一种高效又环保的动物骨骼标本制作方法——以猫骨骼标本为例

谈晓梅，田 鑫，杜丽超，牛德彪，惠旭洁，韩若羽，郑吉昌，柳东阳，杨雪峰

(河南科技学院 动物科技学院，河南 新乡 453003)

传统的动物骨骼标本制作方法主要有：土埋法、虫蚀法、沤制法、煮制法和晾晒法等[1]。这些方法存在两个共同缺点：① 骨骼的前期处理花费时间较长，如利用土埋法需要两年自然腐败分解后方能获得猪骨骼[2]。② 后期一般都包括脱脂和漂白环节，不但比较繁琐费时，且使用的脱脂剂和漂白剂具有一定的腐蚀性，存在安全隐患和污染环境的潜在风险。这些缺点在一定程度上限制了动物骨骼标本的制作。

课题组在制作多种动物骨骼标本的过程中，摸索出一种既高效又环保的标本制作方法—高压法，即利用高压蒸汽灭菌锅的高压作用进行动物骨骼的前处理，后期处理中无需脱脂和漂白环节，在较短时间内即可制作出标本。目前此方面的研究报道较少，利用该法制作了猫的全身骨骼标本，以期为其他种动物骨骼标本的制作，提供一种高效又环保的方法。

1 材料与方法

1.1 试验动物

狸花猫，7岁，3.12 kg，肾衰而亡后，主人赠与河南科技学院教学动物医院。

1.2 主要器材

高压蒸汽灭菌锅，骨钻，手术刀，解剖剪，手术镊子，解剖盘，一次性10 mL注射器，牙刷，纱布，普通棉线，鞋用胶，细铜丝，铁丝等，均由河南科技学院教学动物医院提供。

1.3 方法

1.3.1 剥皮和去内脏

将猫侧放于解剖盘上，首先用手术刀从腹中线划开皮肤，然后分别向两侧方向分离全身皮肤与肌肉，直至皮肤剥离掉。由于猫身体已僵硬，剥皮过程中不可强行撕扯，尤其是前后肢末端。最后打开腹腔，将肝、胃、脾、大小肠、肾、膀胱等内脏器官一一取出。

1.3.2 分离部分连结

如果动物体格较大或高压蒸汽灭菌锅容积较小时，应该按照其解剖学结构特征对头颈部和四肢部连结进行简单的分离。具体分离部位是：在枕寰关节处剪断周围的肌肉和韧带，将头部和颈部分离；在肩带部剪断肩带肌，将前肢与躯干部分离；在髋关节处，剪断周围的肌肉和韧带，将后肢和躯干部分离；在最后腰椎和荐骨前端之间破坏椎间盘，使躯干前部与后部分离；在荐骨后端与第一尾椎之间破坏椎间盘，可将尾巴与躯干部分离。在本试验中，由于高压蒸汽灭菌锅的容积较大，未将尾巴与荐骨分离。

1.3.3 高压处理

将分离好的头、前肢、后肢、前后部躯干摆放入解剖盘内，置于高压蒸汽灭菌锅内进行高压处理，参数为0.10～0.14 MPa(120～126 ℃)8 min，高压完成后降压接近0 MPa时取出解剖盘，冷却后即可剔肉。

1.3.4 剔肉

有些部位如头骨、四肢近端骨经高压处理后已经部分骨肉分离，可以快速地剔去肌肉和韧带，获得骨骼，如头骨、四肢近端骨。在剔除前后脚骨的肌肉和韧带时，务必做好标记，分别用纱布包起来，并尽量保留结构的完好，以防散乱和遗失以及方便后期串装固定。在剔除躯干骨凹陷处的细小肌肉和韧带时，可以使用牙刷刷除。在处理胸廓部位时，尽量保留其各连接处的结构完整性，这将为后期的连接固定节约大量时间。

从枕骨大孔处插入注射器针头，捣碎脑髓后多次注射清水冲净。用一根粗细适当的铁丝由前向后插入椎管内破坏脊髓，然后向椎管内多次注入清水冲净脊髓。脊柱各椎骨间的椎间盘可以去掉，使各椎骨散开；也可以不去掉椎间盘，保留各椎骨紧密连结的原状。本试验采用不处理椎间盘的方法、效果好、节省时间、减少了后期串装工作量。

1.3.5 清洗油脂

肌肉等软组织剔除完成后，需要清洗掉骨骼内外的油脂。在清水中放入适量的日常用洗洁精搅匀，将骨骼置于其中浸泡0.5 h后漂洗出来。再重复用新鲜的洗洁精溶液浸泡骨骼2次，即可将骨骼上的油脂去除干净。对于长骨，需要在其骨体上用骨钻钻几个小孔，并用注射器往骨髓腔中反复注射洗洁精溶液，以冲洗出骨髓腔中的油。所有骨骼自然晾干后即可进行连接固定。

