藏药甘青青兰研究进展*

康燕

（西藏藏医药大学，西藏 拉萨 850000）

藏药甘青青兰(Dracocephalum tanguticum Maxim)，又名唐古特青兰，是唇形科多年生草本植物，花和叶子均为兰色，藏药常用药材之一。甘青青兰味甘、性寒、苦就有香味，藏语叫“知羊格”［1］。藏医用甘青青兰上部分入药，具有清肝热、干黄水、愈疮、止血等作用［2］，还用于治疗肝、胃热、黄水疮口不愈、出血等症状［3］，其幼苗常用来治疗腹水和浮肿［2］。近年来，各相关研究者对甘青青兰生物学特征［4］、理化特征［5］、显微特征［6］、化学成分［7-10］、药用价值［11］、种子萌发等做了大量的研究［12-13］。本文结合文献近几年的研究报告，对甘青青兰目前的研究进展进行简单综述。

1 甘青青兰的资源分布

1.1 甘青青兰在全国的主要分布

甘青青兰主要分布于我国的西藏东南部［13］、甘肃西南部、四川西部及青海东部海拔1900m～4000m干燥河谷的河岸、田野、草滩或松林边缘。

1.2 甘青青兰在西藏地区的主要分布

甘青青兰主要分布于西藏的拉萨、林州、八宿、吉隆、索县、芒康、察隅、乃东、尼木、当雄、定日、波密、江孜、曲松等地。它生长于海拔3000m～5100m的半湿润至半干旱的高原山地及河谷，较耐旱而喜温和气候，主要生长在阳坡上，阴坡生长较少［14］。

2 甘青青兰的生物学研究

2.1 甘青青兰的植物学特征

甘青青兰是唇形科多年生草本植物，茎直立、节多、叶片轮廓椭圆状卵形或椭圆形，花冠紫蓝色至暗紫色，外被短毛唇形花丝被短毛。甘青青兰花期为7—8月份［13］。

2.2 甘青青兰的显微学特征

甘青青兰茎表皮细胞类方形1列，排列紧密，内含棕色物质，表皮上可见气孔和非腺毛残基。皮层较窄，内皮层不明显。皮层由10 余列薄壁细胞私包构成，在四个角隅处有大量板状结构的后组织分布。

叶的表皮细胞垂周壁波状弯曲，密布不定式气孔，周围角质线纹明显，非腺毛呈锥形，横切面上表皮细胞呈类圆形和类方形，表皮细胞大，角质层明显，外具短锥形单细胞非腺毛，栅栏组织二层，海绵组织中有一列有5～6 个细胞排成的平行分泌腔。下表皮细胞密生2～3个细胞非腺毛。

2.3 甘青青兰的理化特征测试

取甘青青兰粉末5g，加入40mL乙醇，加热回流1h后冷却过滤，将滤液调至含醇量为70%，再用石油醚除去绿叶中的叶绿素，取下层乙醇液为供试液：

2.3.1 化学法。取供试液2mL，向供试液中加入几滴盐酸溶液和少量镁粉溶液由无色变成红色。

2.3.2 荧光法。取滤纸一张，在滤纸上滴1～2 滴供试液，晾干后在滤纸喷5%的三氯化铝乙醇溶液，至于紫外灯下观察显绿色荧光。取其粉末至于紫外灯下观察粉末显黄色荧光。

2.3.3 薄层层析法TCL。取供试液4mL 于试管中并加热蒸干，蒸干后向试管中加入4mL 5%的盐酸溶液，过滤，用氨水将滤液调至碱性，再用氯仿提出三次并合并浓缩至5mL，取适量点样，吸附剂为硅胶G，展开剂为4:1:1的正丁醇、乙醇、水的混合溶液，展开晒干后喷以改良后的碘化秘钾试剂，置于紫外灯下观察有3个红色斑点显现。

3 甘青青兰的化学成分

甘青青兰化学成分复杂，主要含有无机元素、挥发油、黄酮类、萜类、甾醇类、多糖类等。

3.1 无机元素

甘青青兰中含有多种微量元素，李文娟等［10］采用火焰原子吸收光谱法测定了藏药甘青青兰原药及水煎液等化学形态中Zn、Cu、Fe、Mn、Pb、Cd 等微量元素的含量，其含量顺序依次为：Fe＞Mn＞Zn＞Cu＞Pb＞Cd。

