错配修复蛋白在结直肠癌中的表达及临床病理学意义研究

陈东，张丹凤，赖燕妮

（广东省兴宁市人民医院，广东 兴宁 514526）

0 引言

结直肠癌属于临床常见的一种恶性肿瘤，具有较高发病率及病死率，随着人们饮食、生活习惯的改变以及人口老龄化加剧等因素，导致该疾病发病率与病死率呈增高趋势[1-2]。在早期时，该疾病主要临床表现为患者排便发生改变，如大便时出血等，难以引起患者重视，随着病情逐渐发展，患者容易出现黏液血便、下腹疼痛等问题，一旦患者未得到有效、合理治疗，则会危及到患者生命安全。现阶段中，临床认为结直肠癌的形成途径有两种，即MSI（微卫星不稳定）与CIN（染色体不稳定），其中CIN 途径占比率较高，主要是因MCC、APC、p53 及DCC 等抑癌基因及RAS 等部分癌基因突然发生变化，受多因素共同发生作用前提下，在不同的阶段诱发所致；而MSI 是由于MMR 基因缺陷所造成的[3-4]。鉴于此，本研究以我院60 例结直肠癌患者为例，目的是为了分析MSI 的表达情况以及其与临床病理之间关系，现展开具体分析与汇总。

1 资料与方法

1.1 一般资料

以回顾性分析法对2019 年1 月-2020 年10 月广东省兴宁市人民医院就医的60 例结直肠癌患者病理资料进行分析，其中男33 例，女27 例，年龄22～79 岁，平均（52.7±6.5）岁。本研究入组对象均满足WHO结肠癌组织病理学分类诊断标准，均为原发性结直肠癌，所有切片由我院2 位副高职称以上的病理医师进行复诊，患者及其家属经临床医师详细讲解本研究内容后，同意参加研究，并签署相关同意书，术前未接受过放疗、化疗及免疫治疗者。排除复发性结直肠癌者、家族性腺瘤性息肉病者。

1.2 方法

以中性甲醛液（浓度为4%）对标本实施固定处理及脱水剂石蜡包埋处理，经持续予以切片处理后，使用苏木精-伊红染色和免疫组织化学Envision 法进行染色，之后对石蜡切片实施脱蜡处理与水花处理，并使用pH 值达7.4 的PSB 实施浸泡处理与冲洗处理；以H2O2（浓度0.3%）的封闭内源性过氧化物酶，使用PSB 浸洗后，加入一抗物质（PMS2、MLH1、MSH6、MSH2），于室温下实施抚孵育，并将生物素标记二抗及过氧化物酶溶液于室温下实施孵育处理，利用DAB 进行显色，借助苏木素进行复染，最后予以常规脱水处理、透明处理与封片处理。对于胫骨检测的每张切片，需以正常结肠黏膜上皮（或浸润淋巴细胞）作为阳性对照，并使用PBS 来替代一抗，将其作为阴性对照。

1.3 指标观察及判定标准

统计MSI 具体表达情况与患者基础资料、临床病理的关系。由于MMRP 中的MSH2、MSH6、MLH1及PMS2 位置都在细胞核，故而以半定量积分法来测定。①阳性细胞百分比为0 分，表示无阳性细胞；为1 分，则≤10%；为2 分，则在11%～50%；为3 分，则在51%～80%；为4 分，则>80%；②染色强度：分为4个阶段，其中0 分代表无色；1 分代表浅黄色；2 分代表棕黄色；3 分代表棕褐色。所得积分进行相乘处理后，若得分显示为0 分，则表示蛋白呈缺失状态；若得分显示1 分，则表示蛋白呈低表达状态；若得分>2 分，则表示蛋白呈阳性，其中蛋白缺失与蛋白低表达均当作阴性。将在MMRP 中表达若缺失1 种及1 种以上的设为MSI 组。

1.4 数据处理

本文数据以SPSS 23.0 分析，分别以%与t值代表计数资料与计量资料，以χ2与（）进行检验，P<0.05 显示存在统计学意义。

2 结果

2.1 分析MSI表达情况与结直肠癌患者基础资料的关系

由表1 可知，MSI 与患者的年龄有关（P<0.05），与患者性别无关（P<0.05）。

表1 分析MSI表达情况与结直肠癌患者基础资料的关系[n（%）]

2.2 分析MSI表达情况与结直肠癌患者临床病理关系

由表2 可知，MSI 与患者肿瘤直径、临床分期、淋巴结转移有关（P<0.05）；与患者浸润深度、远处转移无关（P>0.05）。

表2 分析MSI表达情况与结直肠癌患者临床病理关系[n（%）]

