgSO41.5 g、VB2 0.03 g、琼脂18 g、水1 000 mL、pH值自然[9-11]。

(3)木生菌培养基(P3)

麦芽浸膏15 g、蛋白胨10 g、琼脂18 g，水1 000 mL，pH值自然[12-13]。

(4)松茸分离培养基(P4)

葡萄糖20 g、酵母浸膏2 .0 g、蛋白胨0.5 g、硫酸镁0.5 g、磷酸二氢钾0.5 g、琼脂18 g、水1 000 mL、pH值自然[14-15]。

在无菌条件下，对子实体表面消毒，之后纵向掰开用镊子从菌柄与菌盖交界处挑取约2～3 mm的薄菌块，迅速接入到斜面培养基上，每种培养基接10支试管斜面，放入人工气候培养箱中，15 ℃恒温暗培养，2次重复，观察菌丝生长情况及污染情况。

1.2.2 培养温度筛选根据培养基筛选出的优良培养基，采用上述方法分别接入菌块，设置温度梯度值5、10、15、20、25℃，进行恒温暗培养，2次重复，并观察菌丝生长情况及污染情况。

1.2.3 培养基pH值筛选根据培养基及温度筛选出的优良培养基及温度，采用上述方法分别接入菌块，分别设置pH值为4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0，进行恒温暗培养，2次重复，并观察菌丝生长情况及污染情况。

2 结果与分析

2.1 培养基的筛选

从表1可看出，在菌丝出现时间、菌丝长满试管时间方面，都是培养基P1、P3显著少于培养基P2、P4(P<0.05)，培养基P1与P3之间、P2与 P4之间差异不显著(P>0.05)。在菌丝萌发数量方面，培养基P1最大(8个)，P4最小(6个)，P2、P3居中且相同(7个)；菌丝未萌发大多是由于菌块污染，小部分未污染也未萌发的菌块也出现逐渐变黄枯蔫；萌发的菌块开始时菌丝在其表面出现，呈白色，较短，逐渐伸长向试管上部延伸，逐渐长满试管。在菌丝长势、颜色和致密度方面， P3培养基菌丝长势强，颜色白，致密；P1培养基菌丝虽长势强，但颜色灰白，致密程度较稀疏；P2、P4培养基的菌丝长势较弱，较稀疏，颜色灰白或白。在污染方面，P2培养基最多(4个)，其他3个培养基相同，都为3个。从实验观测的6个指标综合来看，P3培养基即麦芽浸膏15 g、蛋白胨10 g、琼脂18 g，水1 000 mL，pH值自然最适宜。

2.2 培养温度的筛选

在菌丝出现时间方面(表2)，15 ℃培养温度所需时间最短，显著低于5、10、20、25 ℃(P<0.05)，后4者之间差异不显著(P>0.05)，其中在5、10、25 ℃条件下菌丝萌发的试管个数较少，均为6个；在菌丝满管时间方面，实验温度条件下15 ℃最短，显著低于其他4个温度(5、10、20、25 ℃)(P<0.05)，其他4个温度差异不显著(P>0.05)；在菌丝生长过程中，15 ℃和20 ℃条件下生长势强，其他条件下生长势较弱；在菌丝颜色及致密程度方面，20 ℃条件下菌丝颜色洁白也较致密，而15 ℃条件下是白、较致密，其他温度条件下菌丝颜色为白或灰白，菌丝稀疏或比较稀疏；污染情况，25 ℃条件下污染较多，达到了5个。总体从菌丝出现时间、菌丝满管时间、菌丝长势、菌丝颜色及致密程度、萌发及污染等指标来看，15 ℃是青冈蕈菌丝培养的最佳温度。

表1 不同培养基下的菌丝生长状况

表2 不同培养温度下的菌丝生长情况

2.3 培养基pH值的筛选

培养基的pH值与菌丝的生长密切相关，在实验的7个pH值梯度下，菌丝出现时间较短的是pH值为5.0、5.5、6.0(表3)，它们三者之间尽管差异不显著(P>0.05)，但都显著低于其他4个pH值(4.0、4.5、6.5、7.0)(P<0.05)，其他4个pH值之间差异不显著；在菌丝萌发数方面，pH值4.5的最多(9个)，pH值4.0的最少(6个)，其他pH值的为7个或8个；在菌丝长满管所需时间方面，pH值5.5所需时间最短，显著低于pH值4.0、4.5、6.5、7.0(P<0.05)，但与pH值5.0、6.0的差异不显著(P>0.05)；在菌丝长势长相方面，pH值5.5条件下最强，颜色洁白、紧实致密，pH值5.0、6.0条件下菌丝长势也较强，致密程度较高，菌丝颜色pH值6.0条件下为洁白，pH值5.0条件下颜色稍差，为白色，其他pH值(4.0、4.5、6.5、7.0)条件下，菌丝长势都弱，有的颜色灰白，有的致密程度疏松；污染情况方面，pH值4.0污染管为1个，pH值4.5、5.5为2个，其余4个pH值的污染管均为3个，总体似乎呈现随pH值升高，污染管数增加的趋势。从观测的6个指标综合来看，pH值5.5最适宜。