19%氯虫苯甲酰胺·三氟苯嘧啶悬浮剂高效液相色谱分析

李广泽，王 芳，戴兰芳，李欧燕*，段丽芳

(1.深圳诺普信农化股份有限公司，广东 深圳 518102；2.农业农村部农药检定所，北京 100125)

1 前言

三氟苯嘧啶(Triflumezopyrim)是由美国杜邦公司开发的一种新型介离子类杀虫剂，作用于烟碱型乙酰胆碱受体正构结合位点，抑制乙酰胆碱受体。与现有药剂不存在交互抗性，安全性好、选择性强，对稻飞虱特效且持效期长，是吡蚜酮之后防治稻飞虱的最佳药剂品种。

氯虫苯甲酰胺(Chlorantraniliprole) 也是由美国杜邦公司开发的一种鱼尼丁受体抑制剂类杀虫剂，通过选择性激活害虫肌肉中的鱼尼丁受体，过度释放细胞内钙离子，导致害虫瘫痪死亡，对稻纵卷叶螟与二化螟等鳞翅目害虫效果好，安全性好、用药量低，是当前最优秀的水稻鳞翅目害虫防治药剂，对飞虱也具有一定活性。

19%氯虫苯甲酰胺·三氟苯嘧啶悬浮剂作为氯虫苯甲酰胺和三氟苯嘧啶的混配制剂，兼防水稻上飞虱与鳞翅目害虫两大类害虫，具有降低用工成本、方便省事等优点，符合国家环保减量要求，是一种广谱高效绿色杀虫剂。

目前，氯虫苯甲酰胺分析测试的相关研究比较明确[1-3]，10%三氟苯嘧啶悬浮剂[4]和20%三氟苯嘧啶水分散粒剂的高效液相色谱分析方法也有报道[5]，但关于氯虫苯甲酰胺和三氟苯嘧啶混配制剂的分析方法尚未公开报道。本文采用反相高效液相色谱，使用ODS-BP反相柱和可变波长紫外检测器，对氯虫苯甲酰胺和三氟苯嘧啶同时进行分析和定量，该方法简便快速，分离效果好，准确度和精密度均达到定量分析的要求，适用于产品的质量分析。

2 试验部分

2.1 试剂和溶液 甲醇:色谱纯；磷酸:分析纯；水:超纯水(电阻率18.2MΩ·cm)；氯虫苯甲酰胺标准品:已知质量分数100%；三氟苯嘧啶标准品:已知质量分数98.8%；19%氯虫苯甲酰胺·三氟苯嘧啶悬浮剂。

2.2 仪器 高效液相色谱仪:戴安U3000 具有可变波长紫外检测器和自动进样器；变色龙色谱工作站；色谱柱:200mm×4.6mm(id) 不锈钢柱，内装SinoChrom ODS-BP、5μm填充物；微量进样器:100μL；过滤器：滤膜孔径0.22μm。

2.3 高效液相色谱操作条件 流动相:Ψ(甲醇：0.05%磷酸水)=65+35(V/V)；流速:1.0mL/min；柱温：25℃；检测波长：230nm；进样体积：5μL；保留时间:三氟苯嘧啶约5.0min，氯虫苯甲酰胺约8.0min。

典型的氯虫苯甲酰胺、三氟苯嘧啶标样液相色谱图和19%氯虫苯甲酰胺·三氟苯嘧啶悬浮剂试样液相色谱图(图1、图2)。

图1 氯虫苯甲酰胺和三氟苯嘧啶混合标样的高效液相色谱图图2 19%氯虫苯甲酰胺·三氟苯嘧啶悬浮剂试样的高效液相色谱图

2.4 测定步骤

2.4.1 标样溶液的制备 分别称取0.05g(精确至0.000 2g)三氟苯嘧啶标样和氯虫苯甲酰胺标样各于同一50mL容量瓶中，加入30mL甲醇超声溶解，冷至室温后用甲醇定容至刻度，摇匀。用移液管移取上述溶液5mL于25mL容量瓶中，甲醇定容，过滤备用。

2.4.2 试样溶液的制备 称取0.10g(精确至0.000 2g)试样于50mL容量瓶中，加入30mL甲醇超声溶解，冷至室温后用甲醇定容至刻度，摇匀，过滤备用。