3 讨论

结肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，好发于中老年群体当中，其发生与遗传、环境等因素有密切关联，具有较高病死率与发病率[4]。在疾病早期时，患者无显著临床症状存在，随着疾病加重，可累及四周组织，促使患者发生肠梗阻等症状，临床表现为隐痛、腹胀、呕吐等，严重影响到患者机体健康与生命。在临床上主要采取根治性手术方式，通过将患者病灶切除，并结合放疗、化疗等辅助治疗方式来控制患者病情。故而，尽早诊断予以诊断治疗，可有效改善其症状，减少病死风险的同时，还能够起到改旱患者预后的作用[5-6]。虽然大多数早期结直肠癌患者可得到5 年的生存率，然而若患者属于转移性直肠癌，那么其5 年生存率较低，可见在结直肠癌患者出现死亡的原因中，主要原因是转移，故而深入研究结直肠癌疾病的发病机制，有利于临床对该疾病及早进行诊断、治疗及预防。

结直肠癌疾病的发生，是涉及到多个基因改变与多步骤累及的一个过程，在结直肠癌的发生中，基因不稳定起着重要意义，其中MMR 功能障碍则是其发生的一项重要机制。近年来，基于临床深入研究MMR 基因多态性发现，其能够造成相应DNA 修复蛋白数量与活性发生改变，故而对于肿瘤敏感性较高；有研究显示遗传性非息肉病性结直肠癌是因为DNA中MMR 基因胚系突变，而造成DNA 错配修复系统功能发生缺陷，导致微卫星DNA 复制错误累积，从而形成肿瘤。DNA 错配修复系统是由一系列特异性修复DNA 碱基错配酶组成，主要功能是对DNA 复制期间所出现的错配情况进行修复，如单碱基错配与2 个以上插入/缺失错配，继而确保遗传物质稳定性与完整性，防止其出现突变。而碱基-碱基发生错配，主要对非重复DNA 序列造成影响，最终造成单碱基错配，以DNA 复制错误为主要表现。一旦形成插入-缺失环，会对DNA 重复序列造成影响，导致短序列插入或者缺失，也可表现出微卫星插入或者缺失，以微卫星不稳定为主。在结直肠癌检测中，可将MMR功能缺陷作为一种初筛方法，与此同时也可通过筛选出的MMR 功能缺陷用于选择疾病化疗方案与判断预后效果。

MSI 指的是相较于正常组织，脑瘤中某个微卫星DNA 因重复单位缺失或者插入而导致微卫星长度发生改变，有新微卫星DNA 等位基因现象存在[7-8]。MMRP 属于一种核酶，参与修复增殖细胞DNA 复制产生的错配碱基，若其出现缺失现象，则将造成DNA错配发生聚集，进而产生MSI。而MMRP 和细胞生长、凋亡及基因突变等有关，在DNA 的合成中，若出现保真度丢失，将会对结直肠癌疾病发生与发展造成影响。当MMR 系统参与到DNA 修复过程中时，所参与的分子与酶较多，其中主要参与者有MSH2 及MLH1，通常情况下，他们会与同源性的MMR 蛋白构成一个二聚体来发挥作用，而MLH1 和PMS2、MSH6 及MSH2 则分别形成了功能性的二聚体复合物[9-10]。在二聚体中，MLH1 与MSH2 是其主导蛋白，而PMS2与MSH6 则是其配对蛋白，若前者发生突变，则有可能造成二聚体蛋白出现降解现象，进而使得主导蛋白及配对蛋白的表达缺失。若MLH1 蛋白表达存在缺失，那么则伴随着PMS2 蛋白表达缺失，同样的若MSH2蛋白表达缺失，也会导致MSH6 表达缺失，由此可见MLH1 与MSH2 表达切缺失互相排斥，二者只能存在一种蛋白表达缺失[11-12]。本研究通过分析在结直肠癌疾病中MSI 表达与疾病临床病理间的关系，结果发现男性患者与女性患者MSI 表达阳性与阴性率差异较大（P<0.05）；而年龄>50 岁与≤50 岁患者MRI 表达阳性、阴性率差异较小（P>0.05），可见MSI 与患者的年龄有关，与患者性别无关；且MSI 与患者肿瘤直径、临床分期、淋巴结转移有关（P<0.05）；与患者浸润深度、远处转移无关（P>0.05），可见MSI 蛋白表达情况与疾病病例特征有关，有利于临床对遗传性结直肠癌疾病进行筛选。

综上所述，MSI 蛋白表达和结直肠癌疾病临床病理特征有密切关联，通过对MMRP 进行检查，可深入了解疾病特点，进而帮助临床早期确诊，从而制定出相应治疗方法，提高患者生存率。