高效液相色谱法测定枸橼酸舒芬太尼的含量

马 锐，汤道权

（徐州医科大学，江苏 徐州221000）

枸橼酸舒芬太尼作为一种强效的阿片类镇痛药，因起效快、镇痛作用强、毒性低、安全范围广，而被广泛应用于各类疼痛及术后镇痛[1,2]。目前，2015版《中国药典》仍采用非水滴定法测定其原料药含量[3]，由于滴定法专属性存在一定不足[4,5]，可能使得药物中其它共存杂质对结果造成干扰。因此，为提高检测方法的专属性，采用高效液相色谱法测定枸橼酸舒芬太尼的含量，以期完善本品的质量标准，进而更好控制相关产品的质量。

1 仪器与试剂

安捷伦1260型高效液相色谱系统（Agilent公司）；ME104E型电子天平（梅特勒-特利多公司）。

枸橼酸舒芬太尼对照品（中国药品食品检定研究院）；枸橼酸舒芬太尼供试品1（批号：200402）、枸橼酸舒芬太尼供试品2（批号：200601），均由生产企业提供；NH4Ac、HAc均为分析纯，上海阿拉丁试剂有限公司；甲醇、乙腈为色谱纯，Merck公司；试验用水为高纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent HC C18色谱柱（250mm×4.6mm,5μm）；流动相：0.13mol·L-1NH4Ac溶液-甲醇-乙腈（31∶45∶24），采用HAc调节溶液pH值至7.2；流速1.0mL·min-1，检测波长：228nm，柱温：40℃，进样体积：10μL。

2.2 溶液配制

供试品溶液 精密称取枸橼酸舒芬太尼，采用流动相稀释至每毫升中约含0.05mg舒芬太尼，待用。

对照品溶液 精密称取对照品适量，配制供试品相同浓度的对照溶液，待用。

2.3 系统适用性与专属性试验

准确称取对照品10mg，加入1mol·L-1HCl 10mL溶解后，水浴回流4h，继续加入1mol·L-1NaOH调节至中性，水浴蒸干，冷却至室温后，加入10mL甲醇溶解残渣，过滤，精密量取1mL滤液，置于10mL量瓶内，加入流动相，稀释定容，作为系统适用性溶液，同时以流动相作空白溶液。精密量取系统适用性溶液、空白溶液、对照品溶液和供试品溶液各10μL，按照“2.1”项所述色谱条件分别进样，相关色谱图，详见图1。

图1 专属性试验色谱图Fig.1 Liquid chromatograms of specificity tests

由图1可知，舒芬太尼与各杂质峰的分离度均大于2.0，可保证完全分离，且其它成分在舒芬太尼的保留时间处，无色谱峰出现，因此，可知该色谱条件对舒芬太尼的含量测定专属性较好。

2.4 线性关系考察

精密称取对照品适量后，加入流动相配制成浓度为100.14μg·mL-1的对照品储备溶液，分别精密移取1、2、3、5、10mL对照品储备溶液至10mL容量瓶，加入流动相稀释定容至刻度，摇匀后，配制成不同系列浓度的标准溶液，按照“2.1”项所述色谱条件分别进样，以对照品溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制得到标准曲线方程为：y=1.029x+0.012（r=0.9998），表明舒芬太尼在10.14～100.14μg·mL-1的浓度范围内线性关系良好。

2.5 定量限与检测限

精密称取对照品适量，采用流动相溶解并逐级稀释，按照“2.1”项所述色谱条件分别进样，以基线噪声的3倍响应值作为检测限，基线噪声的10倍响应值作为定量限，试验结果显示，舒芬太尼的检测限与定量限分别为1.22ng·mL-1与4.15ng·mL-1。

2.6 稳定性考察

分别移取系统适用性溶液、供试品溶液及对照品溶液于不同时间（0、1、2、4、6、8、12、24h）下，按照“2.1”项所述色谱条件进样。试验结果表明，系统适用性溶液于24h内符合相应要求，同时供试品、对照品溶液测定结果稳定，相对标准偏差均低于2%。

2.7 精密度考察

准确移取“2.2”对照品溶液10μL，按照“2.1”项所述色谱条件进样，记录峰面积。试验结果显示，舒芬太尼的峰面积的相对标准偏差仅为0.59%（n=6），表明该检测设备具有较好的精密度。

2.8 重复性考察

准确移取“2.2”中对照品溶液与6份供试品溶液1各10μL，按照“2.1”项所述色谱条件进样，记录峰面积后，计算供试品溶液1中舒芬太尼的含量。试验结果显示，测定供试品中舒芬太尼的含量的相对标准偏差为0.63%（n=6），表明该方法具有较好的重复性。

2.9 回收率试验

精密称取枸橼酸舒芬太尼供试品1适量，置于100mL容量瓶内，加入流动相稀释定容配制成51.36μg·mL-1供试品溶液，另配制浓度为50.19μg·mL-1的对照品储备溶液后，分别移取2、3、4mL至10mL容量瓶内，每个体积各移取3份，分别加入供试品溶液稀释至刻度，制得不同浓度的加样回收溶液，测定结果见表1。

表1 回收率试验结果Tab.1 Results of recovery tests（n＝9）

由表1可见，不同浓度的加样回收溶液的结果回收率均在98.6%～101.3%之间，表明该分析方法测定舒芬太尼的结果准确度较好。

2.10 耐用性试验

精密量取供试品溶液1适量，分别于不同流速（±0.2mL·min-1）、柱温（±5℃）、pH值（±0.2）、检测波长（±5nm）、流动相比例（±2）及不同品牌C18色谱柱的条件下，按照“2.1”项所述色谱条件进样，记录峰面积，测定供试品溶液中舒芬太尼的含量。试验结果表明，舒芬太尼与相邻杂质峰的分离度均大于2.0，同时测定结果的相对标准偏差均低于2.0%，表明本方法的耐用性较好。

2.11 样品含量测定

精密量取供试品溶液1、2与对照品溶液适量，以流动相作为空白溶液，按照“2.1”项所述色谱条件进样，记录峰面积，测定不同供试品溶液中舒芬太尼的含量，同时以药典规定的非水滴定法所测结果作为参照。试验结果显示，高效液相色谱法测定供试品溶液1、2中舒芬太尼浓度分别为51.41、52.63μg·mL-1，与非水滴定法测定结果相近（52.86、53.77μg·mL-1），因此，适用于相关药品的质量控制。

3 结论

本研究建立了高效液相色谱法测定枸橼酸舒芬太尼的含量。在该色谱条件下，舒芬太尼与相邻色谱峰分离度均大于2.0，测定结果无干扰，方法具有较好的专属性，与药典规定方法相比，可真实反映药物的含量水平，同时该方法测定结果的重复性与准确度良好。综上所述，适用用于枸橼酸舒芬太尼原料药的含量测定。