中性粒细胞表面分化抗原CD67 CD24在阵发性睡眠性血红蛋白尿症表达水平及临床意义

丁 园，熊 涛

(湖北省汉川市人民医院医学检验科, 湖北 孝感 431600)

阵发性睡眠性血红蛋白尿症(paroxysmal nocturnal hemoglobinuria,PNH)为一种后天获得性造血干细胞基因突变的溶血性疾病，患者磷脂酰肌醇糖苷-A(phosphatidylinositol glycanclass-A,PIG-A)基因突变，导致糖肌醇磷脂(glycosylphosphatidylinositol,GPI)锚合成障碍，继而诱发一系列由锚缺失引起的细胞功能变化[1]。PNH临床表现主要为贫血、血红蛋白尿、感染等，与再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)临床表现相似，临床误诊或漏诊并不少见[2]。近年，利用单克隆抗体技术及流式细胞术检测中性粒细胞表面分化抗原CD55、CD59，成为诊断PNH的重要手段，较传统溶血试验更具敏感性[3]。外国学者也指出，PNH患者不仅存在CD55、CD59缺失，其中性粒细胞表面还可见CD67、CD24缺失，CD67、CD24表达水平也能辅助诊断PNH[4]。基于此，本研究就PNH、AA及对照组患者中性粒细胞表面CD67、CD24、CD55、CD59表达水平展开分析，并评估上述分化抗原对PNH的诊断价值，为PNH诊疗提供参考依据，如下。

1 资料与方法

1.1一般资料:回顾性分析2018年2月至2019年12月我院32例PNH患者(PNH组)临床资料，并收集同期入院治疗的28例AA患者(AA组)及32例健康体检者(对照组)临床资料。纳入标准：PNH及AA均符合《血液病诊断及疗效标准》[5]诊断标准；AA患者不合并PNH；年龄>18岁；相关资料完整。排除标准：对照组排除体检前3个月内出现感染、输血等情况者。

1.2方法:采用荧光免疫标记法检测中性粒细胞表面分化抗原CD67、CD24、CD55、CD59：采集清晨空腹外周静脉血，取100μL全血置于管中，1号管加入20μL同型对照(藻红蛋白标记的鼠抗人单克隆抗体)，2号管加入20μL荧光抗体CD67；室温避光30min，在5根试管中分别加入2mL溶血素，避光10min；溶血后，离心1000r/min，5min，弃去上清液；使用2mL磷酸缓冲盐溶液洗涤2次，再悬于0.5mL磷酸缓冲盐溶液中，使用流式细胞仪检测(美国BD公司，型号：FACS Calibur)，以细胞物理参数前向、侧向散射光的点状图设门，确定中性粒细胞细胞群，以同型抗体为阴性对照；使用上述相同的步骤检测中性粒细胞表面CD24、CD55、CD59表达水平。

2 结 果

2.13组基线资料比较:3组性别、年龄、体质量指数(body mass index,BMI)、吸烟史、饮酒史比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 3组基线资料比较

2.23组中性粒细胞表面CD67、CD24、CD55、CD59表达水平比较:3组中性粒细胞表面CD67、CD24、CD55、CD59表达水平比较，均为PNH组

表2 3组中性粒细胞表面CD67 CD24 CD55 CD59表达水平比较

2.3PNH组中性粒细胞表面CD67、CD24、CD55、CD59表达水平的相关性分析:经Pearson相关性分析，发现PNH组中性粒细胞表面CD67、CD24、CD55、CD59表达水平均呈显著正相关(P<0.05)，见表3。

表3 PNH组中性粒细胞表面CD67 CD24 CD55 CD59表达水平的相关性分析

2.4中性粒细胞表面CD67、CD24、CD55、CD59及其联合检测对PNH诊断价值分析:经ROC曲线分析，发现中性粒细胞表面CD67、CD24、CD55、CD59表达水平均对PNH具有较高诊断价值(AUC=0.961、0.967、0.972、0.995，P<0.05)，其cut-off值分别为81.88%、83.64%、84.42%、81.37%，且4项联合检测诊断价值最高(AUC=1.000，P<0.05)，见表4、图1。

表4 中性粒细胞表面CD67 CD24 CD55 CD59及其联合检测对PNH诊断价值分析

图1 中性粒细胞表面CD67、CD24、CD55、CD59及其联合检测诊断PNH的ROC曲线分析

3 讨 论

目前，PNH异常克隆增殖尚未阐明，可与免疫机制、抗凋亡机制、微环境改变等相关，但PNH细胞PIG-A基因突变引起的GPI锚链膜蛋白缺失，引起的血管内溶血机制已得到广泛认可[6]。学术界普遍认为[7,8]，PNH发生发展过程中，最先累及中性粒细胞，其表面GPI锚链膜蛋白缺失可最早被检出，其中衰变加速因子CD55及反应性溶血膜抑制物CD59是临床最常研究的GPI锚链膜蛋白；细胞表面CD55、CD59表达缺失，导致细胞膜上缺乏抑制自身补体活性的物质，PNH细胞对自身补体异常敏感，遭到补体复合物攻击，出现细胞破坏、消灭，而引起血管内溶血、血管栓塞等表现。因此，临床也常通过检测中性粒细胞表面CD55、CD59缺失情况，诊断PNH[9]。本研究也发现，3组中性粒细胞表面CD55、CD59表达水平比较，均为PNH组

除上述CD55、CD59外，CD67、CD24也是中性粒细胞表面GPI锚链膜蛋白，早在上世纪初，就有外国学者指出[12]，PNH患者血浆CD67、CD24呈低水平，中性粒细胞表面存在CD67、CD24缺失。然而后续相关报道较少，大部分研究集中于CD55、CD59与PNH的关系。本研究就中性粒细胞表面CD67、CD24表达情况与PNH的关系展开分析，也发现3组中性粒细胞表面CD67、CD24表达水平比较，均为PNH组

综上所述，PNH及AA患者中性粒细胞表面CD67、CD24、CD55、CD59均存在不同程度缺失，PNH缺失程度更为显著，可作为诊断依据，辅助临床判断。