T- SPOT.TB 在肺结核合并糖尿病患者诊断中的价值分析

王小雯，王晓丹

威海市胸科医院检验科，山东威海 264200

肺结核疾病以及糖尿病疾病作为两种严重影响公共健康的疾病，其患者数量在不断增多。 曾有报道指出[1]，在2016 年， 共计有900 万名患者诊断出患有结核病，由结核病导致死亡的患者共计150 万。 诱发结核病的影响因素主要有吸烟、肾脏疾病、糖尿病、饮酒、家庭接触等，其中男性发病率高于女性发病率。 有研究资料[2]曾指出， 在18～80 岁的成年人群体中，100 个人中一般有9 个人患有糖尿病，且多项研究均指出，糖尿病可以在肺结核患者中作为一个独立的诱发因素存在， 若糖尿病患者的血糖控制效果不佳， 那么其诱发肺结核的概率就会相应的增高。 在临床诊断中，肺结核合并糖尿病患者没有典型的临床症状， 且二者的临床影像学也不典型，在诊断中容易误诊，因此需要该类患者寻找一个快速便捷的诊断方法，以便实施相应的治疗措施。 为此， 该次研究于2017 年10 月—2019 年4 月选择120例患者， 选用结核杆菌T 细胞斑点实验的检测方法对比临床常用的其他诊断方法， 以分析结核杆菌T 细胞斑点实验在肺结核合并糖尿病患者的临床诊断价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

通过抽签选出收治的60 例（非肺结核）糖尿病患者作为该次研究的一号组， 同时选取同时期在该院确诊的60 例患有肺结核合并糖尿病的患者作为该次研究的二号组。 一号组中，男性患者45 例，女性患者15例；最大年龄为80 岁，最小年龄为29 岁，平均年龄为（53.17±10.27）岁。 二号组中，男性患者47 例，女性患者13 例；最大年龄为81 岁，最小年龄为28 岁，平均年龄为（53.44±10.18）岁，60 例患者全部为初次确诊患有肺结核疾病， 且排除脏器功能不全患者以及妊娠期或者精神不正常患者。 该次研究选取的两组患者的基本临床资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 诊断标准

糖尿病诊断标准通过2017 年美国糖尿病协会制定的诊断标准进行诊断。

肺结核疾病诊断通过《肺结核诊断和治疗指南》中的诊断标准进行诊断。

1.3 方法

1.3.1 结核杆菌T 细胞斑点实验法 采集患者3 mL 静脉血液，提取PBMC，根据试剂盒使用说明，在培养显色之后， 将细胞因子分泌处形成的斑点进行详细观察记录，以检测T 淋巴细胞的数量。 所有患者在初诊当日采集肝素锂抗凝静脉血6 m L, 4 h 内用Ficoll 淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞(PBMC) , 配置250 万细胞/mL 的标准溶液。 取出微量板, 以细胞培养液为阴性对照, 阳性对照加入植物血凝素, 剩余2 孔分别加入50 μL 抗原A 和抗原B, 分别含抗原A (ESAT-6) 和抗原B (CFP-10) , 每孔加入含有25 万PBMC 的上述细胞悬液100μL, 将微量板置于37℃、5%CO2孵育箱16～20 h 后用磷酸盐缓冲液 (PBS) 洗板, 加入酶标二抗2～8℃冰箱反应1 h 后用PBS 洗板。 最后加入显色底物, 室温暗室反应7 min 后, 蒸馏水冲洗终止反应。 根据抗原A和(或) 抗原B 的反应孔的斑点数进行判断。T-SPOT 根据试剂盒使用说明进行结果判定：当阴性对照孔斑点数0～5 个时, （抗原A 或B 孔斑点数）-阴性对照孔斑点数)≥6 时, 判为阳性; 当阴性对照孔斑点数6～10 个时,(抗原A 或B 孔斑点数) ≥2* 阴性对照孔斑点计数,判定为阳性; 如不符合上述标准, 且阳性对照孔正常时检测结果为阴性。 阳性结果提示患者体内存在结核菌特异的效应T 淋巴细胞;阴性结果提示患者体内不存在结核菌特异的效应T 淋巴细胞。

1.3.2 痰抗酸杆菌涂片检测法 采集患者即时痰、 夜间痰、晨痰,选择萋-尼氏染色法, 染液为珠海贝索生物技术有限责任公司生产的抗酸染色液，经萋-尼氏抗酸染色后显微镜下观察,不间断地观察视野300 个,抗酸杆菌菌数：300 个视野抗酸杆菌/1 条-8 条、(4+) 、 (3+) 、(2+)、(1 +) , 则说明为抗酸杆菌阳性。 未见抗酸抗菌则说明抗酸杆菌阴性。

1.3.3 结核菌素试验法 将0.1 mL 的结核菌素皮下注射于患者的前臂掌侧前三分之一皮肤内, 注射后48 h观察一次，72 h 判读结果，测量注射局部红肿处的硬结横与纵径，取其均值为硬结直径。 ＜5 mm 为阴性(-)，5～9 mm 为弱阳性(+)，10～19 mm 为阳性(++)，≥20 mm 或局部出现水泡、坏死、溃疡或有淋巴结炎，均为强阳性(+++)。