1.3.6 串装固定

提前准备好固定骨骼标本用的带前后2个支柱的标本架。串装骨骼时，先分别把前后肢的小骨骼用胶水粘牢固定，大骨骼用细铁丝直接固定，然后按照猫的解剖学结构特征和自然姿势，用稍粗的铁丝把头骨和躯干骨固定在支架上，之后再把四肢骨固定在躯干上，注意调整好各部位的高度。

2 结果与分析

利用高压法制作的猫头部骨骼见图1A和图1B；躯干部骨骼的颈椎、胸廓和腰椎除个别肋软骨有误折断需粘接修复外，其他自然连接均比较完整，见图1C和图1D；髋骨、荐骨和尾巴骨骼自然连接完好，见图1E；前肢骨见图1F；不包括髋骨的后肢骨见图1G；全身骨骼标本见图1H，标本解剖结构完整、真实自然、形态逼真、立体感强、易于保存。

图1 猫全身骨骼标本

3 讨论与结论

制作动物骨骼标本时，其年龄、性别、体重、营养状况等因素都应该考虑，特别是年龄。一般选择成年动物，因为未成年动物的骺软骨板未完全骨化，用于制作骨骼标本时，两端的骨骺与骨干易在此处分离；老龄动物较易出现骨质疏松，会影响标本的制作质量。性别以雄性为佳，雄性骨骼强健，做出的骨骼标本质量较好[3]。体重和营养状况适中较好。

此外，最好选用健康动物，以防因人畜共患病或不明原因死亡的动物对公共卫生安全构成潜在威胁。当因病死亡的珍稀动物需要制作骨骼标本时，推荐使用本试验采用的高压法。在这类特殊动物的骨骼标本制作过程中，高压前的处理如剥皮、去内脏、分离部分连结处等环节需要做好个人安全防护和废弃物的无害化处理，一般用时较短。但经过高压灭菌后，可以安全操作长时间暴露环境的各环节。

高压蒸汽灭菌锅是各实验室极为常见的设备，也是消毒灭菌的理想设备，消毒彻底，用时较短，一般控制在15-30 min内即可达到高压灭菌的作用。当用于处理带肌肉的骨骼时，短于15 min时是利用其高压作用，大于15 min就是利用其既高压又灭菌的作用了，需要的具体时间主要根据压力的大小、动物的年龄、骨骼上肌肉的厚度和部位等来确定，并需要注意不要因过度高压而破坏骨质，从而影响标本制作质量。本试验只利用其高压作用，0.10～0.14 MPa(120～126 ℃)维持8 min，骨质未破坏，冷却后剔肉容易又干净，并且除极少肋软骨有误折断需粘接修复外，很好的保留了躯干骨的各椎间盘、胸廓结构、荐髂关节和尾巴等部位的完整性，即这些部位不需要再用胶水粘结，效果比较理想，高效省时。这也为串装整个骨骼标本省去了大量时间。

传统骨骼标本的制作方法中多需要利用脱脂剂如NaOH、Na2CO3[2]、汽油[4]、二甲苯、乙醚[5]等进行脱脂处理，但本试验不需要这些具有腐蚀性、易燃性和对环境有害的化学试剂，因为经过高压处理的骨骼内外脂肪已经发生变化和部分溢出，其脂肪较其他方法更易去除，只需要利用生活中常用的洗洁精、洗衣粉等进行清洗即可。本试验以价廉又常见的洗洁精为清洗剂，不但去除油脂干净彻底，成本低廉，而且安全无毒又环保。

漂白处理并非制作骨骼标本必须的环节，是否需要应视情况而定。漂白的目的主要是增加骨骼标本的美观性，缺点是骨骼失去了原来的真实颜色，漂白过度时还会破坏骨质。常用的漂白剂主要有过氧化氢、次氯酸、84消毒液、草酸等[6]，这些漂白剂也具有不同程度的腐蚀性和环境污染性，在使用过程中切记要做好个人和环境的安全防护。本试验未进行漂白处理，不但制作出了本色的骨骼标本，而且省去了这些危险和有害的漂白剂，节约了制作成本。这种高效又环保的猫骨骼标本制作方法也适用于其他动物，值得推广应用。此外，为延长成品骨骼标本的保存时间，建议在串装固定前把各散骨刷清漆加以保护，不建议喷白漆。

利用高压蒸汽灭菌锅的高压作用，制作出的猫全身骨骼标本解剖学结构完整、连接稳定、真实自然、立体感强、易于保存。该制作方法具有简单省时、高效环保、成本低廉等优点，为其他动物骨骼标本的制作提供了参考。