贵长猕猴桃散粉规律及花粉活力研究※

●贺兴江 任晓晓 周文才 万 炜 韦小平※※ 王胤晨

（1.贵州省农业科学院现代农业发展研究所 贵州 贵阳 550006；2.贵州省农业科学院蚕业研究所 贵州 贵阳 550006；3.贵州省农业科学院畜牧兽医研究所 贵州 贵阳 550006）

猕猴桃属猕猴桃科（Actinidiaceae）猕猴桃属（Actinidia）植物，多年生藤本果树，果实风味独特、营养丰富、经济价值高。鲜果维生素C含量比普通水果高几倍甚至几十倍，还含有丰富的维生素B1、B2、E 及多种矿物质和氨基酸，因其具有丰富的营养和极高经济价值而广受关注，推广栽培面积日益增大[1-2]。贵长猕猴桃由原贵州省果树研究所从紫云县野生猕猴桃中选育，是目前贵州省猕猴桃的主栽品种[3-4]。

猕猴桃为雌雄异株植物，天然授粉坐果率极低，需要进行人工授粉以保证猕猴桃的产量和品质。前人对猕猴桃授粉开展了较多的工作，研究表明，在授粉过程中不同的花粉来源[4-5]、授粉时间[6]、授粉花柱数[7]对猕猴桃的产量和质量都有影响。研究还发现，不同来源猕猴桃雄株的花粉[8-10]在数量、形态、活力等方面都存在差异，前人在优良雄株的选育方面也做了大量工作[11-13]，发现不同采粉时期和储存条件[14]以及采集后花药的处理方法[15]对花粉的质量都有影响。然而，有关猕猴桃整个单花期散粉规律以及花粉活力变化的研究罕有报道。鉴于此，本研究选择贵州省猕猴桃主栽品种贵长猕猴桃作为实验材料，研究其单花期散粉规律及花粉活力变化，并采集开花当天自然脱落的花粉，对比不同保存条件和时间对花粉活性的影响，以期为合理采集利用、保存花粉提供数据支持。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

1.1.1 仪器生物显微镜（重庆奥特SMART）；冰箱（海尔BCD-510WDEM）；漩涡振荡器（其林贝尔vortex-5）；移液枪（北京大龙）；恒温干燥箱（恒辛XMA-600）。

1.1.2 试剂六偏磷酸钠（赞璐桐；分析纯）；蔗糖（天旭；分析纯）。

1.2 试验方法

1.2.1 样品采集试验材料于2019 年采集自贵州省修文县猕猴桃种植区。于盛花期选择3 株雄株，自5 月12 日至15 日，连续4d 标记当天开放的花朵（30 朵/株），标记时间为每天上午9 时，5 月15 日上午9 至10 时采集被标记的处于不同花龄的花药，从花龄相同的每朵花上用小剪刀剪取5 只花药置于2mL 离心管中，其余花药放入50mL 离心管中。每10 朵花为1 个样，每株雄株取3 个样。2mL 离心管装的花药用于测定花粉数量，计算散粉规律；50mL 离心管装的花药用于测定花粉活力。同日上午9 至10 时，随机选取当日开放的花朵，每株取6 个样，每个样20 朵花，花粉收集在50mL 离心管内，用于研究不同保存条件、保存时间对花粉活性的影响。

1.2.2 不同花龄花粉数量和活力测定试验材料为不同花龄的雄花花粉，设置5 个处理。-1D：开花前1d（大蕾，有1～3 片花瓣现展开迹象）；0D：开花当天；1D：开花后1d，2D：开花后2d；3D：开花后3d。每个处理重复3 次。分别测定每个处理的花粉数量和花粉活力。

1.2.3 不同保存条件对花粉活力的影响试验材料为当天开花的雄花花粉，设置室温保存和4℃保存两个处理。 将花粉样品等分为两组，一组放置在实验台上室温（温度：20～24℃；相对湿度：13%～23.3%）保存；另一组放置于冰箱冷藏室（4℃）保存。自采集当天起，每天检测一次花粉活性，连续检测6d。

1.2.4 花粉数量测定参照王斯妤等[10]、辛董董等[16]方法，将2mL 装的花药样品（每个样50只花药），放置于50℃恒温干燥箱中，干燥4h。花粉全部散开后加入一定体积的200g/L 六偏磷酸钠溶液，在漩涡振荡器上振荡混匀成悬浮液，用移液枪吸取5μL 悬浮液滴在细胞计数板上，用生物显微镜（10×40 倍）进行观测，统计花粉量，公式为：

