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血根碱硫酸盐高效液相色谱分析方法研究

2021-04-12李智文沈莹华

农药科学与管理 2021年3期
关键词:乙腈波长试样

刘 伟, 李智文, 赵 柳, 沈莹华, 段 鹏

(1.陕西省农业检验检测中心,陕西 西安 710003;2.陕西先农生物科技有限公司,陕西 西安 710018)

血根碱硫酸盐又名硫酸血根碱、血根碱等,化学名称为:1,3-二氧杂环戊烯并[4',5':4,5]苯并[1,2-c] [1,3]间二氧杂环戊烯并[4,5-i]菲啶-13-硫酸盐[1],化学结构式:C40H28N2O12S,(图1)所示,是从罂粟科(Papaveraceae)博落回属(Macleaya)多年生草本植物博落回中提取的异喹啉类生物碱,具杀虫、杀菌活性的一种植物源农药[2]。由于其不易气化,在水溶液中又极易离解成有机阳离子,加之提取过程含有大量其他杂质,故不易分析。本文参考相关文献[3-6],对血根碱硫酸盐的检测波长、流动相及配比等高效液相色谱分析条件进行了选择与优化,并对该方法的最小检测量、精密度和准确度作了研究。

图1 血根碱硫酸盐的化学结构式

1 试验部分

1.1 试剂和溶液 乙腈:色谱纯;三氟乙酸:分析纯;水为新蒸二次蒸馏水;氯化血根碱标样:已知质量分数≥98%;40%血根碱母药试样。

1.2 仪器 高效液相色谱仪:Agilent1100,具可变波长紫外检测器和自动进样器、色谱工作站;C9860A超声波清洗器;色谱柱:Nova-Pak C18(250mm×4.6mm,5μm)不锈钢柱;过滤器:滤膜孔径0.45μm。

1.3 液相色谱分析条件 以乙腈+为流动相,采用梯度洗脱,流动相比例和流速设定(表1);柱温:室温(温度变化<2℃);检测波长:276nm;进样体积:5μL,血根碱保留时间约7.1min。典型的血根碱标样及其母药的高效液相色谱图(图2、图3)

表1 梯度洗脱流动相配比和流速设定

图2 氯化血根碱标样高效液相色谱图

图3 硫酸血根碱母药高效液相色谱图

1.4 测定步骤

1.4.1 标样溶液的配制 称取氯化血根碱标样约0.007g(精确至0.000 2g),置于10mL容量瓶中,用50%乙腈水溶液溶解并定容,作为标样储备液。

用50%乙腈水溶液溶解对上述标样储备液进行梯度稀释,配制系列浓度(浓度范围覆盖样品中有效成分质量分数的80%~120%)标样溶液,作为有效成分质量分数和线性范围测定标准溶液。

1.4.2 试样溶液的配制 准确称取40%血根碱母药样品约0.05g(精确至0.000 2g)于25mL容量瓶中,用50%乙腈水溶液溶解并定容。取上述溶液2mL于10mL容量瓶中,用乙腈定容并摇匀,作为样品溶液。7次平行配制样品溶液,作为方法精密度和有效成分质量分数测定溶液。

分别准确称取3份已知质量分数的40%血根碱母药约0.025、0.035和0.045g(精确至0.000 2g)于25mL容量瓶中,用50%乙腈水溶液溶解并定容。取上述溶液2mL,分别添加标准储备液(65.78mg/L)2.0mL于10mL容量瓶中,乙腈溶解并定容,作为回收率测定溶液。

1.4.3 测定 在上述操作条件下,待仪器稳定后,连续注入数针标样溶液,直至相邻2针血根碱峰面积相对变化<1.5%后,按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进样分析。

1.4.4 计算 试样中血根碱的质量分数X1(%)按式(1)计算、硫酸血根碱的质量分数X2(%)按式(2)计算:

(1)

(2)

式中:

A1—标样溶液中,血根碱峰面积的平均值;

A2—试样溶液中,血根碱峰面积的平均值;

m1—标样的质量,g;

m2—试样的质量,g;

P—标样中血根碱的质量分数,%;

332.3—血根碱离子的分子质量(按2012年国际相对原子质量计);

367.8—氯化血根碱的分子质量(按2012年国际相对原子质量计);

760.4—硫酸血根碱的分子质量(按2012年国际相对原子质量计)。

2 结果与讨论

2.1 检测波长的选择 在190~400nm紫外吸收波长下,对血根碱进行扫描(图4),发现其最大吸收波长为285nm,考虑到相关杂质吸收干扰和紫外检测器最适宜的波长范围,我们最终选择了276nm为血根碱液相色谱的检测波长。实验结果显示在此波长下,血根碱吸收峰面积较大、稳定,并且不受干扰。

色谱柱选择常用的Nova-Pak C18反相柱。用50%乙腈水溶液溶解样品。流动相使用乙腈和0.1%三氟乙酸水溶液,将二者按不同比例在色谱柱上进行试验,最终确定采用梯度洗脱,流速1.0mL/min,先充分分离、再快速洗脱。该条件下,有效成分与杂质能得到很好的分离,峰形对称,基线平稳,并且缩短了分析时间,提高了工作效率。样品目标峰光谱纯度为999.9(图5)。

2.2 分析方法的线性相关性试验 采用倍数稀释法,用50%乙腈水溶液稀释标样储备液,在82.2~328.9mg/L范围内准确配制血根碱标样系列浓度溶液,在规定色谱条件下进行方法线性范围测定。标准工作溶液的测定结果(表2),标准工作曲线(图6)。

图4 血根碱紫外吸收谱图

图5 血根碱母药特异性谱图

结果表明:血根碱在82.2~328.9mg/L范围内,具有良好的线性关系,其色谱峰面积对浓度的回归方程为y=13.081x+76.63,R2=0.999,符合定量要求。

表2 血根碱标准工作溶液的色谱测定结果

图6 血根碱高效液相色谱标准曲线

2.3 分析方法的精密度试验 从同一样品中准确称取7个试样,在上述色谱条件下进行测定,测得的变异系数(RSD)为1.07%,小于Horwitz 公式计算出的RSDr1.56%。

表3 分析方法精密度测定结果

2.4 分析方法的准确度试验 从已知质量分数为36.27%的样品中称取3个试样,分别添加已知浓度(65.78mg/L)的血根碱标样溶液2.0mL,添加浓度为26.31mg/L,进行回收率测定,测定结果(表4)。血根碱的平均添加回收率为100.99%,SD为0.56%,RSD为0.55%。

表4 分析方法准确度测定结果

3 结语

实验建立了一种简单、快捷的分析方法来测定血根碱母药的质量分数。试验结果表明,其方法在一定的质量浓度范围内具有良好的线性关系,方法准确度和精密度均能满足定量分析的要求,具有操作简单易行,分析快速等特点,是产品质量控制和应用研究中较为实用的方法。

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