温州水牛冻精保种过程及结果

李良君，李挺志

(1.平阳县闹村乡人民政府农业公共服务中心，浙江 平阳 325405；2.平阳县挺志温州水牛乳业有限公司)

温州水牛是经过漫长的自然选择和人工选择培育出来的优秀地方品种，已有六七千年的养殖历史，在国内外享有盛名。温州水牛体型较小，饲料消耗较低，但具有潜在的乳用性能，以其产奶量高、鲜奶含脂率高而著称于世。温州水牛奶含脂率,在泌乳前期、中期、后期分别达到10.9%、9.55%、8.87%,平均为9.77%,是黑白花奶牛的3倍多。温州水牛1988年收录于《中国牛品种志》，2006年列入《国家畜禽遗传资源保护名录》，温州水牛作为奶水牛有着很好的开发前景。

平阳县挺志温州水牛乳业有限公司种牛场于2012年5月通过农业部评审，认定为国家级温州水牛保种场。该保种场的温州水牛三代内无近亲血缘关系，血缘比较纯正，而且保种场所处南岙村及周边环境贴近原生态，对温州水牛保种起到了保障性作用。近年来，温州水牛作为耕田的役用功能逐步淡化，纯种数量直线下降，面临遗传基因消失的危险，2019年农业农村部全国畜牧总站专家来到该保种场，采集纯种温州水牛精液，并制成冻精移送国家级家畜基因库进行长期保存，对温州水牛的遗传资源起到了双重保护的作用。现将温州水牛的冻精保种过程及结果总结如下：

1 采精前准备

1.1供体公牛的选择 挑选供体公牛10头，条件如下：符合温州水牛品种特性、特征，系谱清楚，三代以内无血缘关系；健康，无传染性疾病和遗传疾病，有检疫证明。

1.2供体公牛信息档案 包括供体信息(来源地、群体情况等)、系谱、生产性能测定记录、电子照片等。

2 采精过程

2.1供体公牛营养保障 采精期间，每头公牛每天饲喂2 kg以上全价精料、1个鸡蛋、2 kg青绿草料，直到每头公牛制作冻精不少于300剂。

2.2台牛准备 选择有黄体的空怀母牛，产犊牛后50 d左右，注射氯前列烯醇(PG)0.2 mg进行人工催情，一般注射后1-2 d发情。采精前将发情母牛固定在采精架上，清洗干净外阴、臀部，把尾巴固定。

2.3采精用具准备

2.3.1将采精用具有规则地摆放在操作台上，采精器润滑剂(凡士林与液体石蜡1∶1)。每次用前，用水浴煮沸消毒后，置于62～65 ℃水浴锅内待用。也可使用商品化的专用润滑剂。

2.3.2采精器用75%的酒精棉球擦试消毒，无消毒剂残留后注入38 ℃左右温水，并用消毒纱布将采精器口包裹好，放置于44～46 ℃的恒温箱内。采精前将采精器从恒温箱中取出，套上保护套，从活塞孔打气使采精器口呈三角形状，涂擦适量润滑剂，采精器加上保护套。青年公牛用光面内胎的采精器，成年公牛可用纹状面内胎的采精器。采精时采精器内温度控制在38～40 ℃之间，根据季节和不同的牛，温度可做适当调整，最高不得超过43 ℃。

2.4采精

2.4.1用温水冲洗公牛包皮及其周围表面污物，气温高时可先用清水将公牛全身冲洗干净，擦干后用温0.1%髙锰酸钾溶液清洗腹部和包皮，特别是包皮部，再用温水清洗、擦干。阴毛过长时应适度修剪。

2.4.2采精前先进行2次～3次充分的空爬，使之有良好的性欲后开始采精。采精员右手持采精器，站在公牛右后方，当公牛起跳，前肢爬上台牛时，迅速向前用左手托着公牛包皮，右手持采精器，采精器口斜向下方，左右手配合将公牛阴茎自然地导入采精器口内，公牛往前一冲即完成射精，公牛随即而下，采精员右手紧握采精器，随公牛阴茎而下，待公牛前肢落地，阴茎缩回后缓慢地把采精器退出；立即将采精器口斜向上方，打开活塞放气，使精液尽快地流入集精管内，然后小心地取下集精管，迅速从专用的传递窗口送至精液处理室。安装好的采精器只能使用一次，不得重复使用。公牛每周一般采精两次，视年龄、身体状况可增减次数；每次可连续采精两回(间隔时间30 min以上)，采精充分(集精管内泡沫丰富，精液体量多且稠密)的公牛一般不宜连续采精。

3 精液稀释

精子活力和密度检查后，根据检查结果用34～36 ℃的稀释液进行稀释，稀释比例以每支冻精有效精子800个为宜；稀释后放室温30～40 s后分装细管。

4 精液平衡及冷冻

4.1平衡 分装后的细管先用纱布或毛巾包裹1～2层，再放入4～5 ℃冰箱内平衡2～3 h。冰箱放置在干燥阴凉处，避免强光高温影响。

4.2冷冻 采用自制的冷冻箱或泡沫盒冷冻细管，冷冻箱的深度应在50 cm以上。第一步先薰蒸细管，距液氮面的距离一般3～5 cm。细管放入后通过开启盖子或搅动液氮来调节温度，能升降冷冻架更好。细管温度一般控制在-80～-120 ℃。薰蒸细管8 min后投入液氮中，标记包装后放入液氮罐保存。温度调控主要起决于自制冷冻箱或泡沫盒保温效果，细管离液氮面的距离和一次冷冻的细管数。

5 结果

最终，制作成0.25 mL细管冻精3200剂。经全国畜牧总站专家团队解冻精液和一系列的常规检测，保种冷冻精液解冻活力平均为43.3%,符合国家级家畜基因库收藏要求(活力≥30%)。

6 小结

现在，生物技术保种已经成为战略性举措，保存的家畜遗传物质具有长远、潜在和可持续的利用价值。主要包括以下几个方面：(1)保存的遗传物质不会受到自然灾害、战争、疫病等的影响，可以最大限度地防止基因丢失；(2)可以利用保存的遗传物质对畜禽遗传资源高繁殖力、抗病、抗逆、生态适应性等优异基因进行挖掘，为新品种和新品系培育提供育种素材；(3)作为战略性遗传物质进行长期保存储备，为今后的科学技术研究和高新技术的利用可持续性提供必要的素材，例如可以作为克隆和转基因的遗传材料储备。