高效液相色谱法应用于柏子养心丸中酸枣仁的质量控制

任 琦 徐 兰 游 媛 许 妍 万林春*

(1.江西省药品检验检测研究院，国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室，江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心，江西 南昌 330029；2.中国人民解放军联勤保障部队第九○八医院药学科，江西 南昌 330002)

柏子养心丸收载于2020《中国药典》一部，由炙黄芪、党参、川芎、当归、柏子仁、酸枣仁等十三味药组成。具安神、补气、养血之功效。用于失眠、多梦、健忘、心悸易惊等症[1-2]，方中酸枣仁具养心补肝、宁心安神、敛汗、生津之功效[3-4]，为中医临床首选的安神药[5]。由于具有良好的临床疗效和广泛的临床应用，导致酸枣仁需求量加大。而柏子养心丸现行标准仅有酸枣仁的显微鉴别，未对其特征性成分加以控制，难以有效控制产品质量[6]，且目前未见有关柏子养心丸中酸枣仁质量控制方面的报道。为了有效的控制产品质量，保证其安全性和有效性，本实验采用高效液相色谱法建立了柏子养心丸中的酸枣仁中特征性成分斯皮诺素的鉴别[7-12]，为科学评价及有效控制柏子养心丸的酸枣仁真实投料提供可靠方法。

1 仪器与试样

1.1 仪器

Agilent 1260系列(全自动)高效液相色谱仪，Chemstation化学工作站，DAD检测器(美国安捷伦公司)；Sartorius BSA 124S-CW电子天平(德国赛多利斯公司)；Sartorius BT 25S电子天平(德国赛多利斯公司)。

1.2 试药与样品

试药：斯皮诺素对照品(以92.4%计)中国食品药品检定研究院提供，批号：111869-201001；甲醇为色谱纯、水为Milli-Q制备的纯化水；冰醋酸为分析纯；其他试剂均为分析纯。

样品：柏子养心丸，具体样品信息见表1。

表1 样品信息

2 方法与结果

2.1 色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Waters Sunfire C18色谱柱，柱长为25cm，内径为4.6mm，粒径为5μm)；以甲醇为流动相A，以0.1%冰醋酸溶液为流动相B，按表1的规定进行梯度洗脱；检测波长为335nm；柱温为35℃；流速为每分钟1.0ml。理论板数按斯皮诺素计算应不低于4000。

2.2 溶液配制

对照品溶液的制备 取斯皮诺素对照品适量，精密称定，加50%乙醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备 取本品水蜜丸研碎；小蜜丸或大蜜丸剪碎，混匀，取本品约6g，精密称定，精密加50%乙醇25ml，置具塞锥形瓶中，称定重量，超声处理(功率：500W，频率：40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用50%乙醇补足减失的重量，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 检测波长的选择

因斯皮诺素在335nm处有最大吸收(见图1)，故试验采用了335nm作为检测波长。

图1 斯皮诺素吸收光谱图

2.3.2 流动相的选择

以甲醇为流动相A，以0.1%冰醋酸溶液为流动相B，按表2的规定进行梯度洗脱为佳。

表2 流动相梯度洗脱表

2.3.3 专属性实验

取缺酸枣仁的阴性对照样品，按2.2项下方法制成供试品溶液，结果表明阴性对照样品对本法无干扰，结果见图2～4。

图2 斯皮诺斯对照品HPLC色谱图

图3 柏子养心丸供试品HPLC色谱图

图4 缺酸枣仁的阴性对照样品HPLC色谱图

2.3.4 不同品牌的色谱柱耐用性考察

取同一供试品溶液按2.2项下方法制成供试品溶液，比较不同品牌的色谱柱，考察方法的耐用性。

按2.1项所述色谱流动相，取供试品溶液采用Agilent1260系列高效液相色谱仪分别使用Waters Sunfire C18色谱柱(柱长为25cm，内径为4.6mm，粒径为5μm)、资生堂CAPCELL PAK C18(250mm×4.6mm，5μm)、岛津 Intersil ODS-3(250×4.6mm，5μm)色谱柱进行分析，记录色谱图，结果见图5～7。

图5 Waters Sunfire C18色谱柱(250×4.6mm，5μm)

图6 资生堂CAPCELL PAK C18(250mm×4.6mm，5μm)

图7 岛津 Intersil ODS-3(250×4.6mm，5μm)

通过比较三个不同品牌的色谱柱所得色谱图，结果显示三个品牌的色谱柱分离效果均较好，因此本课题组选用了Waters Sunfire C18色谱柱进行了柏子养心丸指纹图谱研究。

2.3.5 空白溶剂试验

取50%乙醇，采用2.1项下色谱条件，进样20μl，记录色谱图。结果显示空白溶剂在色谱图中未出现与供试品溶液相应的色谱峰。

2.4 样品测定及结果

取本品5个生产厂家共10批柏子养心丸进行测定，结果4批柏子养心丸中B企业与C企业合计4批未检出斯皮诺素。

3 讨论

本文建立了高效液相色谱法鉴别柏子养心丸中的酸枣仁中特征性成分斯皮诺素。结果有两家企业酸枣仁投料不准确或投料量不足，导致采用高效液相色谱未检出斯皮诺素，提示生产厂家应严格执行国家药品标准和相应的GMP管理规定，加强药品生产与质量管理，保证药品质量安全有效。同时提示监管部门应加强对中成药制剂的监管力度。