孙跃宁等［16］研究了产自青海大通、互助和贵德三县甘青青兰中重金属的含量，发现这三县甘青青兰药材中重金属Pb、As、Hg含量均低于国家标准。

3.2 挥发油

挥发油是植物药中非常重要的一类化学成分，利毛才让等［17］利用气相-质谱(GC-MS)技术和峰面积归一法鉴定出了23 种化合物，并给出了23 种化合物的相对含量，其分别为甲苯(0.417%)、3-侧柏烯(0.544%)，tR(min)=7.560、4(10)-侧柏烯(0.983%)、5-异丙烯-1-甲基-环己烯(0.793%)、桉油精(9.306%)、3-侧柏烯（0.068%,tR(min)=11.04）、3-丁基-吡啶(0.001%)、N，N′-双(2-甲基-2-亚硝基戊醛-4 酮)(0.030%)、芳樟醇(0.539%)、1-乙酰-3-(4-氮苯基)-二氢吡唑(0.027%)、苯 甲基硅烷(0.080%)、松香酮(0.347%)、对孟-1-烯-8-醇(0.080%)、侧柏醛(0.115%)、3,7-二甲基-1,6-辛二烯-3-3 醇、2-氨基苯甲酸酯(0.451%)、2,6,6-三甲基-二环［3.1.0］庚基-2-烯-4-乙酯(1.066%)、(-)-反-反-松香乙酯(60.300%)、4-(苯甲氧基亚甲基)乙酰苯(1.119%)、香叶醇-甲酯(0.058%)、Bron,diethyl［2,4-penanedionate］(0.032%)、表 二环倍 半水 芹烯(0.081%)、2-羟基-2-(2-氧代-2-对-甲苯基-乙基)-5-甲苯基-呋喃-3-酮(0.056%)、2-(2-甲基-1-苯并噻吩-3-基)乙酰胺(0.388%）。可以看出甘青青兰的主要挥发油成分是(-)-反-反-松香芹乙酯、桉油精。黄小平等18］采用水蒸气蒸馏法和GC-MS 法鉴定出了36个化合物，化合物占总挥发油的(85.24%)，挥发油的主要化学成分为石竹烯氧化物、石竹烯、桉叶油素、杜松醇、大根香叶酮、3,7-二甲基-1,6-辛二烯-3-醇、(-)-反-松香芹乙酸酯、4-甲基-1-(1-甲基乙基)-3-环己烯-1-醇、(-)-匙叶桉油烯醇等。王钢力［19］等利用GC-MS 技术鉴定了42 种化合物，并用面积归一法确定了个化合物的相对含量，其主要化学成分和含量分别为桉油精(20.99%)、2,6,6-三甲基-(1α，2α，5α)-二环［3,1,1］庚烷-3-酮(2.25%)、N-乙基-对-甲苯胺(47.22%)、(-)-桃金娘烯乙酸酯(3.59%)等。同时周雪杉等［20］利用柱层析法首次从该属植物中分离得到了(-)-反-松香芹乙酸酯。

3.3 黄酮类

甘青青兰还有多种黄酮类物质，张晓峰等［21］从甘青青兰分离出了5种黄酮类化合物，其中胡麻苷-6′′-乙酸酯是一种新发现的天然产物。Liu、沈杰等［22、7］采用硅胶色谱和凝胶柱LH-20 色谱从甘青青兰中分离出了9 种黄酮类化合物，分别为5,4′-二羟基-6,7-二甲氧基黄酮-4′-O-D 葡糖糖苷、5,3′,4′-三羟基-6,7-二甲氧基黄酮、胡麻苷-6′′-醋酸酯、胡麻黄素、cirsliliol-4′-葡糖糖苷、胡麻苷、5,6,4′-三羟基-7-甲氧基黄酮、芹菜素-7-O-D-葡糖糖苷、5,7,4′-三羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮。其中化合物胡麻苷、芹菜素-7-O-D-葡糖糖苷、5,4′-二羟基-6,7-二甲氧基黄酮-4′-O-D葡糖糖苷为首次从该植物中分离得到的。

