血清人附睾蛋白4水平与宫颈癌患者临床特征的关系

穆建玲，姚昔艳

1北京中医药大学孙思邈医院（铜川市中医医院）妇产科，陕西 铜川 727100

2泾阳县医院妇产科，陕西 咸阳 713700

宫颈癌发病率居全球女性恶性肿瘤第二位，严重威胁女性生命健康。高危人乳头瘤病毒（human papilloma virus，HPV）持续感染是主要病因，此外，人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）感染、口服避孕药、初次性行为年龄过小和性伴侣过多均是宫颈癌的高危因素。宫颈癌病因的明确也极大促进了宫颈癌筛查方法的变革。目前，宫颈癌筛查方法已由形态学向分子生物学转变，高危型HPV检测和液基细胞学检查是最常见的筛查手段。研究表明，组织筛查可有效提高早期诊断宫颈癌的准确度，而简单、精准、高效、快速、易用的筛查方法可接受程度高，更受患者欢迎。人附睾蛋白4（human epididymis protein 4，HE4）是近年来新发现的肿瘤标志物，特异性表达于宫颈、卵巢等上皮，用于宫颈癌、乳腺癌的诊断效果较好。因此，本研究探讨宫颈癌患者血清HE4水平，及其与患者临床特征的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2013年6月至2016年6月在北京中医药大学孙思邈医院行宫颈癌筛查的患者。纳入标准：①既往未接受过手术；②病历资料完整；③既往没有接受放化疗、靶向治疗和激光治疗等。排除标准：①经活检病理学检查判定为非宫颈癌或非宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）；②临床分期不明确；③合并其他肿瘤；④合并慢性宫颈炎。根据纳入和排除标准，本研究共纳入80例宫颈癌患者和38例CIN患者。宫颈癌患者年龄30～67岁，平均（47.92±5.16）岁；绝经49例，未绝经31例；病理类型：鳞状细胞癌31例，腺癌32例，腺鳞癌17例；肿瘤直径：＜5 cm 59例，≥5 cm 21例。CIN患者年龄31～66岁，平均（46.89±5.31）岁；绝经25例，未绝经13例。同期选取在北京中医药大学孙思邈医院进行健康体检的36例健康者，年龄29～65岁，平均（47.43±4.92）岁；绝经 22例，未绝经14例。本研究经医院伦理委员会批准通过，所有患者均知情同意并签署知情同意书。

1.2 检测方法

所有受试者均在非生理期抽取清晨空腹静脉血3 ml，宫颈癌和CIN患者抽血前2 h不服用任何药物，健康对照组者在体检当天抽取血液标本。三组受试者抽取的血液标本于4℃恒温箱放置过夜，3000 r/min离心10 min分离血清，置于-20℃恒温箱中保存，所有标本均未出现黄疸、溶血现象。采用酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测HE4水平：将待测样本放置于室温，轻摇均匀，待结晶完全溶解后再配置洗涤液。将20 ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释配置成400 ml工作浓度的洗涤液。取出已在室温平衡1 h的样本，使用蒸馏水或去离子水将标准品浓度依次稀释为15、30、60、120、240、480 pmol/L等6个梯度，设置标准品孔和样本孔，每一标准品孔各放入稀释倍数不等的标准品50 μl。取10 μl待测样本置于样本孔，无需稀释，空白孔不加。然后在标准品孔和样本孔中每孔分别加入辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）标记的抗体100 μl，37℃恒温箱孵育60 min。然后弃残余液体，用吸水纸干燥三孔，使用配置好的洗涤液加满350 μl，等待1 min后弃掉，用吸水纸干燥三个孔，重复以上操作5次。操作完毕再往孔内滴加50 μl的底物显色剂A、显色剂B，遮光处理后置于37℃恒温箱15 min。温育后向3个孔内滴入50 μl的终止液，15 min内检测450 nm处标准品孔、样本孔及空白孔的光密度（optical density，OD）值。宫颈癌患者术后进行为期5年的随访，每3个月抽取静脉血1次，随访时间截至2021年6月。

1.3 统计学方法

采用SPSS 22.0软件对所有数据进行统计分析，呈偏态分布且方差不齐的计量资料以M（P，P）表示，两组间比较采用Wilcoxon秩和检验，多组间比较采用Kruskal-Wallis秩和检验；正态分布计量资料以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ检验；以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HE4水平的比较

宫颈癌患者血清HE4水平为268.91（248.34，302.65）pmol/L，明 显 高 于CIN患 者 的51.34（44.48，57.48）pmol/L和 健 康 对 照 者 的52.82（44.62，57.33）pmol/L，差异均有统计学意义（U=4.154、4.658，P＜0.01）；CIN患者与健康对照者血清HE4水平比较，差异无统计学意义（U=0.321，P=0.631）。

2.2 不同临床特征宫颈癌患者血清HE 4水平的比较

不同病理类型、肿瘤直径宫颈癌患者血清HE4水平比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。年龄≥50岁、绝经、有淋巴结转移、分化程度低、深肌层浸润、国际妇产科联盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）分期高的宫颈癌患者血清HE4水平更高，差异均有统计学意义（P＜0.05）。（表1）

表1 不同临床特征宫颈癌患者血清HE 4水平的比较（n=80）

2.3 不同预后情况宫颈癌患者血清HE 4水平的比较

对宫颈癌患者术后随访5年，病死69例（86.25%），生存11例（13.75%），病死患者血清HE4水平为341.82（259.81，440.51）pmol/L，明显高于生存患者的252.46（238.61，297.25）pmol/L，差异有统计学意义（U=4.381，P=0.000）。