1.4 统计方法

该次研究选用SPSS 20.0 统计学软件分析研究所得数据，计数资料以[n(%)]表示，组间差异比较以χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 结核杆菌T 细胞斑点实验结果

一号组患者中共计57 名患者诊断为阴性，临床诊断灵敏度为95%，二号组患者中共计58 名患者诊断为阳性，临床诊断灵敏度为97%，见表1。

表1 结核杆菌T 细胞斑点实验检测结果对比[n（%）]

2.2 痰抗酸杆菌涂片检测结果

一号组患者中共计58 例患者诊断为阴性，临床诊断灵敏度为97%，二号组患者中共计23 例患者诊断为阳性，临床诊断灵敏度为38%，见表2。

表2 痰抗酸杆菌涂片检测结果对比[n（%）]

2.3 结核菌素试验结果

一号组患者中共计48 名患者诊断为阴性，临床诊断灵敏度为80%，二号组患者中共计37 名患者诊断为阳性，临床诊断灵敏度为62%，见表3。

表3 结核菌素试验检测结果对比[n（%）]

2.4 不同诊断方法结果

结核杆菌T 细胞斑点实验检测在肺结核合并糖尿病患者中， 检测为阳性的灵敏度显著高于痰抗酸杆菌涂片检测的灵敏度（P＜0.05）；结核杆菌T 细胞斑点实验检测在肺结核合并糖尿病患者中， 检测为阳性的灵敏度显著高于结核菌素试验的检测灵敏度（P＜0.05）；结核杆菌T 细胞斑点实验法的真阴性率与痰抗酸杆菌涂片检测法以及结核菌素试验法相比差异无统计学意义（P＞0.05）。

3 讨论

肺结核疾病和糖尿病疾病在临床中， 都是属于常见的疾病种类之一， 两组疾病能够相互联系， 相互转化。 患有糖尿病的患者，容易诱发结核疾病，而患有结核疾病的患者又容易加重糖尿病病情。 相比于单纯的患有肺疾病疾病的患者， 肺结核合并糖尿病疾病的患者，其病情发展速度要快的多，且病变范围也要比单一的肺结核患者广，此外，在临床治疗中，为难治性肺结核，治疗较为困难。 随着我国经济的飞速发展，人们的生活水平得到显著提高的同时， 患有糖尿病疾病的患者数量也与日俱增，有相关研究资料指出[3-6]，在我国，20 岁以上的群体患有糖尿病疾病的概率为10%， 即每100 个人中，就有约10 个人可能患有糖尿病疾病。因此针对患有糖尿病疾病的患者， 加强对其结核感染的诊断力度，对患者的预后具有重大意义。

在临床诊断中， 细菌学诊断是结核疾病的诊断金标准，但是需要较长的周期对细菌进行培养，且诊断期间容易受实验条件以及主观因素等影响， 诊断阳性率相对较低。 而结核菌素试验作为临床诊断的一种传统诊断方法，具有操作简便以及价格便宜等优点，但是其缺点是容易受到机体免疫状态或者是卡介苗接种等因素影响产生假阳性， 特别是对于处于高糖状态的糖尿病合并肺结核患者，由于患者的免疫功能受损较重，容易使得结核菌素试验结果呈现为假阴性[7-9]。

结核杆菌T 细胞斑点实验是最近几年在结核类疾病中的临床诊断中，应用比较广泛的一种诊断方法，但是在肺结核合并糖尿病患者群体中的诊断研究报道还相对较少。 在该次研究中，对该院收治的60 例肺结核合并糖尿病的患者分别给予了结核杆菌T 细胞斑点实验法、 结核菌素试验法以及痰抗酸杆菌涂片法进行诊断，分析此3 种诊断方法的诊断结果，结核杆菌T 细胞斑点实验法的检测灵敏度要高于痰抗酸杆菌涂片检测法以及结核菌素试验法的灵敏度（P＜0.05），同时其真阴性率差异较小， 说明结核杆菌T 细胞斑点实验法不易受机体免疫功能影响。 除此之外，由于在实验中ESAT-6 的应用以及CFP-10 的应用，有效降低了非结核分枝杆菌以及卡介苗的影响， 因此针对免疫功能受损的患者， 采用结核杆菌T 细胞斑点实验法进行诊断结核分枝杆菌感染的真阴性率以及灵敏度均要大大高于结核菌素试验法。且也有研究文献资料[10-11]证实，结核杆菌T细胞斑点实验法在结核疾病中具有良好的诊断效果，能够为临床诊断以及治疗带来参考。

综上所述，针对肺结核合并糖尿病患者，在临床诊断中，应用结核杆菌T 细胞斑点实验法进行诊断，具有较高的诊断灵敏度，可为临床诊治提供参考。