2020 年山东省春季口蹄疫和高致病性禽流感免疫抗体检测

宋德武，王贵升，牛志远，李玉杰，陈 静，马慧玲，邢琳琳，徐 聪

（1.张店区畜牧事业服务中心，山东淄博 255000；2.山东省动物疫病预防与控制中心，山东济南 250000）

重大动物疫情不仅可造成巨大经济损失，还对公共卫生安全造成威胁。目前对动物实施免疫是控制重大动物疫病最科学、最有效的措施之一，而制定合适的免疫方案和开展有效的免疫抗体监测是做好动物免疫的重要保障[1-2]。开展免疫抗体监测，及时了解免疫抗体水平，对科学评估动物疫病防控效果，从而为政府制定科学的动物疫病预防控制规划和预警提供依据具有十分重要的意义[3-4]。《2020年山东省动物疫病强制免疫计划及实施方案》要求，口蹄疫（FMD）、高致病性禽流感（HPAI）群体免疫密度应常年维持在90%以上，其中应免畜禽免疫密度应达到100%，免疫抗体合格率全年保持在70%以上。山东省春季动物疫病强制集中免疫在每年的4 月初开始，5 月底结束。为了解山东省FMD、HPAI 等重大动物疫病的春季集中免疫效果，开展了本次血清抗体检测，以期为下一步做好重大动物疫病科学防控提供参考。

1 材料与方法

1.1 样品采集

按照兽医流行病学抽样数量计算中发现无疫或证明无疫的样本量计算[5]，预设置信水平95%、试验敏感性95%、预定流行率10%，按不同畜禽种类采样。2020 年上半年，从每个地市随机抽取1 个农业县，每个农业县随机选择牛、羊、猪、陆禽、水禽、家禽养殖场及屠宰场进行血清采样。区级动物疫病控制中心完成本辖区的样品采集送样工作，省、市两级指派专业技术人员共同组成工作组负责指导监督。本次检测共采集16 个市98 个场（户）的2 909 份血清样品。

1.2 检测与结果判定

1.2.1 FMD 按照《口蹄疫诊断技术》（GB/T 18935—2018），采用液相阻断ELISA 方法进行O 型和A 型抗体检测。试剂盒均由中国农科院兰州兽医研究所生产，批号分别为20191128133 和20190701134。检测操作和结果判定，均按照各说明书进行。

1.2.2 HPAI 按照《高致病性禽流感诊断技术》（GB/T 18936—2003），采用血凝抑制试验（HI）方法进行H5 亚型（Re-11、Re-12）和H7 亚型抗体检测。各亚型抗原均由哈尔滨国生生物科技股份有限公司生产，批号分别为20191012、20191014和20190415。检测操作按标准GB/T 18936—2003执行，抗体效价≥24判为合格。

2 结果与分析

2.1 FMD

对51 个家畜养殖场（户）的1 500 份血清样品（牛480 份、羊480 份、猪540 份）进行O 型抗体检测，检出合格样品1 256 份，样品抗体合格率为83.73%，免疫合格场（户）43 个，场免疫合格率为84.31%；对16 个牛养殖场（户）的480 份牛血清样品进行A 型FMD 抗体检测，检出合格抗体372 份，样品抗体合格率为77.5%，免疫合格场11 个，场免疫合格率为68.75%。

从不同畜群检测结果（表1）看，牛O 型抗体样品合格率最高（90.83%），其次是猪（82.59%），羊最低（77.92%），但差异不显著（P＞0.05），场群合格率均在80% 以上。从牛不同血清型抗体检测结果（表2）看，O 型抗体样品合格率（90.83%）和场合格率（87.50%）均大于A 型（77.69%、68.75%），抗体样品合格率差异显著（P＜0.05）。从不同区域检测结果（表3）看，胶东半岛无疫区抗体合格率均在95% 以上，普遍高于其他地区（77.18%～87.78%），差异显著（P＜0.01）。

表1 不同畜种O 型FMD 抗体检测结果

表2 牛场O 型和A 型FMD 抗体检测结果

表3 不同区域FMD 抗体检测结果

2.2 HPAI

对47 个禽养殖场、屠宰场（19 个鸡养殖场、12 个鸡屠宰场、13 个鸭养殖场、3 个鸭屠宰场）的1 409 份血清样品（鸡930 份、鸭479 份）进行抗体检测，检出H5 亚型（Re-11）抗体合格样品1 088 份，抗体样品合格率为77.22%，检出合格场（户）36 个，场免疫合格率为76.59%；检出H5亚型（Re-12）抗体合格样品1 094 份，抗体样品合格率为77.64%，检出合格场（户）37 个，场免疫合格率为78.72%；检出H7 亚型抗体合格样品1 095 份，抗体样品合格率为77.71%，检出合格场（户）36 个，场免疫合格率为76.59%。不同亚型抗体样品合格率差异不显著（P＞0.05）。

