全自动微生物鉴定仪在淋球菌鉴定中的意义研究

张国斌 沈阳市疾病预防控制中心 （辽宁 沈阳 110032）

内容提要： 目的：分析全自动微生物鉴定仪在淋球菌鉴定中的意义。方法：本实验所采取的样本来源为某院2017年6月～2019年6月门诊疑似淋病的女性患者子宫颈分泌物样本，共计116例。对于所有样本实施仪器法以及手工法细菌学检测工作，分析结果。结果：利用手工实验法，于116个疑似病例内检出71例存在淋球菌；全自动微生物鉴定设备中，于116个疑似病例内检出70例存在淋球菌。两组受试者检测精准性无明显差异，P＞0.05。设备法平均用时为（54.24±1.65）h，手工法平均用时为（73.52±1.62）h。和手工法相比，设备法检测用时更少，P＜0.05。结论：全自动微生物鉴定设备在院内微生物鉴定方面发挥出了举足轻重的作用。利用此鉴定仪可在根本上提升并球菌检出率。

淋病为一类临床常见病、多发病。该疾病主要指的是经由淋球菌感染所引发的一类性传播疾病。相关统计证实，此类疾病在细菌性性传播疾病中流行率第二位。患者发病之后，可能会出现诸如宫颈炎、尿道炎等合并症。利用有效方式全面减少淋病的传播率，有着相当重要的现实意义[1]。现如今，在多种因素的影响之下，致使淋球菌耐药情况趋于严重。其已然成为了淋病预防和治疗所面临的重要性问题。结合实际情况，本文全面探究全自动微生物鉴定设备在淋球菌鉴定中的价值，现报告如下。

1.资料与方法

1.1 一般资料

本实验所采取的样本来源为某院2017年6月～2019年6月门诊疑似淋病的女性患者子宫颈分泌物样本，共计116例。对所有样本实施仪器法以及手工法细菌学检测工作。实验利用珠海银科医学工程有限公司所提供的淋球菌分离培养板。其他包含葡萄糖、触酶、革兰氏染色液、全自动微生物分析系统、药敏鉴定卡、VITEK NH卡。以上材料以及试剂均在有效期内。

1.2 方法

1.2.1 传统手工检验法

工作人员收集完毕女性阴道分泌物样本以后，第一时间将其接种在事先预热到37°C的淋球菌分离培养板中。后将拭子紧紧贴于培养基表面滚动布大约25%培养皿。在此之后，做好分区工作。在此之后，于培养皿内取得单体细菌菌落。做好上述工作以后，把接种后的样本马上放到5%～10%二氧化碳气袋内加湿培养处理。时间为24～48h，温度环境为35～36°C[2]。后形成湿润、突起、光滑现象、圆形、灰白色的非透明样菌落。进一步开展分离工作。取用纯培养物开展涂片操作，实施革兰染色镜检，确定其为革兰氏阴性菌。具体为卵圆形或肾形，成双排列。在此之后，实施触酶氧化酶试验，确定结果为阳性、葡萄糖分解18～24h。于35～36°C环境下培养确定为淋球菌。

1.2.2 仪器法

择取高度疑似培养基菌落，通过革兰氏染色处理之后，经镜检确定为革兰氏阴性双球菌。在此之后，依照设备规定步骤开展菌液配制工作。后将事先填充完毕的鉴定卡和药敏鉴定卡一起放入到设备之中。经6～8h反应后得出结果。其为99%可能性的淋病奈瑟氏菌，取得鉴定结果。

在此同时利用设备开展药敏实验，结果证实：淋病奈瑟氏菌针对于头孢西丁、头孢曲中的敏感性分别为97.45%以及97.66%；其针对于四环素以及青霉素的敏感性为5.99%以及15.28%。

1.3 统计学分析

本实验利用SPSS20.0统计学软件，对数据内的计数资料开展χ2检验分析，计量资料开展t值检验分析。P＜0.05，为相关数据存在统计学差异。

2.结果

利用手工实验法，于116个疑似病例内检出71例存在淋球菌；全自动微生物鉴定设备中，于116个疑似病例内检出70例存在淋球菌。两组受试者检测精准性无明显差异，P＞0.05。设备法平均用时为（54.24±1.65）h，手工法平均用时为（73.52±1.62）h。和手工法相比，设备法检测用时更少，P＜0.05。利用全自动微生物检验法，能同时取得药敏结果，方便患者及时诊断，尽早治疗。

