麝香不同成熟阶段化学成分变化规律

竭 航，张承露，曾德军，赵贵军，封孝兰，雷美艳

（重庆市药物种植研究所，重庆市道地药材规范化生产工程技术研究中心，重庆 408435）

麝香主要由我国一级重点保护濒危野生药用动物林麝Moschus berezovskiiFlerov 雄性个体分泌。据2020 年版《中国药典》 记载，麝香具有开窍醒神、活血通经、消肿止痛的功效［1］。现代研究表明，麝香有抗肿瘤［2-3］、抗炎［4-5］的作用，并对心脑血管系统［6-7］、中枢神经系统［8］等均有显著的影响。麝香的化学成分复杂，但其主要药用成分为大环酮类（麝香酮、降麝香酮等）、吡啶类（麝香吡啶、羟基麝香吡啶等）、甾体类（胆甾醇等）［9］。因此，麝香中化学成分的含量决定了其药用、经济价值。为了探索林麝麝香最佳的采收年限，李硕等［10］采用GC-MS 法探索不同年龄段林麝麝香酮变化规律，结果表明，3 岁林麝麝香质量最高，达2.71%。此外，前人还比较了产地和品种对麝香品质的影响，结果显示，林麝麝香中麝香酮相对含量高于马麝（P＜0.01），而在林麝麝香中以陕西麝香酮含量最高［11］。而在同一年中，随着麝香的成熟，麝香化学成分变化规律尚不得而知。

林麝分泌麝香分为2 个阶段，第一阶段在每年5 月下旬前后，林麝睾丸、香腺开始肿大，继而香腺细胞分泌的初香液顺着导管流入香囊中，大致经过4 周时间，随着初香液越积越多，林麝睾丸和香腺的肿胀逐渐消退，林麝完成泌香反应，此时香囊中为乳白色极具腥臭味的液体。第二阶段为初香液在香囊中经过水分的重吸收等生理生化反应，转化为具有浓烈香气的成熟麝香［12］。鉴于林麝分泌的初香液呈腥臭味，而无麝香特有的香味，提示，在林麝分泌麝香的过程中，麝香中成分种类及含量应该发生了显著的变化。

本研究首次通过“活麝取香”法采集不同成熟阶段麝香，通过GC-MS 法检测其成分的含量，以期为林麝产香机制研究提供理论基础，也对其品质分级和质量的提高起重要作用。

1 材料

1.1 仪器 QP 2010 plus 型气相色谱仪-QP 5000型质谱联用仪（日本岛津公司）；5415R 型冷冻离心机（德国Eppendorf 公司）；BSA124S 型电子分析天平（万分之一，德国Sartorius 公司）；JP-100 型超声波清洗仪（深圳市洁盟清洗设备有限公司）。

1.2 动物 6 头健康成年雄性林麝（3～5 岁）来源于重庆市药物种植研究所林麝养殖基地（海拔678 m），平均体质量6.9 kg。林麝的饲养采用精饲料和青绿饲料相结合的方式，青绿饲料采用西南地区常见的红薯藤Ipomoea batatas和光叶海桐嫩叶Pittosporum glabratum，自由采食；精饲料包括玉米、豆粕、麦麸、食盐、维生素、矿物质等，2 种饲料混合后于每天17：30 饲喂。每天早上清洗水槽，并注满干净饮用水。

1.3 样品 2016 年6 月28 日（阴）早上7：30，通过活麝取香法采集6 头成年雄性林麝少许初香液，-80 ℃下保存，用于主要成分含量测定。同法分别获取8 月26 日、10 月31 日6 头林麝成熟中、已成熟的麝香，最低采集量为1.0 g。

2 方法

2.1 样品干燥 对18 份样品含水量进行检测，每份精密称量300 mg，置于五氧化二磷干燥器中干燥，每隔30 min 精密称定1 次，直至质量恒定。

2.2 样品提取 对18 份样品进行提取，每份精密称量100 mg，分别溶于2.5 mL 无水乙醇（纯度＞99.7%）、2.5 mL 乙醚（纯度＞99.5%）中，超声振荡提取2 h，13 000 r／min 冷冻离心5 min，上清液用于上机检测。

2.3 色谱条件 DB5-MS 石英毛细管柱（0.25 mm×30 m，0.25 μm）；载气高纯度氦气（纯度≥99.99%）；柱压49.5 kPa；体积流量0.9 mL／min；进样量1.0 μL；乙醚、乙醇提取物分流比5∶1、10∶ 1；进样口温度280 ℃；接口温度290 ℃；程序升温（柱温60 ℃保持5 min，10 ℃／min 升至150 ℃并保持5 min，5 ℃／min 升至280 ℃）。

2.4 质谱条件 EI 电离源；电子能量70 eV；离子源温度230 ℃；四级杆温度150 ℃；扫描范围m／z35～1 000。

2.5 数据分析 通过仪器所配置的NIST 08.LIB谱库进行自动检索，结合相似度并参考有关文献色谱保留指数，进行定性。采用Chroma TOF4.3X 软件（LECO Corporation）和LECO-Fiehn Rtx5 数据库分析处理峰图，各物质相对含量为其峰面积与总峰面积的比值。采用SPSS 22.0 软件中的ANOVA过程，进行差异显著性分析。