3.4 萜类

甘青青兰含有大量的二萜、三萜类化合物。周雪杉等［22］通过多种柱层析和重结晶方法从甘青青兰石油醚部位分离得到了2种三萜类化合物，分别为α-香树酯醇和羽扇豆醇，两种化合物为首次从该化合物中分离得到的。李霁昕等［23］利用柱层析、薄层层析、重结晶等从采自甘肃漳县的甘青青兰植物中分离得到了6 种萜类化合物，其中化合物羽扇豆烷-20(29)-烯-28-酸-3-醇和齐墩果酸为首次从该植物中分离得到。郑洪婷等［8］采用硅胶柱色谱法和波谱技术，从甘青青兰的超临界提取物中鉴定出了5 种萜类化合物，分别为熊果酸、齐墩果酸、3β，20α-二羟基乌苏烷-21(22)-烯-28-酸、白桦酯醇、正三十三烷烃，其中化合物3β，20α-二羟基乌苏烷-21(22)-烯-28-酸是首次从该属植物中分离得到。牛迎凤等［24］运用反相高效液相色谱法，在λ 为215nm 条件下检测到产自青海甘青青兰植物中齐墩果酸的含量为0.32%.

3.5 甾醇类

甾醇类化合物按来源分类可以分为植物甾醇、动物甾醇、菌类甾醇三类。李霁昕等［23］利用柱层析、薄层层析、重结晶等从采自甘肃漳县的甘青青兰植物中分离得到了4种甾醇类化合物，分别为豆甾-4-酮、β-胡萝卜苷、β-谷甾醇-3-O-葡糖糖(6-1)-十六烷酸苷、β-谷甾醇，4 种化合物均为首次从该属植物中分离得到。周雪杉等［20］从甘青青兰石油醚部位分离得到了β-谷甾醇。

3.6 糖类

多糖类物质可直接参与人体代谢过程，可促进和调节机体免疫力。目前对甘青青兰多糖类成分的研究较少，主要集中在提取工艺方面，高生英等［25］采用水提醇沉淀法提取多糖，正交实验设计法优化多糖提取工艺。硫酸-苯酚法测定多糖，提出多糖的最佳提出条件为料液比1:40，提取时间为30min，提取温度为80℃，对多糖提取率的三个影响因素做了比较，分别为：料液比＞提取时间＞提出温度。

4 甘青青兰的药理作用

4.1 抗氧化作用

靳涵［26］通过对大鼠组织/血浆中丙二醛、大鼠肝脏组织超氧化歧化酶(SOD)及大鼠血液中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Ps)活力的检测试验，发现甘青青兰提取物具有抗细胞膜脂质过氧化的作用，同时肝脏组织超氧化歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Ps)活力均显著提高。

4.2 抗缺氧作用

叶于聪等［27］给大小鼠胃部灌药或腹腔注射甘青青兰水提物，通过密闭缺氧、减压缺氧、红细胞超氧化歧化酶(SOD)活性测定，以及模拟6000m 减压条件下肝脏脂质过氧产物丙二醛(MDA)、血红蛋白(Hb)、血球压积(Hct)测定实验，发现甘青青兰水提取物可以显著提高小鼠对密闭、减压缺氧的耐受力、大小鼠红细胞SOD 的活性以及降低小鼠MDA、Hb 和Hct。海平等［28-29］研究表明，藏药甘青青兰水提液具有降低动物整体耗氧量、抗密闭缺氧、减压缺氧作用，可延长静脉空气栓塞小鼠、双侧静脉结扎小鼠、夹闭器官小鼠和异丙肾上腺所致小鼠心肌损伤致死的存活时间以及断头小鼠张口动作的持续时间，对KSN、NaNO2所致的组织缺氧有明显保护作用，提高缺氧动物红细胞超氧化歧化酶(SOD)活性，组织脂质过氧化物大量续积，清除氧自由基，减轻缺氧所造成的心、脑、肺、肝及肾组织病理学损伤,但给小鼠ip 和ig 给药均未发现耐高温和抗疲劳作为。周生祥等［30］在于叶聪等研究的基础上进一步实验，发现给大、小白鼠给药3.3/kg.d 可显著提高白鼠红细胞过氧化物歧化酶的活性，当给药6.6/kg.d 时活性无明显变化。许金秀［31］研究发现，唐古特青兰提取物(DME，总黄酮含量为52%)可能通过对脑缺氧的抗氧化作用及刺激神经营养因子的合成，对脑缺血诱导的脑损伤产生治疗作用。

