生物等效性试验血液乙醇浓度检测探讨

周 娜

（北大医疗鲁中医院药物临床试验机构办公室，山东 淄博 255400）

本文将比较不同BAC检测方法间的优缺点，并结合我院2017年以来在Ⅰ期临床试验中心开展的50余项BE试验呼气乙醇含量检测流程，探讨如何建立符合GCP要求的BE试验BAC检测标准操作流程[1]。

1 BE试验与BAC检测

为防止不符合入组条件的受试者进入试验，BE试验方案一般明确将筛选前嗜酒（每周饮用超过14个单位的乙醇：1单位=啤酒285 mL，或烈酒25 mL，或葡萄酒100 mL）或试验期间不能停止饮用任何乙醇制品列为受试者的排除标准。在试验筛选期，除通过询问受试者了解其饮酒情况外，BAC检测便成为客观评价受试者是否符合试验入组条件的必要措施[2-3]。此外，在试验期间，为保证试验药物的体内代谢不受乙醇干扰，每周期受试者入住Ⅰ期病房前也需要进行BAC检测。

2 BAC检测方法

BAC检测可分为直接检测和间接检测2种方法，所谓直接检测就是抽取被检测人的血液进行BAC检测的方法，目前国内报道的常用方法包括化学法、酶法和气相色谱法[4-5]。化学法不需要精密仪器，操作简单，成本低，在一般实验室即可开展，但是该法灵敏度较低，准确性易受还原物质的影响。酶法可定量检测乙醇含量，但易受酶的反应温度及保存条件等影响，人体内的某些酶或药物等影响试验结果。上述2种检测方法受灵敏度和准确性低的限制，不宜用于临床试验BAC检测中。气相色谱法因其灵敏度高（可以检测出10-6至10-9级的乙醇含量）、选择性好（能把乙醇分离出来并做定量分析）、分析速度快（一般每个样品的分析时间在5 min内）、易于自动化操作等优点，在BE试验BAC检测方面被认为是最科学的方法。目前市售的血液乙醇含量专用气相色谱仪，符合中华人民共和国行业规范技术要求、中华人民共和国司法部司法技术规范标准：GA/T842-2009GA/T1073-2013行业技术规范标准，利用乙醇的易挥发性，以叔丁醇为内标，用顶空气相色谱-火焰离子化检测器进行检测，可直接测出血液乙醇含量。但出于仪器价格、使用率等实际情况考虑，很多开展BE试验的机构无法配备气相色谱仪，不能进行BAC直接检测；所谓间接检测就是采用自动检测仪器测定乙醇浓度，并按照一定比例换算为BAC的方法。呼气乙醇检测（口腔呼出气体同血液之间有换算关系）、非抽血式红外检测（血液中乙醇分子反射被照上的红外线）和汗腺检测（汗液中乙醇含量间接推断）均属于间接检测。其中呼气乙醇检测因其操作方便和可快速检测出乙醇含量的优势，被很多机构用于BE试验中[6]。

3 呼气乙醇含量检测仪

乙醇检测仪是用来检测人体是否摄入乙醇和摄入乙醇程度的仪器。呼气式乙醇检测仪是乙醇测试仪中最常用的一种，它只需呼入被检测者的气体即可快速检测出乙醇含量。它分为湿化学法、气相色谱法、电化学法、红外光谱法和半导体传感器5种工作原理，其中电化学/燃料电池乙醇检测仪应用较多，其原理为呼气中乙醇被催化剂氧化成氧化碳（或乙醛）和水的过程中释放出化学能，化学能经能量转换器转换之后成电流通过电伏特表，表的读值越高，则乙醇浓度越高。我院BE试验乙醇检测使用的是已获得“中华人民共和国制造计量器具许可证”的兴喜电子（深圳）有限公司生产的燃料电池型呼气乙醇含量检测仪（型号：AT13），该检测仪已经通过“国家道路安全产品质量监督检验中心”以及“广东省计量科学研究院”按GB/T 21254-2007 及JJG657-2006的检测。为保证该仪器的准确性，每6个月由淄博市计量测试所依据JJG657-2006《呼出气体乙醇含量探测器检定规程》对其进行检定，只有检定合格且在检定有效期内的仪器，才能被用于我院BE试验中。

4 我院呼气乙醇含量检测流程

4.1 测试前准备 ①仪器准备：我院Ⅰ期临床试验中心实行项目联系人（project contact，PC）负责制，由主要研究者指定专人作为PC，其负责对整个试验项目的协调与安排。根据PC制订的试验流程及项目时间安排，仪器设备管理人员会提前准备试验所需仪器设备。如BE试验的筛选期和每周期入住Ⅰ期病房前需要进行呼气乙醇检测，需要提前准备呼气乙醇含量检测仪，并检查仪器的校准和检定是否在有效期内、仪器运转是否良好、电源储备和打印纸是否充足等，以保证试验中所用仪器满足GCP对临床试验的要求。②HIS医嘱：有些机构因为医院检验科不具备BAC检测资质，呼气乙醇检测非由检验人员操作，而是由Ⅰ期临床试验中心的研究人员在本科室进行测试操作，检测后将检测结果复印后粘贴于原始文件中，导致非检验科检测项目在实验室信息系统（laboratory information system，LIS）中无法溯源。这些在试验科室进行检查的项目不能溯源，检查过程无标准操作流程，无室间质评证书，检查人员也难以做到专门的培训，这些都对试验数据的真实性、规范性带来了不利的因素[7]。为满足GCP对临床试验数据可溯源的要求，检测前一天，我院研究医师在医院信息系统（hospital information system，HIS）中开具呼气乙醇检测医嘱，研究护士进行医嘱确认后打印医嘱条码，交有资质的检验人员进行呼气乙醇检测时使用。

