猪蓝耳病毒与圆环病毒II型混合感染的诊治

王心媛，王贵平

(湖南农业大学 动物医学院，湖南 长沙 410128)

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)又称”蓝耳病” ,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)引起的以母猪严重繁殖障碍、断奶仔猪普遍发生呼吸道症状为主要特征的疾病。猪圆环病毒病(Porcine circovirus disease,PCVD)又称断奶仔猪多系统衰竭综合征(Post-weaning multisystemic wasting syndrome，PMWS)，是由猪圆环病毒II型(Porcine circovirus type-II ,PCV-II)感染引起的以断奶仔猪进行性消瘦、呼吸困难、虚弱及淋巴结肿大为主要特征的传染性疾病。

临床上常发生猪繁殖与呼吸综合征与猪圆环病毒II型等的混合感染，对养猪业造成了严重危害。此外，由于抗生素滥用，耐药菌株不断出现，给细菌疾病的防治也带来了一定困难[1]。2021年1月，湖南衡阳某猪场发生了一起以仔猪消瘦、大量死亡为特征的疾病，为查明病因以采取相应的防制措施，对该猪场送检的4头仔猪进行处死、剖检，观察并记录病理变化，采集样品进行实验室诊断。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料来源

衡阳某猪场送检的4头发病仔猪。剖检后收集淋巴结、扁桃体、肺脏等脏器组织。

1.1.2 主要试剂

猪蓝耳病毒实时荧光PCR检测试剂盒(批号：2020012)、猪圆环病毒II型实时荧光PCR检测试剂盒(批号：2020011)，购自湖南冠牧生物。血琼脂培养基，药敏纸片(青霉素G、阿莫西林、氨苄西林、头孢噻吩、头孢噻肟、林可霉素、链霉素、庆大霉素、新霉素、土霉素、强力霉素、四环素、红霉素、替米考星、氟苯尼考、环丙沙星、恩诺沙星、多粘菌素E、复方新诺明)，购自杭州微生物试剂有限公司。

1.2 方法

1.2.1 临床症状及病理观察

对送检的4头仔猪进行表观检查及临床诊断后，处死，剖检，观察并记录病理变化。

1.2.2 荧光定量PCR检测

按照病毒DNA/RNA提取试剂盒说明书提取核酸。按照实时荧光PCR试剂盒说明书操作，每管加入21.5ul PCR-Mix，待检样本、阴性对照、阳性对照各2.5 ul加入对应反应管中，盖好管盖。

1.2.3 细菌的分离培养与鉴定

将病料无菌接种于血琼脂培养基，置于37 ℃恒温培养箱培养24 h后观察结果。革兰氏染色、镜检，观察细菌的形态及染色特点。

1.2.4 药敏试验

用无菌生理盐水制备浓度为1×108cfu/ml～5×108cfu/ml的菌悬液，均匀涂布于培养基，将药敏纸片贴于平板表面，37 ℃恒温箱培养24 h，量取抑菌圈直径，根据各种药物的判定标准进行敏感性评判。药敏纸片的规格及判定标准见表1。

2 结果与分析

2.1 送检病猪的临床症状及病理观察

发病仔猪皮肤颜色苍白，被毛蓬乱，精神萎靡，呼吸急促，身体消瘦，腹股沟淋巴结明显肿大。剖检可见肺部肿胀，一头仔猪肺脏周边有纤维素性渗出物；脾脏肿大，一端出现明显梗死；全身淋巴结，尤其是腹股沟淋巴结充血肿大。

2.2 荧光定量PCR检测结果

用荧光定量PCR相关试剂盒对猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒II型进行检测，结果见表2。经检测发现，该猪场送检的4头仔猪PRRSV均为阳性，3号样品PCV-2为弱阳性，其余3头仔猪PCV-2为阴性。检测相关图片见图1、图2。

图1 猪蓝耳病毒(PRRSV)检测结果

图2 猪圆环病毒II型(PCV-II)检测结果

表1 药敏纸片规格及判定标准

表2 4份样品病原QPCR检测结果

2.3 细菌的分离培养与鉴定

剖检发现一头仔猪肺脏充血肿大，边缘有大片纤维素性渗出物，疑似存在细菌感染。取病变部位组织无菌接种于培养基，经革兰氏染色、镜检，疑似链球菌感染。见图3。

2.4 药敏试验结果

为查明细菌的耐药情况，减少治疗失误，降低该猪场的经济损失，对分离菌株进行了药敏试验。结果见表3。根据药敏试验结果中抑菌圈直径及判定标准，发现分离菌株对头孢噻吩、头孢噻肟、林可霉素敏感，对青霉素G、阿莫西林、氨苄西林、链霉素、庆大霉素、新霉素、土霉素、强力霉素、四环素、红霉素、替米考星、氟苯尼考、环丙沙星、恩诺沙星、多粘菌素E、复方新诺明均耐药。可选用头孢噻吩、头孢噻肟或林可霉素进行治疗。

图3 革兰氏染色结果

表3 药敏试验结果

3 讨论

经对4头仔猪病料检测，PRRSV阳性对照Ct值为27.7，样品Ct值分别为27.57、28.57、29.92、28.47；PCV-II阳性对照Ct值为22.57，样品中仅三号样品存在Ct值，为27.45，其余样品均未检测出圆环病毒II型。根据送检仔猪的发病情况、临床症状、病理变化，结合实验室检测结果，确诊该猪场存在猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒II型及细菌混合感染。

近年来，猪繁殖与呼吸综合征与猪圆环病毒II型混合感染的疫情时有报道，一旦发生混合感染，疫情在短时间内即可大面积扩散和蔓延[2]。由于混合感染死亡率极高，一旦发生扩散蔓延势必造成重大损失，必须及时采取有效的防控措施。建议该猪场对病猪及疑似感染猪只进行隔离，防止疫情扩散。鉴于该猪场一直缺乏合理的免疫程序，要求该猪场立即进行免疫接种；加强饲养管理，提高猪群的免疫力；对圈舍、场地、用具、饮水等进行定期消毒，保证环境卫生。猪场在引种时，一定要做到全进全出，规范引种，严格执行检疫隔离制度。

剖检发现1头仔猪肺部有化脓感染，经革兰氏染色镜检疑似链球菌感染。通过药敏试验发现分离菌株仅对少数药物敏感，对多种药物具有很强的耐药性，这可能与该场长期滥用抗菌药物有关。近年来，多重耐药菌越来越常见，对其主要的防治手段是通过药物敏感性实验筛选出敏感药物进行治疗。因此，建议猪场在用药过程中，先进行药物敏感性检测，选用高敏药物，减少用药失误。还要避免同种药物的长期使用，防止耐药性的产生[3]。有研究表明，中药多为复方组分群，在治疗中通常表现为整体量效关系，作用于多个靶点，不易产生耐药性[4]，故亦可在治疗中添加相应的抗菌中药成分。