2.4.3 测定 在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，待相邻针三氟苯嘧啶和氯虫苯甲酰胺标样溶液的峰面积相对变化<1.5%时，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

2.4.4 计算 将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标样溶液中三氟苯嘧啶和氯虫苯甲酰胺的峰面积，分别进行平均。三氟苯嘧啶和氯虫苯甲酰胺的质量分数ω(%)，按式(1)计算：

(1)

式中：

A1-两针标样溶液中三氟苯嘧啶或氯虫苯甲酰胺峰面积的平均值；

A2-两针试样溶液中三氟苯嘧啶或氯虫苯甲酰胺峰面积的平均值；

m1-三氟苯嘧啶或氯虫苯甲酰胺标样的质量，g；

m2-试样的质量，g；

P-标样中三氟苯嘧啶或氯虫苯甲酰胺的质量分数，%；

5-标样溶液的稀释倍数。

3 结果与讨论

3.1 色谱条件的选择 氯虫苯甲酰胺和三氟苯嘧啶的紫外波长扫描图(图3、图4)。从图中可以看出氯虫苯甲酰胺的最大吸收波长为200nm，三氟苯嘧啶的最大吸收波长在205nm附近，次吸收波长在233nm附近，考虑到200nm附近溶剂吸收可能会对分析造成影响，因此将检测波长定位230nm。

图3 氯虫苯甲酰胺紫外光谱图

图4 三氟苯嘧啶紫外光谱图

选用SinoChrom ODS-BP 200mm×4.6mm(id)反相柱作为分析色谱柱。分别使用甲醇(乙腈)+水、甲醇(乙腈)+磷酸水作为流动相对试样进行检测分析，结果发现，用甲醇(乙腈)+磷酸水作为流动相比甲醇(乙腈)+水作为流动相时被试物的峰型对称性要好，而用0.05%磷酸水和0.1%磷酸水对分析检测区别不大，从经济以及对色谱柱的保护角度选择甲醇+0.05%磷酸水作为流动相。通过系列比例试验，最终确定流动相为Ψ(甲醇：0.05%磷酸水)=65+35，流速1.0mL/min。该条件下，有效成分可以得到很好的分离，基线平稳，峰型对称，分析时间适当。

3.2 分析方法的线性相关性试验 分别称取氯虫苯甲酰胺标准品0.052 0g、三氟苯嘧啶标准品0.051 5g于同一50mL容量瓶中，甲醇超声溶解定容作为母液。分别移取5mL母液至10、25、50、100mL容量瓶中，甲醇溶解定容。将5个容量瓶中的混合标样溶液在上述色谱操作条件下进样5μL进行分析，分别以三氟苯嘧啶、氯虫苯甲酰胺质量浓度(mg/mL)为横坐标，相对应峰面积(mAU)为纵坐标绘制标准曲线，得到三氟苯嘧啶线性方程为y=354.141 7x+1.174 0，线性相关系数为0.999 9，氯虫苯甲酰胺线性方程为y=207.168 4x+0.645 2，线性相关系数为0.999 9。

3.3 分析方法的精密度试验 在相同的色谱条件下，从同一产品中准确称取5个试样，在上述色谱操作条件下进行分析并求平均值、标准偏差和变异系数，结果表明:三氟苯嘧啶的标准偏差为0.065 3、变异系数为0.76%；氯虫苯甲酰胺的标准偏差为0.070 7，变异系数为0.63%(表1)。

3.4 分析方法的准确度试验 取适量已知质量分数的19%氯虫苯甲酰胺·三氟苯嘧啶悬浮剂试样5份于5个50mL容量瓶中，分别加入3.2中混合标准溶液母液各5mL，在上述色谱操作条件下进行分析，结果表明：氯虫苯甲酰胺的平均回收率为98.8%，三氟苯嘧啶的平均回收率为98.4%(表2)。

表1 分析方法的精密度试验结果

表2 分析方法的准确度试验结果

4 结论

本试验建立一种简单快捷的分析方法对19%氯虫苯甲酰胺·三氟苯嘧啶悬浮剂产品进行质量检测。试验结果表明，本方法具有较高的准确度和精密度，线性关系良好，并且操作简便、快速，是产品质量控制较理想的分析方法。