4.2 测试操作 ①时间校准：检测当天，检验人员按Ⅰ期临床试验中心要求领取项目所需呼气乙醇含量检测仪及其《仪器设备使用登记表》，开机检查仪器状态，并与GPS时钟进行时间校准。②受试者身份核对：将医嘱条码信息（科室、姓名、性别、年龄等）和受试者信息（身份证、所参加项目的编号等）进行核对，核对无误后进行呼气乙醇检测操作。③测试操作：我院使用的AT13燃料电池型呼气乙醇含量检测仪操作简单，开机状态下，直接点击屏幕“测试”按钮，进入乙醇测试状态，按照屏幕的提示装好吹管，让受试者深吸一口气，然后含住吹嘴吹气，当达到吹气压力后仪器发出“哔”一声，同时屏幕测压指示条开始滚动、状态指示灯常亮；当指示条到达尽头时，仪器自动抽气采样，受试者可停止吹气，若测试时滚动条未到达尽头，仪器会显示“吹气中断，请重吹”，同时发出提示音，受试者应重新吹气，直至测试完成。注意在测试时，两次测试应间隔2 min。如果测试结果超过80 mg/100 mL(即呼气乙醇含量超过0.36 mg/L)，下次测试需间隔3 min，以便让燃料电池充分归零。④BrAC与BAC自动换算：AT13燃料电池型呼气乙醇含量检测仪是由兴喜电子（深圳）有限公司生产，该企业执行2011年1月14日国家质量监督检验检疫总局、国家标准化管理委员会批准的强制性国家标准《车辆驾驶人员血液、呼气乙醇含量阈值与检验》（GB19522-2010），该标准中4.2条明确规定“血液与呼气乙醇含量换算：车辆驾驶人员呼气乙醇含量按1∶2 200的比例关系换算成血液乙醇含量，即呼气乙醇含量值乘以2 200等于血液乙醇含量值”。该仪器已按照GB19522-2010规定的系数设置好，即通过测定BrAC，以BAC∶BrAC=2 200∶1的比例自动换算为BAC，故仪器打印出的热敏纸结果直接显示为BAC。⑤结果打印：在仪器显示BAC数值后，按“OK”键进入输入相关信息界面（测试模式选择“主动”模式），持续按“OK”键直至出现条码打印界面，点击“打印”按钮进行结果打印。结果打印后，将该受试者的医嘱条码粘贴于热敏纸结果“被测试人”下面的空白处，并在“被测试人”处记录受试者的筛选号或随机号及姓名缩写，操作人员在“执勤民警警号”处签名，至此完成一次呼气乙醇测试。选择“退出”按钮，开始下一位受试者的测试。仪器使用时，及时在呼气乙醇检测仪的《仪器设备使用登记表》上登记使用相关信息（方案编号、使用日期、开始时间、结束时间、仪器状态、操作内容和操作人等）。⑥结果复印：待所有受试者检测完毕，检验人员核对仪器操作记录无误后，将呼气乙醇含量检测仪及其《仪器设备使用登记表》归还Ⅰ期仪器设备管理人员，并将呼气乙醇检测的热敏纸结果复印2份，1份复印件留存于Ⅰ期临床试验中心的项目原始文件中，另1份复印件和热敏纸检测结果原件由检验人员带回检验科用于完成测试报告。

4.3 测试报告 ①样本登陆：通过扫描我院HIS二维码，实现和LIS的有效对接，实现呼气乙醇检测项目的可溯源性。检验人员在瑞美“NS3001免疫层析判读记录仪”报告单元，在相应编号位置扫入受试者医嘱二维码，并确认样本一致性。②受试者信息核对：依次核对瑞美报告系统中受试者信息（科室、姓名、性别和年龄等）与呼气乙醇热敏纸检测结果中的受试者信息是否一致，如有不一致及时联系Ⅰ期临床试验中心查找原因。③结果判定与审核：检验人员（操作人员）根据本院检验科《呼气乙醇检测标准操作规程》对呼气乙醇热敏纸检测结果显示的BAC定量结果进行定性判读。血液乙醇浓度为0.0 mg/100 mL，结果判定为“阴性”，高于0.0 mg/100 mL，结果判定为“阳性”。结果初判后，由其他检验人员（非操作人员）对最终结果进行再次审核，以保证最终判读结果的准确性。④报告单打印分发：再次审核无误后，检验人员打印报告单并做好相关登记，将报告单发放给Ⅰ期临床试验中心。

5 讨 论

利用呼气乙醇含量检测仪进行BAC间接检测的方法，虽不如气相色谱法直接检测血液样品检测结果准确，但该方法以其检测仪器价格低、操作简便和出结果快等优点，被大多数机构认可，并广泛应用于BE试验中[8]。目前，大多数机构检验科无法进行呼气乙醇检测室间质控，导致核查人员会对呼气乙醇检测数据获取的规范性提出质疑。希望国家药品监督管理局（national medical products administration，NMPA）能联合计量检测部门早日为BE试验呼气乙醇检测提供室间质控标准物质及质控方法，使检验人员在进行呼气乙醇检测过程中能开展室间质控，以保证临床试验数据采集的规范性[9-10]。开展BE研究时，无论采用直接还是间接BAC检测方法，机构都要建立完善的BAC检测的标准操作规程，以满足GCP对临床试验数据真实可靠、试验结果完整可溯源的要求。