血红蛋白含量与血红蛋白A2及基因检测在β地中海贫血诊断中的应用价值

黄晓彬，黄 欢，林佳燕，洪钦明

揭阳市榕城区妇幼保健计划生育服务中心检验科，广东 揭阳 522000

β-地中海贫血是一组由β 珠蛋白基因缺失或突变导致β 肽链合成障碍而引起的遗传性溶血性贫血［1］，在我国多发于广西、广东和四川等省［2］，目前临床尚无有效的治疗方法，仅能够通过输血维持生命。地中海贫血致死致残率高，给家庭和社会带来沉重的经济负担。因此，对新生儿、婚前检查、孕前检查及产检人群进行地中海贫血筛查和地贫基因诊断具有重要意义。基因诊断是确诊β-地中海贫血最可靠的诊断指标［3］，但耗时长、费用昂贵，在基层医院难以广泛开展，不能够及时有效的检出β 地中海贫血。国内外学者对血液学指标平均血红蛋白含量（MCH）［4］、血红蛋白A2（HbA2）［5］在地中海贫血筛查中的应用进行了单项研究，根据MCH 和HbA2 在机体的含量能够在一定程度上筛查出地中海贫血患者，但联合检测研究还鲜有报道。本次研究拟通过基因检测、MCH、HbA2、MCH 联合HbA2 对β 地中海贫血患者的筛查效能进行分析，具体报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018 年10 月—2019 年10 月在揭阳市榕城区妇幼保健计划生育服务中进行地中海贫血筛查和地贫基因诊断者为研究对象。纳入标准：（1）自愿接受基因检测、MCH、HbA2 检查；（2）临床依从性高；（3）病例资料完整。排除标准：（1）严重心、肝、肾等器质性疾病者；（2）妊娠妇女、肿瘤患者等；（3）其他血液学疾病患者。最后纳入136例，年龄9～40 岁，平均年龄（22.15±10.63）岁，男性50例，女性86例。本次研究经过医院医学伦理委员会审核批准。

1.2 方法

1.2.1 基因检测：采用深圳亚能生物技术有限公司的基因诊断试剂盒。采集清晨空腹12 h外周静脉血5 ml，枸橼酸钠抗凝，试剂盒提取基因组DNA，β 地贫基因分析采用反向点杂交技术，检测β珠蛋白基因突变位点。

1.2.2 MCH 检测：采用Sysmex XE2100 全自动血细胞分析仪进行检测。采集清晨空腹12 h外周静脉血5 ml，EDTAK2抗凝，标本采集后1 h内以3000转/min 进行分离，取上清液，全自动血细胞分析仪进行检测。MCH的正常参考值为27 pg～31 pg.

1.2.3 HbA2 检测： 采用美国BIO-RAD 公司生产的Variant 血红蛋白分析仪以及美国Helena 蛋白电泳分析仪进行检测。采集清晨空腹12 h 外周静脉血5 ml，肝素钠抗凝。采用毛细管电泳仪对外周静脉血进行血红蛋白电泳分析。质控品和标本检测按一起和试剂盒说明书步骤进行。成年男、女性HbA2的正常参考值为2.2%～3.5%，没有异常血红蛋白带出现。

1.3 观察指标

收集所有研究对象的人口学、基因检测、MCH 检测、HbA2 检测以及联合检测的结果，观察不同检测方法患者的阳性检出情况，计算诊断的敏感性、特异性假阳性率、假阴性率、约登指数。 灵敏度=真阳性例数/(真阳性例数+假阴性例数)×100%；特异度=真阴性例数/(真阴性例数+假阳性例数)×100%；假阳性率=假阳性例数/真阴性例数×100%；假阴性率=假阴性例数/真阳性例数×100%；约登指数=（灵敏度+特异度）-1。

1.4 统计学方法

数据采用IBM SPSS 25.0 软件进行统计分析。分类变量采用例数和百分比（%）表示，组间比较采用χ2检验。联合诊断采用受试者工作特征曲线（ROC）分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 基因检测、MCH、HbA2、MCH 联合HbA2 检测β 地中海贫血阳性率比较

136 例研究对象中基因检测阳性者84 例，阴性者52例。MCH、HbA2、MCH 联合HbA2 检测阳性率分别为94.0%、84.5%及98.8%，阳性率差异有统计学意义（P＜0.05），MCH联合HbA2检测阳性率较单一指标高，见表1。