3 讨论

研究显示，近年来浸润性宫颈腺癌及其变异型的发病率明显升高，尤其在年轻的女性人群中。早期治疗可降低病死率，明显改善患者的预后。早期诊断对宫颈癌患者的治疗和预后尤为重要，传统诊断如阴道镜检查、细胞学检测易受组织采集部位及检验人员的主观影响，漏诊、误诊难以避免。

近年来，随着临床对肿瘤标志物研究的不断深入，其对肿瘤筛查、早期诊断、疗效评估、预后及随访等方面的价值不断凸显，从生物化学角度来看，肿瘤标志物多为肿瘤细胞或某些发生非肿瘤性病理改变的细胞所产生和释放的特殊化学物质，通常为糖类抗炎、酶或激素等。肿瘤标志物在健康者中水平较低，而在肿瘤或非肿瘤性疾病患者中水平较高，早期宫颈癌影像学检查多无明显征象，但血液中的肿瘤标志物可能会出现高表达，因此，临床应高度重视并充分利用肿瘤标志物检测来优化宫颈癌的治疗。目前，多项研究指出，肿瘤标志物在肿瘤组织及癌旁正常组织中均有表达，既存在于肿瘤患者体液内，也可出现在健康者体液中，表达程度明显不同但又具有交叉和界限无法分辨的特点。在免疫学、分子学等学科的不断发展，多种宫颈癌相关的肿瘤标志物已被发现。鳞状细胞癌抗原（squamous cell carcinoma antigen，SCC-Ag）反映宫颈癌治疗应答情况，SCC-Ag水平升高往往先于临床症状，有助于早期诊断。常规检测SCC-Ag对临床症状体征发生前和疾病复发前的早期诊断有重要意义，但对宫颈腺癌和鳞腺癌的检测价值不高。HE4作为一种新型的卵巢肿瘤标志物，其检测价值已被临床广泛认可，与传统的卵巢癌相关肿瘤标志物糖类抗原125（carbohydrate antigen 125，CA125）相比，HE4的特异度（96.0%vs 84.0%）和灵敏度（90.0%vs 82.5%）更高，但二者联合检测可降低误诊率，CA125和HE4联合应用可被广泛推崇。

HE4是附睾蛋白的一种，空间结构主要由2个乳酸蛋白围绕4个二硫键组成，主要负责编码分子量较小的蛋白，可抑制丝氨酸的翻译过程，参与抵抗外来微生物入侵，并对细胞周期有一定调控作用。既往研究证实，HE4在正常组织中低表达，而在移行细胞癌等上皮性卵巢组织中的表达明显上调。本研究结果显示，宫颈癌患者血清HE4水平明显高于CIN患者和健康对照者。有研究显示，健康对照者血清HE4水平会随月经周期的波动而波动，绝经后的子宫内膜癌患者血清HE4水平相对更高。表明血清HE4水平直接受性激素的影响。而在妊娠和非妊娠患者中，雌二醇等孕激素的分泌会适当激活HE4蛋白的表达翻译，这可能是绝经患者HE4高表达的原因。血清HE4水平可能与宫颈癌患者的病理类型、组织学分级和FIGO分期有关，这可能是因为HE4可促进血管内皮因子生成，引起基质金属蛋白酶的翻译和表达，病灶周围血管生成，组织基质降解，刺激肿瘤细胞生长的同时增强其异质性和侵袭能力，更易发生肿瘤细胞转移。

近年来，中国依据HE4检测值建立了卵巢恶性肿瘤风险参考标准，在临床检验的HE4参考值范围中，若依据电化学发光检测法，40～49岁健康女性的血清HE4水平为0～76.2 pmol/L，50～59岁为0～74.3 pmol/L，≥60岁为 0～104.0 pmol/L。本研究结果显示，宫颈癌患者平均年龄（47.92±5.16）岁，血清HE4水平为268.91（248.34，302.65）pmol/L，提示盆腔肿块恶性。HE4水平能准确进行卵巢癌风险分层，识别全部患有卵巢癌盆腔包块患者，FIGO分期为Ⅳ期的患者HE4水平最高。对于肿瘤浸润程度更深的患者，HE4特异度更高，水平也更高，可以用于肿瘤浸润深度的鉴别诊断，HE4＞260 pmol/L时，提示肿瘤浸润至深肌层，能有效降低误诊率。此外，27例合并淋巴结转移的患者血清HE4水平为268.46（210.50，289.64）pmol/L，明显高于未发生转移者，因此可根据HE4水平变化判断病情程度。简而言之，年龄越大、绝经、淋巴结转移、分化程度越低、深肌层浸润的宫颈癌患者血清HE4水平更高，提示HE4对于宫颈癌的早期诊断、疗效评估的灵敏度均较高。

术前研究预测性生化标志物是指导制订个性化治疗方案的理想途径，鉴于术前基于血清检测可能是侵入性最小、资源占用最少且最具成本效益的方法，因此作为分类工具的意义重大。研究显示，由于FIGO分期固有的不可靠性，单一依据FIGO分期制订治疗方案将会影响治疗效果、生活质量和预后。尤其是年轻的女性群体中，多数患者强烈要求保留其生育能力，增加了治疗和随访护理的难度。因此，除依据FIGO分期外，将血清HE4列为分类工具之一有助于医师术后指导治疗，降低患者的并发症发生率和病死率，改善治疗效果。本研究结果显示，术后5年病死患者的中位HE4水平达341.82 pmol/L，明显高于生存患者，提示在卵巢癌预后评估方面，HE4水平高的患者转归差，表明HE4对患者的预后同样具有预测价值。

综上所述，HE4在宫颈癌患者中水平较高，年龄越大、绝经、淋巴结转移、分化程度越低、深肌层浸润的宫颈癌患者血清HE4水平更高，且病死患者高于生存者，检测其水平变化，可以指导诊断、判断预后。