3 结果

3.1 样品采集 通过人工活麝取香的方法共无菌采集到18 份样品，6 月底呈白色或乳白色豆腐渣状，并散发出腥臭（酸臭／尿骚）味，取香时稍用力可被挤出香囊（初香麝香）；8 月底已变为深棕色固体，多呈块状，散发浓郁香气（成熟过程中的麝香）；10 月底为棕褐色固体，主要呈粉末状，也见部分当门子、块状、银皮，油性较重，亦散发浓郁香气（成熟品）。

3.2 含水量 6 月底采集的白香平均含水量为55.921%，8 月底、10 月底分别为 46.856%、36.029%，见表1。方差分析表明，6 月底麝香含水量高于10 月底（P＜0.05）与8 月底比较差异无统计学意义（P＞0.05）；8 月底与10 月底比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1 不同成熟阶段麝香含水量（，%）Tab.1 Moisture of musk harvested at different maturity stages（，%）

表1 不同成熟阶段麝香含水量（，%）Tab.1 Moisture of musk harvested at different maturity stages（，%）

注：不同小写字母之间代表差异有统计学意义（P＜0.05）。

3.3 成分数量 GC-MS 数据下机后，通过NIST 08.LIB 谱库进行自动检索。结果表明，6 月底采集的白香中检测到55 种成分，8 月底、10 月底分别有83.67、69.67 种，见图1。方差分析表明，随着麝香的成熟，其成分种类呈先升后降的趋势，其中8 月底高于6 月底（P＜0.05），而6 月底与8 月底比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

图1 不同成熟阶段麝香化学成分数量Fig.1 Chemical constituent quantities of musk harvested at different maturity stages

3.4 成分相对含量 6 月底、8 月底、10 月底麝香成分相对含量前20 位的分别占73.92%、85.58%、81.82%，对其作进一步整理分析，结果见表2。由此可知，不同成熟阶段麝香成分变化较大，仅检测到1 种同时存在于3 个阶段中，为2，2′-亚甲基双-（4-甲基-6-叔丁基苯酚）；只在10 月底检测到的成分有11 种，其中烷烃类有8 种；只在6 月底检测到的成分有17 种，包括酯类、酸类等。作为麝香标志性物质的麝香酮，在6 月底麝香中没有检测到，而在8 月底、10 月底其相对含量分别为1.39%、1.21%。此外，在6 月底麝香中没有检测到8-环十六烯-1-酮，而在8 月底、10 月底其相对含量分别达到48.93%、31.87%。

3.5 成分类别 图2 显示，麝香成分主要包括酮类、烷烃类、酯类、酚类、酸类、醇类；6 月底分布较为均衡，8 月底麝香酮类占大多数，10 月底烷烃类、酮类较多；6 月底仅检测到1.75%的酮类，低于8 月底的62.44%、10 月底的38.24%（P＜0.01）；10 月底烷烃类成分相对含量为31.69%，高于6 月底的9.85%、8 月底的11.81%；酯类、酸类、醇类成分相对含量随着时间的推移而降低。

图2 不同成熟阶段麝香中前20 位化学成分类别Fig.2 Categories of top twenty chemical constituents in musk harvested at different maturity stages

4 讨论

麝香中的含水量受遗传、环境及生理阶段的影响较大。根据泌香的生理过程，在泌香期水分含量应最大，随着水分的重吸收及麝香的发酵，到秋冬季节麝香应为最干燥的时间［13］。本研究中3～5 岁

林麝10 月底麝香的平均含水量为36.03%，基本达到2020 年版《中国药典》 对麝香含水量的要求，且远远低于文献［14］的研究结果，由于文献中麝香样品来源于陕西凤县，本研究麝香样品来源于重庆南川，这与课题组前期观察比较发现的陕西凤县麝香通常较湿的现象一致。本研究结果表明随着时间的推移，麝香含水量逐渐下降，这与林麝的泌香生理过程相吻合。

表2 不同成熟阶段麝香中前20 位化学成分相对含量Tab.2 Relative contents of top twenty chemical constituents in musk harvested at different maturity stages

麝香名字的由来为“香气如射”，在雄性林麝交配期起到吸引异性和标记领域的作用［15-16］，主要成分包括大环酮类、甾体类、多肽类、酸类、酯类等，其中麝香酮为其重要活性成分及香气来源［17-18］。据惠岑怿［19］的检测结果表明，相对于成熟马麝麝香1.31% 的麝香酮含量而言，未成熟马麝麝香中麝香酮含量只有0.76%，这个结果与麝类的泌香规律相符合。课题组推测，麝香酮及8-环十六烯-1-酮的生成很有可能是在林麝分泌香液后的成熟过程中产生，也就是这个原因，造成了在初香液并不具备麝香特有的香味，而是具有浓烈的腥臭味。

由于林麝属于国家一级保护野生动物，生性胆小，应激性很强，本研究只采集了6 头林麝的麝香样品，且试验林麝无法避免在遗传上的差异性，再加之麝香样品具有一定的黏滞性，不能完全混合均匀，这对样品的代表性具有一定的影响。另外，麝香成分复杂，6 月份麝香中的化学成分是通过哪些代谢通路最后变成成熟麝香，在初香液分泌后，是否还有其他化学成分分泌，有待进一步深入研究。