3.讨论

淋病奈瑟氏菌均为造成淋病的重要病原体。其俗称为淋球菌。这种病菌有着相当强的自我调节能力水平，可以经过变异获取抗药性或者能够令少数药品的治疗效果降低。且值得说明的是，淋球菌当前正对越来越多品类的抗生素体现出此类免疫力，首先青霉素对其失效，其次为四环素、环丙沙星。现如今，头孢克肟对于淋球菌也失去了抵抗效果[3]。

淋球菌一般为豆形或者卵圆形，细菌长度为0.6～0.8 micro：m，宽度大约为0.5 micro：m。其往往为成对排列，附近面稍凹陷或者完全扁平，如两粒豆子一般结合在一起。淋球菌不会形成芽孢、无鞭毛存在。

当一个人发生淋球菌急性感染时，这些细菌形态一般比较典型，大多在细胞浆之中；慢性感染则在细胞外淋球菌为一类革兰阴性细菌。使用碱性美兰对病球菌进行染色处理，细菌体会表现为蓝色；应用Pappehheim Saathof开展染色时，淋球菌的菌体会表现为红色，而背景则为天蓝色，清晰可见[4]。

淋球菌致病一般和菌体外部结构存在其他关联性。淋球菌外表结构为外膜。膜蛋白、菌毛以及脂多糖为外膜的主要成分。膜蛋白能够令淋球菌粘附于人体黏膜中。经过细胞吞噬效用作用在人体细胞之中，并在细胞之内大批量繁殖，引起细胞崩解。当淋球菌扩散到黏膜下层时，会造成感染[5]。菌毛会黏附在女性的子宫以及患者的口腔上皮表面，其有着非常高的致病率以及传染性。淋球菌的唯一自然宿主为人类，淋球菌往往通过性接触实现传播。当发生不洁性行为之后，淋球菌有可能侵入到人体泌尿生殖系统实现繁殖。女性患者往往会表现为子宫颈炎以及尿道炎，而男性患者则以尿道炎为常见。倘若没有在第一时间对该疾病患者开展行之有效的治疗，极有可能扩散到患者的整个生殖系统之中。胎儿会通过产道感染出现淋病性急性结膜炎。值得说明的是，人类本身对于淋球菌不存在自然免疫力。全年龄人群均易感，在患病之后免疫能力不高，且不能够预防再感染[6]。

谢美红[7]等研究表明：淋病为中国法定传染疾病。现如今，随着中国临床广谱抗菌药物的广泛应用，加上抗菌药物选择压力等多因素综合作用，导致淋球菌耐药情况变得十分严峻。该学者经过测定共计5类抗菌药物MIC值，结果表明：淋球菌针对青霉素耐药率达到了91.8%、淋球菌针对于四环素的耐药率达到了75.4%以上。两者的MIC90值以及MIC50值均比耐药标准要高。虽然说其针对于四环素以及青霉素耐药水平均比较高，且以上两个药品现已不被临床视为治疗淋病的主要方案。但不容忽视的是，PPNG以及质粒介导的TGNG流行率依然为淋球菌耐药性流行病学监测的重点指标。在该实验中，TGNG以及PPNG的检出概率分别达到了32.2%以及31.1%。

喹诺酮类抗菌制剂曾被视为一种治疗无并发症淋病患者的首选方案。该门类药品主要经过抑制DNA螺旋酶，就此抑制菌体DNA和蛋白质合成。但不容忽视的是，随着现如今全世界诸多临床治疗失败案例的报道。喹诺酮类抗菌药物也渐渐成为了淋病的失效药品。在该组实验中，环丙沙星的耐药概率为97.3%，其MIC90值已经超出了耐药标准32倍之多。最近5年以来，我国部分地区的淋球菌针对环丙沙星耐药率达到了97%以上，其表现出持续高耐药率水平。由此不难看出，淋球菌针对于既往临床推荐的药物环丙沙星已经出现相当严重的耐药情况，这一点值得临床所重视。

