临界血红蛋白A2人群的β地中海贫血检出情况▲

周亚丽 李平萍 杨 焜 吴 懿 罗钢慧 尹晓林 周天红

(中国人民解放军联勤保障部队第九二三医院1 血液科，2 检验科，广西南宁市 530021，电子邮箱：252749070@qq.com)

地中海贫血是我国南方最常见的遗传性疾病，其中β地中海贫血在广西地区的发生率高达6.4%[1]。当夫妻双方都是β地中海贫血基因携带者时，其后代患重型或中间型β地中海贫血的概率为25%。因此，需要进行产前的地中海贫血相关诊断，以便判断是否需终止妊娠，减少新生儿出生缺陷；同时在妊娠前进行β地中海贫血有效筛查，进而对高危夫妻采取预防重型或中间型β地中海贫血儿出生的措施，也是极为关键的环节。

血红蛋白A2(hemoglobin A2，HbA2)由2个α珠蛋白和2个δ珠蛋白组成，其升高是β地中海贫血患者的特征性指标，正常人群HbA2水平在2.2%～3.3%范围内，典型的β地中海贫血基因携带者其HbA2水平在4.0%～6.0%范围[2]。检测HbA2水平通常可用于诊断β地中海贫血基因携带，但也存在少数人群的HbA2水平介于正常人群和地中海贫血基因携带者之间，称之为“临界状态”的HbA2值，这给临床诊断带来一定困惑。曾有国内学者报告，165例HbA2在3.3%～4.0%范围内的研究对象中，有4例为β地中海贫血[3]。这提示在临界HbA2受检者中存在部分β地中海贫血基因携带者。而关于广西临界HbA2人群的β地中海贫血的检出情况，仍缺乏大样本研究。故本文回顾性分析在我院行地中海贫血相关检测的受检者的临床资料，以探索临界HbA2人群的β地中海贫血检出情况，为在本地区β地中海贫血筛查中减少漏诊提供参考。

1 资料与方法

1.1 临床资料 纳入2011年1月至2019年12月在我院进行地中海贫血筛查和基因检测且HbA2水平处于临界值的受检者。纳入标准：(1)为广西地区的市、城、镇、乡常住人口(居住半年以上时间判断为常住人口)；(2)地中海贫血基因检测资料完整。排除标准：(1)在地中海贫血筛查的前3个月内接受输血者；(2)合并有严重心、肝、肾等重大器官疾病；(3)合并呼吸、循环、代谢等功能紊乱性疾病。最终纳入3 203例受检者，其中男性1 342例、女性1 861例，年龄18～45(28.95±8.17)岁；HbA2在>3%～3.5%范围共2 199例(68.65%)，HbA2在>3.5%～4.0%范围共1 004例(31.35%)。

1.2 HbA2临界值定义 鉴于正常人群HbA2水平在2.2%～3.3%，典型的β地中海贫血基因携带者HbA2水平在4.0%～6.0%范围内，本研究将HbA2在>3%～4.0%范围内定义为临界值。

1.3 检测方法

1.3.1 标本采集：受检者均在体检当日早晨抽取外周静脉血3 mL，置于真空抗凝管内(购自BD公司)，上下颠倒5～8次充分混匀，送至检验科。

1.3.2 血常规检测：使用美国贝克曼公司GA800全自动血细胞分析仪及配套试剂测定平均红细胞体积(mean corpuscular volume,MCV)；采用日本SHIMADZU公司LC-2010HT高效液相色谱仪测定HbA2水平，检测试剂购自赫澎(上海)生物科技有限公司(批号：HPBIO-JM8438)。HbA2正常参考值为2.2%～3.3%；MCV正常参考值为80～100 fL，将MCV<80 fL定义为阳性。

1.3.3 基因型检测：采用广州凯普医药科技有限公司提供的试剂(批号：201013)，应用PCR-反向斑点杂交法检测中国人群常见17种β珠蛋白的基因突变情况，其检测位点主要包括CD41-42(-TCTT)、IVS-2-654(C→T)、-28(A→G)、CD71-72(+A)、 CD17(A→T)、βE(CD26 G→A)、CD31(-C)、CD43(G→T)、-32(C→A)、CD27-28(+C)、-29(A→G)、-30(T→C)、CD14-15(+G)、CAP+40-+43(-AAAC)、Int(ATG→AGG)、IVS-1-1(G→T)、IVS-1-5(G→C)。

