不规则抗体阴性受血者直接抗人球蛋白试验阳性的特征分析及类型鉴别

朱洁好,李伙桂,林楚霞,叶伙梅,廖银梅,陈浩峰,梁慧宇

广东省云浮市人民医院：1.输血科;2.感染科;质控科,广东云浮 527300

直接抗人球蛋白试验(DAT)是一种简单易行的试验，用于检测红细胞在体内是否被免疫球蛋白和(或)补体致敏。在临床上，DAT主要用于溶血性输血反应、新生儿溶血病(HDNF)、自身免疫性溶血性贫血(AIHA)以及药物诱导的溶血反应的诊断。DAT结果阳性可能与免疫介导的溶血反应相关或不相关[1]。在实际工作中，常常遇到不规则抗体阴性而交叉配血次侧凝集的现象，此类现象往往与受血者DAT阳性有关。本研究对此类患者的特征、DAT阳性类型进行了探讨，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 2019年9月至2020年4月在本院进行不规则抗体筛查，结果为阴性的受血者共2 066例。将其中交叉配血次侧凝集的受血者72例纳入研究作进一步分析，这72例受血者中男44例、女28例，年龄11个月至89岁，中位年龄为66岁。

1.2仪器与试剂 微柱凝胶血型卡、微柱凝胶抗人球卡由珠海贝索公司生产，ABO标准细胞由上海血液生物医药公司生产，抗人球蛋白(抗IgG、抗C3d)检测卡由江苏力博医药生物技术股份有限公司生产，以上试剂均在有效期内使用。检测仪器包括血型血清学离心机(Centrifuge 12 SⅡ)、孵育器(Incubator 37 SI)、CU600型电热恒温水箱、北京白洋BY-120A离心机、CU600型电热恒温水浴箱。

1.3方法

1.3.1DAT 对交叉配血次侧凝集受血者行DAT。将EDTA抗凝血标本以3 500 r/min离心1 min后取10 μL压积红细胞，加入1 mL生理盐水配制成1%的红细胞悬液，取50 μL加至抗人球蛋白检测卡(微柱凝胶法)中，37 ℃孵育15 min，血型血清学离心机离心10 min，肉眼观察结果。如结果为阳性，作DAT分型检测，在DAT分型卡IgG、C3d及对照(Ctrl)孔3孔中分别加入50 μL的1%红细胞悬液，37 ℃孵育15 min，血型血清学离心机离心10 min，肉眼观察结果。结果判断：如果红细胞全部分布在凝胶上端，凝胶下端清澈透明，表示阳性4+；如果红细胞大部分分布在凝胶中上段，凝胶下端有清晰透明液体，则表示阳性3+；如果红细胞大部分分布在中上段，下端也有部分红色液体，则表示阳性2+；如果红细胞大部分分布在凝胶下端，只有少量分布在上端，则表示阳性1+。

1.3.2热放散试验 对DAT阳性标本进行热放散试验，将EDTA抗凝血标本以3 500 r/min离心1 min，移除全部血浆，剩下的压积红细胞用盐水洗涤5～6次，末次洗涤时去掉上清液后加与压积红细胞等量的盐水，然后置于45 ℃水浴箱放散10～15 min，期间轻轻振摇。放散后取出离心，用上清液进行抗体筛查。

1.3.3输血疗效的评估 红细胞输注疗效分为输注有效、输注部分有效、输注无效。患者输注红细胞后24 h内检测血红蛋白(Hb)，输注每单位红细胞后Hb增量不低于5 g/L×60/患者体质量(kg)为输注有效；输注后Hb不高于输注前水平为输注无效；输注后Hb高于输注前水平，但其增量低于5 g/L×60/患者体质量(kg)为输注部分有效[2]。

1.4统计学处理 采用SPSS26.0软件进行统计分析，计数资料以百分率或频数表示，组间比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

72例不规则抗体筛查阴性交叉配血次侧凝集的受血者均为DAT阳性，在不同Hb水平区间的分布：Hb<40 g/L，占5.56%(4/72)；Hb 40～50 g/L，占9.72%(7/72)；Hb>50～60 g/L，占40.28%(29/72)，所占比例最高(P<0.05)；Hb>60～70 g/L占27.78(20/72)；Hb>70～80 g，占16.67%(12/72)。上述72例受血者既往输血次数的分布：输血次数≥3次，占37.50%(27/72)，所占比例最高(P<0.05)；输血次数1～<3次，占33.33%(24/72)；输血次数为0，占29.17%(21/72)。输血疗效的分布：输注有效占79.17%(57/72)，输注部分有效的占15.28%(11/72)，输注无效的占5.56%(4/72)。DAT阳性类型的分布：单纯IgG型占91.67%(66/72)，IgG+C3d型占2.78%(2/72)，分型未果占5.56%(4/72)。