1.2.5 散粉量与散粉比例计算

计算散粉比例时以开花前1d 的花粉数量为花粉总量。

1.2.6 花粉活力测定采用离体萌发法测定花粉萌发率，以萌发率代表花粉活力。培养基为15%的蔗糖溶液[17-19]，用胶头滴管滴1～2 滴培养基置于载玻片中央，用棉签蘸取一定量的花粉置于培养基正上方，轻轻抖动棉签使花粉洒落在培养基表面。培养条件为室温，以20～24℃为宜。将播种后的载玻片置于垫有双层湿滤纸的泡沫箱中进行黑暗培养，24h 后镜检，花粉管长度超过花粉粒直径1倍的视为花粉萌发，计算萌发率。

萌发率=视野中萌发花粉数／总花粉数×100%。

1.3 数据分析

运用EXCEL 和SPSS17.0 对试验数据进行描述统计、差异显著性检验，对猕猴桃散粉规律和花粉活力进行分析。

2 结果与分析

2.1 不同花龄花粉数量比较

经试验测定发现，贵长猕猴桃花粉量随开花时间的延长而减少，散粉量在开花前3d 逐日增加。如表1 所示，开花前1d 花粉量为15 222.22粒/花药，开花后花粉量开始减少，开花1d 后花粉数量显著减少（P＜0.01）。散粉量随开花时间增加，但散粉比例较低，从开花到采集样品期间散粉比例为5.96%，开花后1d 的散粉比例也仅有13.50%。至开花后的第3 天（花药开始自然脱落），每个花药的花粉量高达5 037.04 粒，接近总花粉量的30%。

表1 散粉规律

2.2 不同花龄花粉活力比较

由图1 可以看出，猕猴桃开花前1d 与开花当天的花粉活力最高且没有显著差异，开花后, 花粉活力随开花天数的增加而显著降低（P＜0.01）。开花后第3 天，花药开始自然脱落，花粉萌发率下降到3.75%。

2.3 不同保存时间及保存条件对花粉活力的影响

图2 显示，当天采集花粉的萌发率达到52%以上，离体花粉活力随保存天数的增加而降低，但保存在不同条件下的花粉，萌发率降低的速率有所不同，4℃条件下保存有利于维持花粉活力。室温保存1d 花粉萌发率降低为48.60%，与采集当天无显著性差异，但是保存2d 及以上的花粉萌发率大幅度降低，保存5d 的萌发率仅为3.18%。4℃保存1d 的花粉萌发率为42.67%，较采集当天显著降低，而保存2d、3d 的花粉萌发率分别为41.67%、38.14%，与保存1d 的花粉相比，萌发率有不同程度的降低，但未达到显著水平，保存5d 的花粉萌发率为21.76%。

3 讨论

试验结果显示，贵长猕猴桃每个花药的花粉量为15 222.22 粒，与齐秀娟等[8]的研究结果相符，但与王斯妤等[10]的研究结果差异较大。开花后开始散粉，但单位时间散粉比例较低，从开花到采集样品期间散粉比例为5.96%，开花后1d 的散粉比例也仅有13.50%，甚至到开花后的第3 天每个花药的花粉量仍然高达5 037.04 粒，接近总花粉量的30%。这可能是因为猕猴桃访花昆虫少等原因造成的，这可能导致猕猴桃在自然条件下坐果率低的原因之一。花粉活力测定结果显示，开花前1d 与开花当天的花粉萌发率接近52.00%，开花后随时间的延长花粉活力逐渐降低，与陈永安等[14]的研究结果相似，但他们仅观察了开花后24h 内的变化；开花后第3 天花粉萌发率急剧降低为3.76%，镜检过程中发现培养基上生长了菌丝，这可能是导致花粉活力急剧下降的原因。

花粉活力随保存时间的增长而降低，但不同条件保存的花粉活力变化差异较大，相比室温，4℃条件更有利于维持花粉活性，结果与陈永安等[14]的研究结果一致。

综上，建议贵长猕猴桃采集开花当天的花朵分离花粉用于授粉，最好当天采集当天使用。若遇花粉不足时，也可以选择采集开花后1d 的花朵分离花粉用于授粉，其单花药花粉量为12 259.26 粒，萌发率为38.37%，可以满足授粉需求。如当天花粉未使用完，适宜选择4℃条件保存，保存时间越短越好，勿使用保存超过3d 的花粉，以免造成不必要的损失。