表1 基因检测、MCH、HbA2、MCH联合HbA2检测β地中海贫血阳性率比较 例（%）

2.2 MCH、HbA2、MCH 联合HbA2 检测β 地中海贫血各指标比较

以基因检测为金标准，三种方法在灵敏度、特异度、假阳性率、假阴性率以及约登指数上差异均有统计学意义（P＜0.05），联合检测的灵敏度、特异度和约登指数均较单一指标检测高，假阳性率和假阴性率均较单一指标低，见表2。

表2 MCH、HbA2、MCH联合HbA2检测β地中海贫血各指标比较

2.3 MCH、HbA2、MCH 联合HbA2 检测β 地中海贫血的ROC曲线分析

以基因检测为金标准，MCH、HbA2、MCH联合HbA2检测β 地中海贫血的AUC 分别为0.820、0.779 和0.903，MCH 联合HbA2 检测β 地中海贫血的AUC 最大，诊断效能较单一MCH、HbA2 检测好，差异有统计学意义（P＜0.001），见表3。

表3 MCH、HbA2、MCH联合HbA2检测β地中海贫血的ROC曲线分析

3 讨论

地中海贫血是一组遗传性溶血性疾病，与珠蛋白基因缺陷使得血红蛋白成分比例失衡导致血红蛋白不稳定、红细胞破坏有关［6］。β地中海贫血是其中的一种常见类型［7］。目前尚无有效的治疗方法，只能通过输血维持患者的生命健康。而该病具有多种临床并发症，在青年时期患者可因并发症导致残疾和死亡，给家庭及社会带来沉重的负担。因此，婚前、产前地中海贫血的筛查工作需引起重视。基因检测是目前诊断地中海贫血的金标准，但基层医院缺乏基因检测开展的条件，一般需送至上级医疗单位进行检测，耗时长；同时基因检测成本高，在基层推广应用具有局限性。因此，探究采用临床和实验室指标对地中海贫血进行筛查，及时发现地中海贫血患者或基因携带者具有重要意义。

MCH 和HbA2 是地中海贫血常用的筛查指标之一［8-9］，但在检测过程中由于方法学和仪器等对两者的影响因素较多，单一指标检测对于地中海贫血筛查的意义不大，临床上较少单纯采用MCH 或HbA2 去讨论地中海贫血的筛查与诊断。联合检测是近年来常用的地中海贫血筛查策略，通过多指标的联合应用减少单一指标的不足，为基层医院缺乏基因检测情况下MCH 联合HbA2 用于β 地中海贫血诊断的临床应用提供科学理论依据。

本次研究中，MCH、HbA2、MCH 联合HbA2 检测阳性率分别为94.0%、84.5%及98.8%，三种方法检测阳性率差异有统计学意义，MCH 联合HbA2 检测阳性率高于单一指标检测，提示联合检测能够提高阳性检出率。地中海贫血的患者体内红细胞能够被珠蛋白链所黏附，导致红细胞对渗透溶解产生抵抗［10］，因此在临床检测中可导致漏检，而联合检测时HbA2 电泳检测能够减少这种黏附的影响，提高筛检的阳性率。此外学者研究［11］也发现，HbA2联合其他指标用于地中海贫血的筛查除了能够提高阳性筛查率，还能够有效的辨别地中海贫血的分型，为临床上筛查阳性后指导治疗提供助力。检验效能分析中，MCH 联合HbA2 检测的灵敏度、特异度、约登指数均较单一指标检测高，假阳性率和假阴性率较单一指标检测低，提示MCH联合HbA2 检测能够进一步提高筛检的灵敏度、特异度和准确性，具有较高的临床价值。虽然与基因检测相比仍有一定的差距，但仍较单一指标检测的效果好。小部分漏检患者可在临床实际操作中根据现有的标准适当进行放宽，可减少漏检的概率。此外，初筛判断为地中海贫血的患者中有一部分是由于缺铁性贫血所导致，因此在进行MCH联合HbA2 检测前还可以经过血清铁蛋白检测排除，从而降低β 地中海贫血的检测假阳性率［12］。ROC 曲线分析中，MCH、HbA2、MCH 联合HbA2 检测β 地中海贫血的AUC分别为0.820、0.779 和0.903，MCH 联合HbA2 检测β 地中海贫血的AUC 最大，联合筛查对于β 地中海贫血的诊断效能较单一指标检测好。在临床实践中应根据实际情况选择不同的筛查策略，特别是在经济成本受限又急需了解可能的患病可能性时，可应用MCH 联合HbA2 检测进行初筛，根据初筛结果再决定是否需要进行基因诊断。

综上所述，MCH、HbA2 在β 地中海贫血诊断中具有一定的应用价值，MCH 联合HbA2 检测可进一步提高β 地中海贫血的检出率，为提高人口质量减少重型地贫儿的出生提供科学理论依据。