血型血清学检查方法在交叉配血中的应用研究

文/梁超坚，陈孝铧，蓝冬妹，覃敢

输血是临床常见的一种救治手段，可以快速补充患者的血容量，保证机体获得足够的氧气，有效挽救患者生命。但在输血前需采取有效的交叉配血方法来确立供血者血液是否和受血者匹配，以保证输血安全[1]。目前临床对交叉配血方式选择较多，如盐水法、抗球蛋白法及聚凝胺法、微柱凝胶法等。经典抗球蛋白法虽然可靠、准确，但是操作比较繁琐，用时比较长，虽然是金标准，但是不适用于常规的临床中[2]。近些年来，其应用常见方式为以下两类：聚凝胺法、微住凝胶法。基于此，本文把2018年1月-2019年12月期间在本院住院输血患者2796例作为研究对象，进行盐水法、微柱凝胶法、聚凝胺法三种血型血清学检查，分析其应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2018年1月-2019年12月期间在本院住院输血患者2796例，其中女性1575例，男性1221例，年龄1天-55岁。供血者：选取南宁市中心血站献血者预留血样标本。

1.2 方法

选取输血患者2796例，分别选取取盐水法、微住凝胶法进行配血检查，若检验结果中，提示为阳性结果或标本可疑，选取聚凝胺法，再次进行复查审核结果。

1.2.1 标本预处理

收集患者2ml抗凝静脉血，离心受血者、献血者标本，分离血浆后备用。

1.2.2 盐水法

取小试管3支，分别标明主侧、次侧、自身，在主侧管中加100μl患者血浆和50μl3%-5%的献血者红细胞,次侧管中加100μl献血者血浆和50ul3%-5%的患者红细胞，自身管中加100μl患者血浆和50μl3%-5%的患者红细胞。摇匀，1000g/min速度下离心15s，观察结果。对试管壁进行观察，判断是否存在溶血，并斜持试管，轻轻转动及弹动试管，对管底反应物是否存在凝集情况进行观察。自身管结果作为对照。

1.2.3 微柱凝胶法

通过选择凝胶卡，对主、次两孔标注后，主孔添加50ul0.8%-1%的献血者红细胞和25ul患者血浆，次侧孔反之，然后在37℃的专用孵育器中孵育15分钟，最后再放进专用卡式的离心机中离心10分钟，然后判定结果。离心后红细胞沉积在微柱尖底的视为阴性结果，滞留在凝胶上方或者是中间的视为阳性结果。

1.2.4 聚凝胺法

在盐水法基础上，各管加入0.6ml低离子介质溶液混匀，室温孵育一分钟，之后各滴入2滴聚凝胺溶液混匀，15s后离心，倾去上清液，留取管底0.1ml凝集液，将试管轻轻摇动，观察是否存在红细胞凝集情况，若没有凝集，必须重做。再各滴入2滴重悬液，轻轻摇匀，观察结果。如果是非特异性凝集，便会在1分钟之内散开，如果是特异性凝集，便不会散开，还可以进一步在显微镜下面观察是否出现凝集现象。若主侧和次侧都没有凝集，便为配合血。

1.3 观察指标

对比三种方法的交叉配血试验结果。

1.4 统计学处理

全文数据均采用SPSS19.0统计软件进行计算分析，x2用于检验计数资料，其中P＜0.05表示数据具有统计学意义。

2 结果

在2796例交叉配血中，盐水法真阳性率、假阳性率低于聚凝胺法、微住凝胶法，差异有统计学意义P＜0.05。见表1和表2。

表1 盐水法和聚凝胺法交叉配血试验结果相比[n＝2796，n(%)]

表2 盐水法和微柱凝胶法交叉配血试验结果相比[n＝2796，n(%)]

3 讨论

输血安全是当前临床输血面临的重大挑战，输血科既要保证交叉配血的准确性，又要快速地向临床提供安全血液，挽救生命。因此将各种交叉配血方法灵活的应用起来，根据实际情况选用最适宜的配血方法是临床输血检验的重中之重。交叉配血试验中，盐水配血法方便快捷、操作简单，能够快速检查出IgM类血型抗体，但对人体血液中存在的IgG免疫性抗体敏感性较低，造成盐水法交叉配血时漏检率较高，安全性不高[3]。上述方式应用中，可弥补聚集胺法及抗人球蛋白法所引起假阴性率，日常开展试验中，作为一类不可淘汰试验方式[4]。聚凝胺法原理应用中，通过实现高价阳离子季胺盐多聚物，当溶解过后，正电荷产生较多，中和红细胞表面负电荷，红细胞之间距离减少，红细胞可发生可逆性非特异性聚集，若显示为抗体致敏红细胞，此时可被聚凝胺凝集。对含有枸橼酸钠假凝集清除液作用下，枸橼酸根负电荷及聚凝胺正电荷中和[5]。聚凝胺法操作快速简便，进行一次交叉配血只需要10分钟便可以完成，因此是急诊配血的首选方法。并且聚凝胺法的试剂成本比较低，也是一些小型医院的常规方法。聚凝胺法还具有检测出假阳性概率低等优点，但其具有易受肝素、药物影响，无法检测较低浓度抗体，结果不直观等缺点[6]。微柱凝胶法试验基于离心技术、生物化学凝胶过滤技术，技术设计过程中遵循免疫化学抗原特性，此时红细胞血型抗原及抗体表现为特异性结合，结果可呈现为凝集，离心的时候凝集块不能够通过凝胶的间隙便会留在凝胶的上层，依照凝集的强弱也可以弥散在凝胶中，没有结合的红细胞，便会通过凝胶的间隙沉在管尖的底部，呈阴性反应[7]。微柱凝胶法因其标本用量少，操作方便灵活，不需要洗涤，重复性好，灵敏度高，准确度高，结果观察直观，保存时间长易于标准化，适合自动化批量检测等优点，目前成为临床交叉配血试验主要操作方法[8]。现阶段临床对微住凝胶法应用干预上往往存在一定不足之处，如试验开展中离心时间长，并不适用于急诊手术配血。对其原因分析得出，试验开展中因样本检测中对实验室要求高，若患者样本中抗凝不全，则呈现纤维蛋白丝消耗完全情况，后续难以判断配血类型，若结果提示为假阳性，则表明出错率显著偏高[9-10]。本文通过对我院2796例输血患者临床交叉配血进行研究表明，聚凝胺法和微柱凝胶法交叉配血不合检出真阳性率均高于盐水法，差异有统计学意义P＜0.05，同时，分析微住凝胶法及聚凝胺法效果，对其交叉配血结果分析得出，两类检测阳性率无差异性。研究结果与金勇,李继东,余小平[11]研究报道结果一致，但周雪莹[12]、孔存权[13]、毛娟[14]等研究报道微柱凝胶法检出率高于聚凝胺法，微柱凝胶法在临床输血检验中具有更高的准确率，比聚凝胺法更具有优势。

综上所述，3种交叉配血法各有优缺点，盐水法适用于日常基础试验，聚凝胺法简单、快速，适用于急诊输血；微柱凝胶法灵敏度高、安全可靠，可作为平常首选配血方法。联合盐水法、聚凝胺发及微住凝胶法能提升临床阳性检测率，确保安全输血。