1.4 统计学分析 采用SPSS 17.0软件进行统计分析。计数资料以例数及构成比表示，组间比较采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 β地中海贫血检出情况 在3 203例HbA2处于临界值的受检者中，β地中海贫血检出率为12.33%(395/3 203)。HbA2>3.0%～3.5%、HbA2>3.5%～4.0%的受检者中，β地中海贫血检出率分别为4.23%(93/2 199)、30.08%(302/1 004)。

2.2 不同MCV水平HbA2临界值受检者中β地中海贫血的检出率比较 3 203例受检者中，MCV<80 fL共1 542例，MCV≥80 fL共1 661例。HbA2在3.0%～3.5%间且MCV<80 fL的受检者β地中海贫血检出率为10.08%(88/873)，高于HbA2在3.0%～3.5%间且MCV≥80 fL者的0.38%(5/1 326)(χ2=122.367，P<0.001)；HbA2在3.5%～4.0%间且MCV<80 fL的受检者β地中海贫血检出率为43.80%(293/669)，高于HbA2在3.0%～3.5%间且MCV≥80 fL的2.69%(9/335)(χ2=179.374，P<0.001)。

3 讨 论

β地中海贫血需根据地中海贫血基因检测予以确诊，但基因检测前一般会先进行地中海贫血筛查，包括血常规、血红蛋白分析等，筛查结果阳性者再进行地中海贫血基因检测。探讨临界HbA2者中β地中海贫血的检出情况，将有助于指导临床对β地中海贫血判断，降低β地中海贫血的漏诊率。

不同文献报告临界HbA2者β地中海贫血发生率存在较大差异[4-5]，其发生率主要与检测手段、临界HbA2定义、受检人群β地中海贫血发生率等因素有关。结果显示，处在临界HbA2的受检者中，β地中海贫血检出率为12.33%，远高于意大利学者报告的1.3%～1.68%[6-7]，而与泰国学者报告的13.7%相接近[8]。造成结果存在较大差异的原因可能有：(1)HbA2临界定义不同，意大利学者[6-7]将HbA2临界定义在3.3%～4.1%，与本研究存在差异；(2)HbA2检测手段不同，高效液相色谱法和毛细管电泳HbA2的检测结果存在一些区别，同一标本高效液相色谱法的检测值要略高于毛细管电泳[9]。HbA2处于临界者存在一定比例的β地中海贫血患者的原因可能有：(1)受检者为轻型β地中海贫血，甚至仅仅为“静止型”β地中海贫血基因突变[10],对HbA2影响不大；(2)部分受检者合并缺铁性贫血或是使用抗病毒药物，影响HbA2的合成[11]，导致HbA2水平较低；(3)受检者可能存在KLF基因突变[11]，导致HbA2不受影响；(4)合并δ型地中海贫血，可能导致HbA2本身水平下降[12]。因此，为避免漏诊，对于HbA2处于临界值的个体，不应被排除β地中海贫血，尤其是在婚前、孕前检查，更应定义为筛查阳性为宜，以便进一步行β地中海贫血基因筛查，减少中间型甚至重型β地贫患儿出生。

在本组3203例HbA2处于临界值的受检者中，HbA2>3.0%～3.5%的受检者β地中海贫血检出率仅为4.23%(93/2199)，而HbA2>3.5%～4.0%的受检者β地中海贫血检出率高达30.08%，明显升高。Rangan等[13]采用高效液相色谱法检测HbA2，在25例临界HbA2者(HbA2均为3.5%～4.0%间)中有8例为β地中海贫血，占比为32.0%，这与本研究结果相近。因此，对于临界HbA2者，筛查β地中海贫血时或可将HbA2为3.5%～4.0%者判断为可疑阳性，需进一步行基因检测。但具体的诊断截断值还有待进一步研究以明确。

此外，本研究结果显示，无论是在HbA2>3.0%～3.5%的受检者中还是在HbA2>3.5%～4.0%的受检者中，MCV<80 fL者的β地中海贫血检出率均高于MCV≥80 fL者(均P<0.05)。这提示在婚前、孕前的地中海贫血筛查时，若发现受检者的HbA2处于临界值，且MCV<80 fL，应强烈建议该个体进行地中海贫血基因检测，这对防治地中海贫血及防止重型地中海贫血患儿出生具有重要意义。

综上所述，以高效液相色谱法进行HbA2检测时，临界HbA2者中占有一定比例的β地中海贫血患者，尤其是HbA2在>3.5%～4.0%的患者，建议进一步行基因检测；此外，可结合MCV水平以提高诊断准确率，对于MCV<80 fL的临界HbA2个体，应高度怀疑β地中海贫血。本研究属于回顾性分析，且为单中心研究，结果可能存在误差，今后仍需进行前瞻性和多中心研究以验证所得结果。