4.3 抑菌作用

甘青青兰提取物具有很好的抑菌作用。胡君茹等［11］研究表明，甘青青兰(炒制)水提取物、生药材水提取物、生药材乙醇提取物在一定浓度(0.15g/mL，0.2g/mL)对金黄色葡糖球菌有抑制或杀菌作用，高浓度的甘青青兰(炒制)的水提取物和乙醇提取物对铜绿假单胞菌有抑制作用，而对大肠杆菌和粪肠杆菌无抑制作用。靳涵等［26］研究表明甘青青兰的提取物在低中敏度范围内对金黄色葡萄球菌、革兰氏阴性细菌、耐药性表皮葡萄球菌、大肠埃希氏菌、粪肠球菌、铜绿假单胞菌、腊状芽孢杆菌、枯草杆菌及白色念珠球菌均有不同程度的抑菌作用，最小抑菌质量浓度为5mg/mL～25mg/mL。

4.4 保肝、抗乙肝病毒作用

沈杰等［7］研究表明，给昆明种小鼠胃部给150mg/kg的甘青青兰正丁醇萃取物可明显降低四氯化碳肝损伤小鼠的血清丙氨酸氨基转移酶，其乙酸乙酯萃取物(R,S)-迭香酸正丁酯具有抗HBV 作用，化合物迷迭香酸具有一定的抗HBV作用。

4.5 抗肝癌作用

从药用植物中提取的生物碱、黄酮及二萜类化合物具有良好的抗肝癌活性。郑思建等［32］研究发现甘青青兰的乙酸乙酯提取物对SMMC-7721 和HepG2 细胞显示出了良好的抗癌活性，其IC50值分别为33.1 μg/mL 和39.9 μg/mL，且对L-02细胞的毒性较小。

5 甘青青兰的繁育技术研究

种子繁育技术是植物的一种有性繁殖方式，是实现植物人工繁育栽培方面运用最广泛、最重要的技术。研究野生藏药材驯化繁育对于保护濒危野生藏药材资源、发展藏药材产业以及藏药种子种苗繁育基地建设具有很好的推动作用［33］。禄亚洲等［34］分别用浓度为0.2mmol/L、0.4mmol/L、0.6mmol/L水杨酸(SA)和蒸馏水处理(CK)浸种甘青青兰24h，结果表明，用SA浸种可以促进种子萌发，并通过增强植物抗渗透胁迫能力，降低细胞膜脂过氧化损伤，提高甘青青兰幼苗的抗旱能力，且0.6mmol/L 水杨酸浸种24h 后，甘青青兰种子萌发效果最好，种子发芽率、发芽势、发芽指数和活力指数较CK 分别提高了34.82%、34.42%、34.87%和54.86%.郭尚磊等［3］用浓度分别为50mg/kg、100mg/kg、400mg/kg 的赤霉素溶液、常温蒸馏水浸种2h，结果表明，不同浓度赤霉素浸种甘青青兰种时对种子的发芽势有促进作用，赤霉素浓度为400mg/kg时其促进作用最大，平均发芽势和发芽率均达到最高，分别为36.67%和51.00%，较不浸种处理分别提高了9.33%和20.67%，但对种子发芽时间无影响。尹秀等［12］研究表明，盐胁迫和干旱胁迫能抑制甘青青兰种子的萌发，随着盐浓度和PEG-6000 溶液浓度的升高种子的发芽率、发芽指数、活力指数、萌发后胚根胚轴的长度均呈下降趋势，且甘青青兰种子对盐的耐受性强弱为：NaCI＞NaSO4＞NaCO3。

6 展望

藏药是我国民族医学宝库中的瑰宝。由于野生药材资源数量有限，因此，建设藏药材种子种苗繁育基地是发展藏医药产业、保护野生藏药资源的必由之路。种子种苗是藏药材生产的物质基础，建设藏药材种子种苗繁育技术有利于保障优质藏药材的生产，而优良品种及优质的种子种苗是实现藏药材规范化生产的基础和首要条件，是从源头把握好藏药材、藏药材饮片及藏药产品质量的重要保障。运用现代科学技术手段，发展壮大藏医药产业，保护野生藏药资源，合理开发利用藏药资源，实现大面积的人工栽培，是目前藏药研究中最有意义的工作。