卫舒帆[8]等分析了全自动微生物鉴定系统与两类微生物鉴定类的应用情况。该学者结合2010年颁布的《中国药典》方法，针对于相关样本开展增菌培养、分离、纯化、接种，共计取得2株未知待测菌株。经革兰染色以及镜检，最终确定细菌鉴定卡之种类。实验使用全自动微生物鉴定系统开展实验工作，结果表明：通过全自动微生物鉴定系统加以鉴定，共计2株未知菌株分别为伤口埃细菌以及泛军属。该学者指出：全自动微生物鉴定系统可以在短期内精准鉴定出污染菌的具体品类。应用此法开展鉴定工作有着便捷、快速、成本低廉、实用性高等优势。

和以往相比，当前我国滥用抗生素现象更为严重。在此情况之下，致使淋球菌耐药状况趋于严重。针对于淋病奈瑟氏菌的鉴定工作来讲，在相当长的一段时间内临床均利用革兰染色和并球菌培养法完成检验工作。前者因为在粒细胞之中的衰老菌、葡萄球菌核染成革兰阴性结果，因此加大了假阳性的出现概率[9]。而开展淋球菌培养法完成检验，则非常容易造成假阴性情况。

针对于淋球菌的检测来讲，虽然说利用传统人工法开展培养实验准确性较高。但值得说明的是，此类方法检出淋球菌的概率偏低。在本次实验内，共计45例受试者利用手工法未能检出淋球菌。之所以出现这种情况，主要原因为：

第一，从对于临床提医生的要求来看，淋球菌通常寄生在柱状上皮之内。因此在工作人员取样过程中应当首选尿道口位置，择取宫颈管内柱状上皮细胞。不要收集阴道表面鳞状上皮细胞。如果受试对象为未成年儿童应，当取用阴道口或者尿道口样本；倘若受试者患处分泌物过多，应首先利用经过灭菌处理的0.9%NS溶液对该位置加以清洗。通过此法，也能够在原有基础上提升并球菌检出率，祛除多余杂菌[10-12]。在选择尿道口取样时，尽可能应用灌酸钙拭子，避免使用棉拭子。从实际情况而言，很多医疗单位主要经由医生与门诊或住院部取样送检，未能按照科学标准取样。而化验师仅仅负责复查培养工作。其也为造成较难培养出淋球菌的重要原因，淋病奈瑟氏菌抵抗能力偏差、对于营养环境要求高，其在分离之后保存时间极短，容易死亡。并且淋病奈瑟氏菌有着自溶的特点。所以说，样本采集送检相当关键。在开展临床工作中，医生在收集受试者样本时必须规范操作，确保所送检的样本质量合格。在根本上提升淋病奈瑟氏菌检出概率。

第二，从检验工作针对于患者方面的要求来看，患者接受检查之前一段期间内，尽量避免使用抗生素。在实际临床中我们能够发现：有很多患者未能深入性认识性病的危害性，其在发生疾病以后往往使用过抗生素。当自身症状无法得到有效缓解时，才前往医院接受治疗。在此刻，留取受试者的分泌物样本较难培养出淋球菌。

第三，从检验工作对工作室人员要求方面来看，和其他菌种相比，淋球菌培养环境较为严格。在第一次培养时，需要具备5%～10%的二氧化碳气体环境，同时也要维持一定湿度才能够实现细菌培养。值得说明的是，传统手工法的实施针对于实验室工作人员的职业素养要求较高。与之相比，仪器法仅仅需要工作人员熟知设备操作程序即可。将样本放入到设备之内，能够取得满意的检测结果。通过此法可提升淋球菌检出率。且和人工法相比，仪器法所用时间更少，且检出淋球菌精准度无明显差异。本组实验所得出的相关结果也证实了这一点的真实性。

由此能够看出，全自动微生物鉴定设备在院内微生物鉴定方面发挥出了举足轻重的作用。基于此，建议有条件的医疗机构配备该类鉴定设备。利用此鉴定仪可在根本上提升并球菌检出率。