从不同场点检测结果（表4）看：鸡养殖场的抗体样品合格率最高，3 种亚型的抗体合格率均为100%，而鸡屠宰场合格率最低，均为33.33%；鸭养殖场和屠宰场的抗体样品合格率均在78%以上。从不同区域检测结果（表5）看，胶东半岛无疫区各亚型抗体样品合格率均在99%以上，而其他地区为90.13%～91.64%，差异显著（P＜0.01）。

3 讨论

3.1 全省整体免疫抗体水平

从检测结果看，被检测场（户）的FMD 和HPAI 免疫抗体合格率均在70%以上，达到了农业农村部要求的不低于70%的标准，表明全省春季集中免疫工作达到预期目标。山东省自2019 年开始全面推进FMD 和HPAI 免疫无疫区建设，在这两种重大疫病防控上投入大量人力、物力，不断健全防疫队伍体系与动物疫病预防体系，深入推进强制免疫“先打后补”政策，使得养殖场（户）对FMD 和HPAI 的防控更加重视，因而取得了理想的免疫效果。

表4 47 个禽养殖场/屠宰场禽流感抗体检测结果

表5 不同区域养殖场HPAI 抗体检测结果

3.2 FMD 免疫效果

牛、羊、猪O 型FMD 免疫抗体合格率均符合国家规定要求，不同畜种间FMD 免疫抗体合格率差异不显著。但有2 家羊场、1 家猪场免疫抗体合格率为0，这可能与免疫程序不合理、操作不规范、免疫密度低等原因造成的免疫失败有关。16 家牛场的O 型FMD 免疫效果明显优于A 型。这16 家牛场都采用O 型、A 型二价灭活疫苗免疫，免疫程序基本一致，因此怀疑牛对二价疫苗中O 型免疫应答要优于A 型，需要进一步优化二价灭活苗免疫效果。

3.3 HPAI 免疫效果

47 个禽养殖场/屠宰场的H5 亚型（Re-11、Re-12）和H7 亚型抗体合格率差异不显著，H5 亚型禽流感（Re-11）与H7 亚型抗体不合格场完全一致。利用Excel 中CORREL 函数计算32 个禽养殖场H5 亚型两种毒株免疫抗体合格率相关性，结果为0.997，说明养殖场的鸡和鸭对同亚型、不同毒株的免疫应答差异很小。但由于数据有限，可能结果存在片面性，需今后进一步论证。

免疫抗体合格率的总体趋势为鸡养殖场＞鸭养殖场＞鸭屠宰场＞鸡屠宰场。调查表明，鸡养殖场均为蛋鸡场，鸭养殖场为肉鸭场，鸡屠宰场为肉鸡屠宰场。蛋鸡场饲养周期长、免疫次数多，且高度重视免疫预防工作，因而免疫保护水平一直维持较高水平[6]；而肉鸭养殖场，一般只免疫1 次且免疫相对不规范，因此低于鸡养殖场，但免疫合格率也在80%以上，况且鸭屠宰场抗体免疫合格率也高于70%，表明鸭养殖场整体免疫合格，可以提供整体免疫保护。12 家肉鸡屠宰场中有8 家免疫抗体合格率为零，其主要原因可能是肉鸡场没有进行HPAI 免疫，或免疫密度不够、免疫程序不合理，因此须引起重视，进一步关注疫情暴发风险。

3.4 免疫无疫区建设效果显著

胶东半岛免疫区FMD 和HPAI 免疫抗体水平明显优于其他地区，且所有免疫抗体样品合格率都在95%以上，说明通过无疫区建设，建立健全动物防疫体系，提高基层防疫队伍素质，可显著提高重大动物疫病防控水平，这为推进全省免疫无疫区建设提供了有力支撑。

4 结论

检测分析发现，山东省FMD 和HPAI 免疫效果较好，达到了农业农村部要求的标准，其中胶东半岛无疫区免疫效果更好，表明山东省春季FMD和HPAI 集中免疫工作达到预期目标，胶东半岛无疫区建设成果显著。但有个别养殖场免疫效果不佳，提示应进一步提高免疫密度，加强监测和免疫，尤其是肉鸡养殖场，继续推动全省免疫无疫区建设。