深圳市3 891例患者珠蛋白生成障碍性贫血基因检测结果分析*

曾 君，吴本清△，李 岚，高国兰，郑 义，杨江涛，杨菊红，林列坤，梁 欣，王长山

1.中国科学院大学深圳医院(光明)医学实验中心，广东深圳 518107；2.广东省深圳市人民医院产科，广东深圳 518020；3.深圳爱湾医学检验实验室，广东深圳 518107

珠蛋白生成障碍性贫血，是一组严重影响人体健康的隐性遗传性血液系统疾病，主要发病原因是患者携带有缺陷的血红蛋白基因，导致血红蛋白合成异常，引起患者贫血表现及其他病理状态，其发病机制在国内外被广泛研究[1-2]。根据珠蛋白生成障碍性贫血患者的基因异常类型，可分为α-珠蛋白生成障碍性贫血和β-珠蛋白生成障碍性贫血，部分患者合并携带α和β两种珠蛋白生成障碍性贫血基因。本研究采用先进的膜条导流杂交技术检测珠蛋白生成障碍性贫血基因，分析珠蛋白生成障碍性贫血患者基因分布特征，以辅助珠蛋白生成障碍性贫血临床诊断，探索防治策略。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2016年12月至2019年12月在中国科学院大学深圳医院(光明)医学实验中心进行珠蛋白生成障碍性贫血基因突变检测的3 891例就诊者为研究对象，其中男1 358例，女2 533例；年龄为出生1 d至90岁，平均(25.64±10.69)岁。该研究经医院伦理委员会审核通过，并在研究对象签署知情同意书后开展珠蛋白生成障碍性贫血基因检测。

1.2方法

1.2.1血液样本DNA提取 使用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管采集研究对象2 mL外周血，应用厦门至善生物有限公司提供的磁珠法核酸提取试剂盒在全自动核酸提取仪上提取DNA，严格按照试剂盒说明书及仪器操作步骤开展提取实验。为鉴定仪器提取DNA的质量，利用超微量紫外分光光度计测定提取DNA的吸光度比值A260/A280和浓度，A260/A280在1.6～2.0且浓度大于50 ng/mL时进行下一步实验，未达到上述条件的样本重新提取DNA。

1.2.2基因检测 珠蛋白生成障碍性贫血基因检测采用潮州凯普生物化学有限公司提供的珠蛋白生成障碍性贫血基因检测试剂盒，运用膜条导流杂交技术检测3种缺失型α-珠蛋白生成障碍性贫血和3种突变型α-珠蛋白生成障碍性贫血及19种突变型β-珠蛋白生成障碍性贫血。检测过程严格按照试剂盒说明书操作。

2 结 果

在3 891例研究对象中检出珠蛋白生成障碍性贫血基因变异1 910例，占比49.09%；其中α-珠蛋白生成障碍性贫血1 135例，占比29.17%；β-珠蛋白生成障碍性贫血697例，占比17.91%；αβ-复合型珠蛋白生成障碍性贫血78例(2.00%)。珠蛋白生成障碍性贫血基因检测结果及频率分布见表1～3。

表1 α-珠蛋白生成障碍性贫血基因检测结果及频率分布

续表1 α-珠蛋白生成障碍性贫血基因检测结果及频率分布

表2 β-珠蛋白生成障碍性贫血基因检测结果及频率分布

表3 αβ-复合型珠蛋白生成障碍性贫血基因检测结果分布

3 讨 论

本研究应用先进膜条导流杂交技术一次性检测患者携带的珠蛋白生成障碍性贫血基因。膜条导流杂交技术是近年来发展起来的可对核酸进行高通量快速检测的技术，此技术集合了PCR、导流杂交及基因芯片技术。一张基因膜条同时检测6种α-珠蛋白生成障碍性贫血和19种β-珠蛋白生成障碍性贫血，可大幅度提高研究的检测通量及工作效率。本研究中，深圳地区α-珠蛋白生成障碍性贫血发生主要的基因型是--SEA/αα和-α3.7/αα，其发生频率分别为17.68%和4.19%，其他α-珠蛋白生成障碍性贫血基因发生频率均小于4%；β-珠蛋白生成障碍性贫血发生主要基因型是CD41-42，其发生频率为7.76%，与同类研究结果相似[3-5]。

本研究发现，αβ-复合型珠蛋白生成障碍性贫血基因患者78例，其发生率为2.00%(78/3 891)，与曾祥兴等[6]研究广东河源地区的结果相近。其中CD41-42与--SEA/αα复合型珠蛋白生成障碍性贫血患者共16例，占复合型珠蛋白生成障碍性贫血总数的20.51%(16/78)。通过对深圳地区αβ-复合型珠蛋白生成障碍性贫血基因型分析，与CD41-42及--SEA/αα相关的复合型珠蛋白生成障碍性贫血共42例，占复合型珠蛋白生成障碍性贫血总数的53.85%(42/78)。对于αβ-复合型珠蛋白生成障碍性贫血基因患者，由于αβ-珠蛋白生成障碍性贫血基因的同时缺失或突变，致使αβ-珠蛋白的合成达到平衡，从而使得患者的临床贫血症状相对较轻，故在珠蛋白生成障碍性贫血常规筛查时容易漏诊，但该类患者由于携带αβ-复合型珠蛋白生成障碍性贫血基因，在产前筛查中应重点防控，预防该类患者婚育导致重型珠蛋白生成障碍性贫血患儿出生[7-9]。在临床实际工作中，αβ-复合型珠蛋白生成障碍性贫血基因发生机制较为复杂，而且β-珠蛋白生成障碍性贫血的临床表型会掩盖α-地贫的表型[10]，因此对于血液学筛查一定要同时进行αβ-复合型珠蛋白生成障碍性贫血基因的检测，可以有效防止复合型珠蛋白生成障碍性贫血漏诊。

本研究应用膜条导流杂交技术检测患者珠蛋白生成障碍性贫血基因型，研究了珠蛋白生成障碍性贫血基因型的分布情况，基因突变类型及其流行病学特征，明确了深圳地区珠蛋白生成障碍性贫血的基因突变谱，为珠蛋白生成障碍性贫血的产前诊断提供了科学依据，且可促进深圳地区珠蛋白生成障碍性贫血的有效防治，对提高深圳地区的人口质量有重要意义。