川渝产黄连提取液颜色与有效成分相关性研究

冉继春，阳 勇，花 雷，吉光见稚代

(重庆市中药研究院，重庆400065 )

黄连为毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch.、三角叶黄连Coptis deltoidea C. Y. Cheng et Hsiao 或云连Coptis teeta Wall. 的干燥根茎[1]。化学成分主要为生物碱类[2]，具有抗菌、增强免疫等作用[3]。其主要产地有四川、重庆、云南等地[4]。黄连作为传统名贵中药，有着广泛用途和开发潜力[5]。当前，中药性状评价，依然是老药工通过主观经验判断来鉴别，评价结果会受到感观差异和检测环境的影响，客观性和准确性难以保证[6]。黄连历来都有色黄者更佳的说法。在前期研究中发现，确与生物碱含量具有一定相关性[7]。该研究采用现代测色技术[8]将黄连提取液的颜色转换成数字化表达，结合其成分含量，进行相关性分析，探寻颜色评价的数字化方法。

1 材料

1.1 仪器

CM-5 型分光测色计（日本柯尼卡美能达控股公司）；LC-20A 型高效液相色谱仪（日本岛津公司）。

1.2 药品与试剂

盐酸小檗碱对照品（批号：110713-201814，中国食品药品检定研究院，纯度：86.7%）；磷酸二氢 钾（ 批 号： P1040499，GENERAL-REAGENT）；十二烷基硫酸钠（批号：P1194208，GENERALREAGENT）；磷酸（批号：201907050，KESHI）；甲醇（批号：20190701，重庆川东化工）；无水乙醇（批号：20200101，重庆川东化工）；水为一级水。产自四川、重庆的黄连药材18 批，经本院吉光见稚代研究员鉴定均为毛茛科植物黄连的干燥根茎。详见表1。

表1 黄连药材来源Tab. 1 Sources of Coptis chinensis Franch.

2 方法与结果

2.1 黄连提取液色度测定方法

2.1.1 测定条件 采用分光测色计，液体测量，观察光源为D65 透过光，观察视角10°，起止波长：360 ～740 nm，每个样品测定3 次后取平均值。

2.1.2 供试品制备 黄连药材 55 ℃干燥 8 h ，打粉，过50目药筛，称取黄连粉末0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 g，各三份，粉末分别用100 mL 无水乙醇、甲醇、一级水溶解，超声提取30 min，离心10 min（8 000 r/min），取上清液测定色度值。

2.1.3 色度检测方法筛选 色度测定同一提取液的3 个指数中，a*值最小，b*次之，L*最大。由此得知，在色调上黄连提取液颜色是以黄色为主，所以选择b*值作为色度的主要参考值。当浓度为0.3 g/100 mL时，颜色b*值趋于饱和稳定，之后随浓度增加颜色值趋于稳定。由表2 可知，采用无水乙醇提取线性相关程度最好，所以选择0.3 g/100 mL 无水乙醇来提取黄连，测定其色度值。

表2 不同溶剂色度值结果分析Tab. 2 Analysis of chromaticity values of different solvents

2.1.4 色度检测方法学试验

对黄连提取液，采用“2.1.3”项下筛选的颜色测定方法，进行色度检测精密度、重复性、稳定性实验，结果RSD 分别为0.07%、1.11%、1.55%，表明该方法的精确度、稳定性、重复性良好。

2.2 HPLC 含量测定方法

2.2.1 色谱条件、对照品溶液制备、供试品溶液制备

均参照《中国药典》黄连含量检测方法[1]。

2.2.2 线性关系考察 精密量取对照品溶液，配制成浓度分别为3.62、18.10、36.20、72.40、144.80、289.60 μg/mL 的系列溶液，按“2.2.1”项下色谱条件进样，绘制标准曲线，得到回归方程 Y = 72 750 X ＋50 986 （R2= 0.999 5），结果表明盐酸小檗碱在 3.62 ～289.60 μg/mL 范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.2.3 含量检测方法学考察 采用“2.2.1”项下色谱条件，进行精密度、稳定性、重复性、加样回收等试验，结果RSD 分别为0.33%、0.08%、0.96%、1.62%，表明该方法的精密度、重复性、准确度良好，且在12 h 内稳定。

2.3 黄连色度与含量检测结果

对18 批产自四川和重庆的黄连，采用“2.1.3”项下条件检测其色度值，“2.2.1”项下色谱条件，检测其含量值；结果发现颜色值与有效含量上差距较大，颜色b*值，范围在53.99 ～113.58 之间；主要成分盐酸小檗碱含量值4.13 ～8.01 之间。见表3。

表3 黄连提取液色度及含量值Tab. 3 The color and content of Coptis extract

2.4 黄连色度与含量相关性分析

采用SPSS 22.0 软件对18 批黄连提取液色度值与有效成分含量进行Pearson 相关性分析，测算出相关系数，其中盐酸小檗碱和黄连碱含量与L*值r = -0.626 1、-0.602 6，P ＜ 0.01；盐酸小檗碱和黄连碱含量与a*值r = 0.608 6、0.598 7，P ＜ 0.01；盐酸小檗碱、黄连碱、表小檗碱含量与b*值r = 0.668 8、0.865 3、0.778 9 ，P ＜ 0.01，巴马汀与b*值 r = 0.554 3，P ＜ 0.05；说明提取液的亮度颜色越亮盐酸小檗碱、黄连碱含量越少；颜色越红盐酸小檗碱和黄连碱含量的含量越高；颜色越黄，盐酸小檗碱、巴马汀、黄连碱、表小檗碱的含量越高。见表4。

表4 黄连提取液与有效成分之间的相关系数（n =18）Tab. 4 Correlation coefficient between Coptis extract and effective ingredients （n = 18）

3 讨论

该研究将现代仿生技术应用于黄连颜色的表达上面，黄连的主要成分是生物碱类，盐酸小檗碱和黄连碱在红、黄两个色度方向都呈显著相关，与亮度都呈显著负相关；巴马汀、表小檗碱在黄色方向有相关性；所以黄连提取液主要生物碱为偏暗的黄红色，进一步验证了传统鉴别经验的有效性。川渝两地是黄连药材的主产区域，该研究所得的实验规律对此药材具有代表性，该方法也可推广到其它中药材中。中药材的颜色是性状评价的基本条件之一，该研究为中药材颜色鉴别提供新的方法，也为《中国药典》的颜色描述提供参考，有利于中药材综合质量评价。该方法能更快速、准确对药材颜色进行检测，解决了以传统经验鉴别的“因人而异”问题，同时以数字化的方式将颜色进行阐述，工艺可复制性强。

4 结论

中药作为中华文化的传统历史瑰宝，对人类健康有重要影响，然而，中药不被国际社会认可，很大程度上是因为中药成分的复杂性，药效过程的整体、多元化，要解决这一问题，急需将传统经验转换为现代科学的表达方法。该研究为中药材质量评价提供新的参考方法，具有重要意义。对推进中药材颜色鉴别进入数字化进程，促进中药全球化起到积极作用。