将上述72例受血者的DAT阳性标本行热放散试验后再进行抗体筛查，结果为全阴性的占79.17%(57/72)，全阳性的占15.28%(11/72)，抗体筛查有反应格局的占5.56%(4/72)。

3 讨 论

Coombs试验又称为DAT，是目前诊断贫血的主要方式，也是诊断AIHA最直接的证据之一。但是，在一些肾病、肝病、肿瘤患者行输血前相容性检测时，常常出现DAT阳性的现象。有资料表明，住院患者DAT阳性率高达8%，而健康人群的阳性率为0.1%[3]。本研究的2 066例不规则抗体阴性的受血者中，交叉配血次侧凝集的标本有72例，均为DAT阳性，DAT阳性率为3.48%，这与梅城等[3]的研究结果相近。本研究的72例受血者在不同Hb水平区间的分布有明显不同，其中Hb>50～60 g/L所占比例最高，与文献[4-5]的报道一致；有多次输血史者所占比例明显高于无输血史者，这可能与患者反复输血产生意外抗体或免疫功能受损有关。

导致DAT阳性的主要原因有红细胞固有抗原自身抗体、溶血性输血反应、胎儿及新生儿溶血性疾病、药物诱导的抗体、被动获得的同种抗体、非特异性吸附的蛋白、过客淋巴细胞产生的抗体以及由于细菌感染、自身抗体或同种抗体引起的补体激活[1]。尽管本研究中大部分的DAT阳性受血者输血有效，但输血部分有效及输血无效分别占了15.28%及5.56%，可见DAT阳性对临床输血治疗效果有一定的影响，应注意去除造成DAT阳性的因素，以保障贫血患者的有效输血[5]。

本研究中，DAT阳性分型以单纯IgG型为主(占91.67%)，这比文献[3-6]的报道稍高，分析原因：(1)血清中IgG水平较高且与自身抗原的亲和力强；(2)本研究中的血液病患者不多；(3)本研究中采用的抗人球蛋白卡仅能检测IgG和C3d，不能检测IgA、IgM。分型中未见单纯C3d型，因为单纯C3d型主要见于IgM性质的冷凝集素综合征，冷凝集素综合征常常影响抗体筛查结果[7]；而本研究纳入的人群主要是抗体筛查阴性而DAT阳性的患者。2例分型呈IgG+C3d型，均为反复输血的血液病患者。笔者分析，微柱凝胶法DAT快速而敏感，但也容易受免疫球蛋白等因素影响而致假阳性的出现，也可能与标本红细胞检测前未进行洗涤有关[8]。

本课题组对DAT阳性的标本进行热放散试验，发现79.17%的标本热放散试验呈阴性，说明这类受血者大多数为非AIHA患者。非AIHA患者的DAT阳性通常与血清球蛋白增高有关，常见于长期低清蛋白血症的患者。此类患者用微柱凝胶法配血时通常须结合聚凝胺法配血、DAT试验及抗体热放散试验结果，输注普通悬浮红细胞是安全有效的[9]。研究中有15.28%的标本热放散试验呈抗体筛查全阳性，这种现象最常见于自身抗体阳性的患者。自身抗体是由于机体免疫调节功能紊乱而产生的，此类患者配血时微柱凝胶法及聚凝胺法均会出现次侧凝集，但凝集强度均弱于DAT的凝集强度。DAT分型及热放散试验有助于分析DAT阳性的原因，若放散液只检出自身抗体，并且患者近期没有输血，就没有必要做深入的血清学检查[1]。但须重视此类自身抗体导致DAT阳性的原因，及时查找并去除病因，才能让输血治疗更有效。有研究中有5.56%的受血者放散液抗体筛查有反应格局，尽管由于放散液太少未能进行抗体鉴定，但却证明了同种抗体存在的可能性。放散液抗体筛查有格局的4例患者中，有3例为反复输血的血液病患者，他们的不规则抗体筛查一直呈阴性，DAT却从原来的阴性转变成阳性。当受血者体内产生的免疫性抗体数量较少，就可能都被吸附到受血者的红细胞上，导致血清中无法检测到，但能通过热放散试验检测到。也就是说，DAT阳性标本通过热放散试验可以发现血清中没有的抗体，在给此类患者输注红细胞制品时，应当避开这些抗体相应的抗原，否则输血可使患者溶血反应加重[10]。

综上所述，对于不规则抗体阴性而DAT阳性的受血者，尤其是一些有反复输血史的、DAT由阴性转为阳性的患者，最好能进行DAT阳性类型鉴别，并结合患者的临床情况进行全面分析，从而为临床输血治疗方案提供依据，提高输血的安全性及有效性。